miR-449b-5p通过靶向Cyclin E2 抑制卵巢癌细胞生长和细胞周期进展

目的:探讨miR-449b-5p对卵巢癌细胞生长的作用和机制。方法:选取2018年6月至2020年6月于四川省人民医院妇产科接受手术的20例卵巢癌患者的癌组织和癌旁组织,以及正常卵巢上皮细胞系HOSEpiC和6种人宫颈癌细胞系SKOV3、ES-2、OVCAR-3、HO8910、CaOV-3和A2780,用qPCR检测卵巢癌组织和细胞中miR-449b-5p与CCNE2 mRNA的表达。将miR-NC、miR-499b-5p mimic、miR-499b-5p inhibitor、pc-CCNE2质粒分别或联合转染进入SKOV3细胞,通过CCK-8法测定细胞生长,流式细胞术检测细胞周期,WB法检测CCNE2蛋白的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-449b-5p与CCNE2的靶向关系。裸鼠皮下注射转染miR-499b-5p mimic的SKOV3细胞悬液构建移植瘤模型,每周检测移植瘤体积,第42天处死,电子天平称皮下肿瘤重量,免疫组化法检测移植瘤组织中CCNE2和Ki67的表达。结果:与正常卵巢组织和上皮细胞系HOSEpiC相比,miR-499b在人宫颈癌组织和细胞系SKOV3、ES-2、OVCAR-3、HO8910、CaOV-3和A2780中表达明显下调(P<0.01)。与Control组相比,miR-499b mimic组SKOV3细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01);miR-499b inhibitor组SKOV3细胞增殖水平升高(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.01)。miR-499b-5p高表达明显抑制了含有野生型CCNE2质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对突变型CCNE2质粒的荧光素酶活性无影响。与miR-499b mimic组相比,miR-499b mimic+pc-CCNE2组SKOV3细胞生长明显增加(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-499b mimic组裸鼠移植瘤体积明显变小(P<0.01),瘤质量明显减轻(P<0.01),CCNE2和Ki67阳性细胞明显减少(P<0.01)。结论:miR-449b-5p通过靶向Cyclin E2抑制卵巢癌细胞生长和细胞周期进展。

结肠癌组织微小RNA-3607-3p、细胞周期蛋白E2表达及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨结肠癌组织微小RNA-3607-3p(miR-3607-3p)、细胞周期蛋白E2(CCNE2)表达及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行结肠癌根治术治疗的88例结肠癌患者癌组织和癌旁组织。RT-qPCR法测定组织miR-3607-3p、CCNE2 mRNA表达。免疫组化法检测组织CCNE2蛋白表达。随访术后5年内结肠癌患者生存情况,根据生存情况将患者分为生存组(48例)和病死组(40例)。分析miR-3607-3p、CCNE2 mRNA与TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移的相关性。Cox回归分析结肠癌患者术后5年预后的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-3607-3p、CCNE2 mRNA对患者术后5年内生存的预测价值。结果:结肠癌组织miR-3607-3p表达水平低于癌旁组织,CCNE2 mRNA表达水平和CCNE2蛋白阳性表达率高于癌旁组织(均P<0.05)。miR-3607-3p低表达和CCNE2 mRNA高表达患者TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移的占比更高(均P<0.05)。结肠癌组织miR-3607-3p与CCNE2 mRNA、TNM分期、淋巴结转移呈负相关,与肿瘤分化程度呈正相关(均P<0.05)。CCNE2 mRNA与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。miR-3607-3p高表达、CCNE2 mRNA低表达患者5年总生存率高于miR-3607-3p低表达、CCNE2 mRNA高表达患者(均P<0.05)。病死组TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移的患者占比更高(均P<0.05)。病死组结肠癌组织CCNE2 mRNA和蛋白阳性表达率高于生存组,miR-3607-3p低于生存组(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、miR-3607-3p低表达、CCNE2 mRNA高表达、CCNE2蛋白阳性表达是影响结肠癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。结肠癌组织miR-3607-3p、CCNE2 mRNA两者联合预测患者术后5年内生存的曲线下面积(AUC)高于miR-3607-3p、CCNE2 mRNA单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:结肠癌组织miR-3607-3p呈低表达,CCNE2呈高表达,两者与患者术后5年预后有关,有望成为结肠癌患者术后5年内生存的预测指标。

