Cyclin/CDK——复制前复合物途径对细胞周期的调控

细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK),复制前复合物(Pre-RC)是细胞周期调控的重要分子,三者形成cyclin/CDK-Pre-RC调控途径,在细胞周期中相互作用,共同完成对细胞周期的精密调控。通过对这一途径的阐释,将会推动临床研究并开拓出更广阔的应用空间。

贝母素乙通过下调CDK2/CDK4/CDK6和cyclin D1表达抑制人结肠腺癌SW480细胞活力

目的:探究贝母素乙(peiminine)对人结肠腺癌细胞(SW480)活力、迁移和侵袭的抑制作用并探讨其抑制SW480增殖的作用机制。方法:用不同剂量的贝母素乙处理人结肠腺癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,通过CCK-8实验确定贝母素乙抑制SW480活力的最适剂量和最佳作用时间;划痕和Transwell实验检测贝母素乙对SW480迁移与侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot检测贝母素乙对SW480细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响;构建SW480移植瘤裸鼠模型,在体内分析贝母素乙对SW480活力及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,当贝母素乙作用浓度为110 mg/L时能够显著抑制SW480细胞活力、迁移和侵袭能力(P<0.01),并诱导SW480细胞周期G1期阻滞,周期相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p-Rb/Rb、E2F1、E2F3和E2F4的表达水平受到显著抑制(P<0.05);在体内,贝母素乙抑制SW480移植瘤的活力、延长荷瘤裸鼠的生存周期,影响肿瘤组织中CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达。结论:贝母素乙通过下调CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达,引起SW480细胞的G1期阻滞,进而抑制人结肠腺癌细胞SW480增殖。

二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

miR-567通过调控CDK8在NSCLC增殖、迁移和细胞周期中的作用及其临床相关性研究

目的探讨微小RNA(miR)-567通过调控周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、迁移和细胞周期中的作用及其临床相关性研究。方法收集40例NSCLC患者的肿瘤组织和临近癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-567和CDK8的表达。将miR-NC mimic、miR-567 mimic、oe-NC和oe-CDK8转染至A549和H1975细胞中,使用qRT-PCR检测miR-567和CDK8的表达,CCK-8法检测细胞增殖水平,Transwell法检测细胞迁移水平,流式细胞术检测细胞周期变化。通过荧光素酶报告基因实验检测miR-567与CDK8的靶向性。结果在NSCLC患者的肿瘤组织中,miR-567表达降低,而CDK8表达升高,二者呈负相关(P<0.05)。在A549和H1975细胞中,miR-567 mimic组相较于miR-NC mimic组,miR-567表达升高,CDK8表达降低,细胞增殖和迁移水平降低,细胞G1期比例升高,S期比例降低;miR-567 mimic组在正常型CDK8中,荧光强度低于miR-NC mimic组;miR-567 mimic+oe-CDK8组相较于miR-567 mimic+oe-NC组,CDK8表达升高,细胞增殖和迁移水平升高,细胞G1期比例降低,S期比例升高。结论miR-567通过靶向抑制CDK8表达,控制肿瘤细胞在S期阻滞,从而抑制NSCLC的增殖和迁移能力。

c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中c-Myc、细胞周期蛋白依赖性激酶12(CDK12)表达及其与患者临床特征及预后的关系。方法 收集80例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测标本中的c-Myc、CDK12表达水平。比较胃癌组织和癌旁组织中c-Myc、CDK12阳性表达情况;分析胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与患者临床病理特征的关系;分析c-Myc与CDK12阳性表达的相关性,胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率(77.5%、87.5%)均明显高于癌旁组织(13.8%、15.0%)(P<0.05)。不同年龄、性别、肿瘤最大直径患者胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);中低分化、Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、有淋巴结转移患者胃癌组织中c-Myc和CDK12阳性表达率分别为88.0%、87.0%、88.9%、90.0%和94.0%、92.6%、97.2%、100.0%,均明显高于高分化、Ⅰ~Ⅱ期、未侵犯浆膜、无淋巴结转移患者胃癌组织的60.0%、57.7%、68.2%、70.0%和76.7%、76.9%、79.5%、80.0%(P<0.05)。相关分析发现,c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达呈正相关性(r=0.487,P=0.016<0.05)。胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性患者的3年生存率分别为19.4%、21.4%,均明显低于c-Myc、CDK12阴性患者的55.6%、70.0%(P<0.05)。结论 c-Myc、CDK12在胃癌组织中异常高表达,两者呈正相关性,并与肿瘤的TNM分期、分化程度、肿瘤侵袭深度及淋巴结转移有关,对患者的预后有明显影响,通过检测两者水平可能评估胃癌患者的预后。

胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性

目的探讨胃癌模型大鼠胃黏膜组织细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性。方法选择48只健康成年雌性大鼠,按照随机数字表法将其分为对照组、研究1组、研究2组、研究3组,每组各12只。研究1组、研究2组、研究3组均制备成胃癌模型。对照组给予等量0.9%氯化钠溶液,第24周处死取材;研究1组、研究2组、研究3组制备成胃癌大鼠后分别于第8、16、24周取材。分析各组大鼠一般情况及胃黏膜组织病理切片,采用蛋白质印迹法检测胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA的表达,采用Spearman分析法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度相关性。结果对照组大鼠胃黏膜完整正常,外膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层等结构清晰,且无炎症细胞浸润;研究1组大鼠胃黏膜组织与对照组大鼠接近,不存在炎症细胞,且黏膜腺体结构基本正常;研究2组大鼠胃黏膜组织存在破损,细胞核变大,基底部部分腺体细胞形态异常,存在轻度异型性,为早期胃癌;研究3组大鼠胃黏膜组织增加破损,核质比变大,细胞形态不规则,部分腺体存在扩张,黏膜下层及肌层存在炎症细胞浸润,为胃癌进展期。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。采用Spearman相关性结果分析显示,胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度呈正相关(r=0.382、0.781、0.993,均P<0.001)。结论胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT呈高表达,其与胃癌病变程度密切相关。

Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平预测慢性鼻窦炎-鼻息肉术后复发的临床研究

目的探究Cyclin D1、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达含量联合中性粒细胞/淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte Ratio,NLR)和血小板/淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte Ratio,PLR)水平预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps,CRSwNP)复发的临床加价值。方法选取广东省韶关市粤北人民医院耳鼻喉科于2021年1月—2022年6月收治的333例CRSwNP患者为研究对象,均行慢性鼻窦炎-鼻息肉术治疗,根据术后复发情况分为复发组(138例)和未复发组(195例),比较两组患者一般资料、Cyclin D1、VEG、NLR、PLR水平,采用受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平对CRSwNP者术后1年复发的预测效能。结果两组Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平对比,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CRSwNP患者复发的影响因素包括Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平(OR=1.521、1.483、1.365、1.403,P均<0.05)。ROC曲线结果显示Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR四者联合检测的灵敏度、特异度及曲线下面积均高于单独检测(P均<0.05)。结论Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平是诱发CRSwNP患者术后复发的相关因素,也是预测CRSwNP患者术后复发的可靠性指标。

Cyclin D