CyclinE2和Survivin在急性白血病的表达及其相关性(英文)

为了解细胞周期蛋白E2(cyclinE2)和存活蛋白(survivin)在急性白血病中基因表达及两者间的相关性,采用逆转录-聚合酶链反应的方法检测了84例成人急性白血病患者(16例复发患者,60例初治患者和8例持续缓解患者)和20例正常人的cyclinE2和survivinmRNA的表达。结果表明:①cyclinE2在急性白血病中表达的阳性率(70.24%)高于对照组(0%);survivin在急性白血病中表达的阳性率(72.62%)高于对照组(30%);②在急性白血病中cyclinE2的表达与survivin的表达呈正相关性,r=0.65;③cyclinE2阳性组缓解率(55.81%)低于cyclinE2阴性组(88.24%),cyclinE2阳性组复发率(41.67%)高于阴性组(20%);复发组cyclinE2表达率在三组中最高,持续缓解组cyclinE2表达率在三组中最低,④cyclinE2在急性髓系白血病患者表达率(59.32%)低于急性淋巴细胞白血病患者的表达率(96%);与发病时白细胞计数未见有统计学意义的相关。结论:首次证实cyclinE2在急性白血病中有异常表达,且对临床预后有不良影响;cyclinE2在急性白血病中的表达与survivin有正相关,提示cyclinE2在急性白血病中有可能作为一种微小残留病变的检测指标。

miRNA-449家族靶向CCNE2对胃癌细胞生长的抑制调节作用

目的研究miRNA-449在胃癌细胞中对细胞增殖、凋亡的影响,以及对靶基因CCNE2(cyclin E2)表达的影响。方法荧光定量PCR检测人低分化胃癌细胞株BGC823瞬时转染miRNA-449a/b及抑制剂后的表达;流式细胞术分析转染后细胞凋亡变化。Western blot检测miRNA-449a/b对靶基因表达的影响。结果在转染后,miRNA-449a/b组在48、72h对肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05),miRNA-449a/b组对肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用(P<0.05),对CCNE2蛋白表达有显著抑制作用(P<0.05)。结论 miRNA-449a/b可能通过CCNE2来发挥其抑制胃癌细胞生长的作用。

细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系

从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)

细胞周期蛋白E2基因mRNA在胃癌组织中的表达

目的了解细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)基因mRNA在胃癌组织中的表达情况及Cyclin E2与临床肿瘤病理的关系,探讨Cyclin E2在胃癌发生、发展、侵袭与转移中的作用。方法收集40例手术切除并经病理检查证实的胃癌组织标本,用于RNA提取。按Lauren方案分为肠型胃癌11例,弥漫型胃癌29例;按有无胃周围淋巴结转移分为转移组28例,非转移组12例。临床分期采用UICC的TNM方案,Ⅰ、Ⅱ期13例,Ⅲ、Ⅳ期27例。用RT-PCR法检测胃癌组织Cyclin E2基因mRNA表达。结果肿瘤组织表达Cyclin E2 mRNA均明显高于正常对照组织(P<0.05)。在肿瘤组织中可见Cyclin E2 mRNA在有淋巴结转移的肿瘤组织表达明显高于非淋巴结转移的肿瘤组织(P<0.01),TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者Cyclin E2 mRNA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.05)。肿瘤组织中Cyclin E2 mRNA表达与性别及Lauren分型无关(P>0.05)。结论Cyclin E2基因可能促使胃癌转移,其表达水平可能有助于临床分期。

戊四氮致痫大鼠皮质和海马内GFAP、cyclin D1及脑和脑脊液17β-雌二醇和孕酮浓度变化

目的研究癫痫发作后脑和脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化。方法将雌性SD大鼠随机分为戊四氮(PTZ)致痫组和生理盐水对照组。(1)用免疫组织化学方法观察大鼠大脑皮质和海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化;(2)用Western blot方法检测大鼠大脑皮质和海马细胞周期素D1(cyclin D1)表达的变化;(3)采用放免法测定大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化。结果免疫组织化学染色结果显示癫痫发作4h后在海马CA3区、CA1区和皮质内GFAP免疫反应明显增强(P<0.05);Western blot结果显示癫痫发作2h后cyclin D1的表达在皮质和海马均较对照组明显增强(P<0.05);放射免疫分析结果显示,癫痫发作后,皮质、海马和脑脊液的17β-雌二醇的浓度有不同程度增高,致痫8h后恢复正常,孕酮的浓度在皮质和脑脊液则呈下降趋势。结论戊四氮致痫时皮质及海马内星形胶质细胞激活、增殖,内源性雌激素合成增多,同时孕酮浓度降低,说明雌性激素在癫痫的形成和维持中发挥作用。

茶多酚联合莱菔硫烷对肺癌组织蛋白激酶A锚定蛋白95和细胞周期蛋白E2表达的影响

目的探讨茶多酚联合莱菔硫烷对肺癌组织中蛋白激酶A锚定蛋白95和细胞周期蛋白E2表达的影响。方法选取经病理证实并手术治疗的肺癌患者56例,随机分为联合给药组和对照组,每组28例。采用ELISA测定所有患者肺组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2的含量;免疫组化SP法测定组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2的表达并统计微血管密度(microvascular density,MVD);Western Blot检测组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2蛋白表达情况。结果对照组肺癌患者组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2的含量均高于联合给药组,差异有统计学意义(P<0.01);免疫组化SP法结果显示肺癌患者癌变组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2的表达均呈阳性表达,且对照组织中MVD高于联合给药组(P<0.01);Western Blot结果显示对照组组织中蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2蛋白表达高于联合给药组(P<0.01)。结论蛋白激酶A锚定蛋白95及细胞周期蛋白E2在肺癌患者组织中均存在表达升高现象,2者表达呈正相关,与药物治疗呈负相关,可以作为肺癌的评估检测指标。

雌激素通过钙蛋白酶上调P21/CCNE2 mRNA表达并促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力

目的探讨17β-雌二醇(E2)对乳腺癌细胞mRNA表达,观察E2侵袭的分子信号机制。方法以乳腺癌细胞MCF-7为观察模型,用RT-PCR检测目的基因周期抑制蛋白P21和周期蛋白E2(CCNE2)mRNA的表达;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;蛋白印迹法检测蛋白表达;采用化学抑制剂或基因沉默法抑制胞内钙蛋白酶(CANP)活性。结果 E2(10 nmol/L)可刺激P21和CCNE2 mRNA表达显著增加(P<0.01);CANP抑制剂calpeptin(10μmol/L)或MEK抑制剂PD98059(10μmol/L)对E2诱导的P21和CCNE2 mRNA上调均有显著抑制作用(P<0.01);E2刺激细胞侵袭能力明显增强(P<0.01),而基因沉默CANP2明显抑制E2对CANP的激活及E2诱导的细胞侵袭效应(P<0.01)。结论 E2可通过激活胞内CANP诱导乳腺癌细胞P21和CCNE2 mRNA表达上调并促进细胞侵袭,提示CANP可能为抑制乳腺癌转移的一个潜在药物靶点。

细胞周期蛋白E2在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:研究细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织Cyclin E2蛋白和mRNA的表达。结果:Cyclin E2蛋白在NPC和鼻咽非肿瘤组织中的表达率分别为75%(45/60)和9.5%(2/21),两者相比有统计学意义(P<0.01);鼻咽癌组织中Cyclin E2蛋白的过表达对同年龄、性别的患者无统计学差异(P>0.05),但与淋巴结转移、分期和5年生存率有相关性(P<0.01)。鼻咽癌组与对照组相比,Cyclin E2 mRNA表达亦有统计学差异(P<0.01)。结论:Cyclin E2表达对判断鼻咽癌病变进展、生存率及转移有重要参考价值。

脑胶质瘤中UBE2S和CCNB1的表达及临床意义

目的:研究脑胶质瘤中细胞周期蛋白B1(CCNB1)和泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达及临床意义。方法:选取本院2015年1月至2019年4月本院手术切除的脑胶质瘤组织标本106例,取114例脑出血或外伤进行颅内减压的患者脑组织标本作为对照组。采用免疫印记(WB)法测定受试者脑组织中CCNB1和UBE2S表达水平,分析二者表达水平与脑胶质瘤临床病理特征的关系,对所有术后患者进行随访,探究二者表达水平对脑胶质瘤患者预后的影响。结果:低级别脑胶质瘤组和高级别脑胶质瘤组CCNB1和UBE2S表达水平显著高于对照组(P<0.05),高级别脑胶质瘤组CCNB1和UBE2S表达水平明显高于低级别脑胶质瘤组(P<0.05)。CCNB1和UBE2S在脑胶质瘤组织中的表达水平与患者的年龄、性别、病理学类型无关(P>0.05),与肿瘤的组织分化程度、瘤周水肿、浸润程度有关(P<0.05)。Pearson法分析结果表明,脑胶质瘤组织中CCNB1和UBE2S表达水平呈正相关(r=0.460,P<0.05)。CCNB1高表达、UBE2S高表达脑胶质瘤患者术后中位生存时间均显著短于CCNB1低表达、UBE2S低表达患者(P<0.05)。COX多因素分析表明,组织低分化、CCNB1高表达、UBE2S高表达是影响脑胶质瘤患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:CCNB1和UBE2S在脑胶质瘤组织中表达水平显著升高,与脑胶质瘤组织分化程度、瘤周水肿、浸润程度及术后生存时间有关,可能成为评定脑胶质瘤患者预后的临床指标。

细胞周期蛋白E2反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的调控作用

目的研究细胞周期蛋白E2(cyclin E2)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对人红白血病细胞K562增殖的调控作用。方法采用反义技术合成ASON并与K562细胞共培养。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染ASON和脂质体lipofectamineTM2000后的细胞活力,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测转染细胞cyclin E2mRNA表达水平及流式细胞术和形态学观察检测细胞凋亡。结果 Cyclin E2特异的ASON能显著地抑制cyclin E2mRNA水平的表达(F=26.442,P<0.01);白血病细胞的生长明显受抑制(P<0.01),细胞凋亡明显增加。结果表明反义脱氧寡核苷酸能有效地抑制K562细胞的增殖,抑制K562细胞cyclin E2mRNA表达上调,并显著地诱导细胞凋亡。结论脂质体转染cyclin E2的反义寡核苷酸能够有效地抑制K562细胞cyclin E2mRNA的表达,同时对白血病细胞K562的生长有明显的抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡。提示cyclin E2在细胞周期调控中起作用,cyclinE2基因有望作为反义技术治疗急性白血病中的一个较有意义的新靶点。

肺癌组织中AKAP95和cyclinE2蛋白表达的临床意义及与Cx43蛋白的关联性分析

目的研究蛋白激酶A锚定蛋白95（A-kinase anchor protein 95，AKAP95）、细胞周期蛋白E2（cyclin E2）和细胞间隙连接蛋白43（Connexin 43，Cx43）在肺癌组织中的表达情况及其临床意义，分析3种蛋白之间的关联性，对照组为15例肺癌患者手术时切取的距离癌组织3cm以上的癌旁组织。方法应用免疫组化方法检测51例肺癌组织中AKAP95、cyclin E2和Cx43蛋白的表达。结果1．AKAP95蛋白在肺癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁组织，阳性率分别为82．35％和33．33％（P〈0．05）；其表达与肺癌组织的分化程度、病理组织学分型有关（P〈0．05）；2．cyclin E2蛋白在肺癌中的表达水平明显高于癌旁组织，阳性率分别为43．14％和13．33％（P〈0．05）；其表达与病理组织学分型和淋巴结是否发生转移有关（P〈0．05）；3．Cx43蛋白在肺癌组织表达的阳性率60．78％，低于其在癌旁组织的表达阳性率（80．00％），Cx43蛋白表达与肺癌分化程度、病理组织学分型和淋巴结是否发生转移之间有关（P〈0．05）；4．AKAP95和cyclin E2、AKAP95和Cx43、cyclin E2和Cx43在肺癌组织中的表达均有关联性（P〈0．05）。结论1．AKAP95和cyclin E2蛋白高表达在肺癌的发生发展中发挥作用；2．AKAP95蛋白表达与肺癌的分化程度和病理组织学分型有关；cyclin E2表达与组织学分型和有无淋巴结转移有关；3．AKAP95和cyclin E2、AKAP95和Cx43、cyclin E2和Cx43蛋白在肺癌组织中均呈关联性表达。

LINC00337促进肺腺癌细胞增殖

近年来,长非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)在肺腺癌发生发展中的作用备受关注。生物信息学预测,长非编码RNA337(LINC00337)在肺腺癌组织中的表达量显著高于其在正常组织中的表达量,且其高表达与患者较差的预后正相关。qRT-PCR结果发现,LINC00337在肺腺癌细胞中的表达量也高于正常肺上皮细胞:LINC00337在肺腺癌细胞H1975和A549中的表达量分别是其在正常肺上皮细胞BEAS-2B中的2. 6和10. 3倍。在肺腺癌细胞中,上调LINC00337将增加细胞周期蛋白E2 (cyclin E2,CCNE2)的表达,进而促进该细胞增殖;相反,敲低LINC00337将抑制CCNE2的表达,最终阻止肺腺癌细胞增殖。生物信息学预测结合染色质沉淀实验证实,信号转导和活化转录因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)可结合在CCNE2启动子上,下调其表达。在H1975细胞中,过表达STAT1可下调57. 76%的CCNE2。在此细胞中,同时过表达STAT1和敲低LINC00337,发现该组细胞的CCNE2表达量增加1. 62倍。相反,在A549细胞中敲低STAT1,发现CCNE2可增加6. 48倍表达量。但在此细胞中,同时敲低STAT1和过表达LINC00337,则发现该组细胞的CCNE2表达量无变化。上述结果提示,LINC00337对CCNE2的调控需要STAT1的存在。总之,LINC00337通过转录因子STAT1调控CCNE2表达促进肺腺癌细胞增殖。

细胞周期蛋白E2在下咽癌中的表达及其意义

目的观察细胞周期蛋白E2在下咽癌组织中的表达水平及其与临床病理特征及预后的相互关系。方法免疫组化法检测50例下咽癌肿瘤组织及相应的正常黏膜组织中细胞周期蛋白E2的表达水平,分析其与临床特征及生存率的相互关系,结果采用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果细胞周期蛋白E2在下咽癌组织中的表达较正常黏膜组织明显增加(Z=-5.764,P=0.000),且其表达程度与肿瘤的临床分期(Z=-1.995,P=0.046)、淋巴结转移(Z=-2.176,P=0.030)相关。肿瘤组织中细胞周期蛋白E2表达阳性患者5年生存率为40.2%,阴性表达患者5年生存率为81.8%。细胞周期蛋白E2表达水平高的患者生存率明显降低(χ2=6.317,P=0.012)。结论细胞周期蛋白E2在下咽癌肿瘤组织中的异常表达提示其可能参与了肿瘤的发生发展,并有可能成为下咽癌的诊断、治疗与预后的分子标志物之一。

莱菔硫烷联合茶多酚对蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2在肺癌组织中表达的影响研究

目的探讨莱菔硫烷联合茶多酚对肺癌组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的表达的影响。方法选取经病理证实并手术治疗的肺癌患者56例,随机分为治疗组和对照组。采用ELISA测定组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的浓度,免疫组化法测定组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的表达并统计微血管密度(MVD),Western blotting法检测组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2蛋白表达情况。结果肺癌患者组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的浓度水平高于治疗组(P<0.05);肺癌患者癌变组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的表达均呈阳性,且对照组织中MVD高于治疗组(P<0.05),Western blotting法检测对照组组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2表达高于治疗组(P<0.05)。结论蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2在肺癌患者组织中均存在表达升高,与肿瘤生长呈正相关,莱菔硫烷联合茶多酚用药对两种蛋白起到抑制作用。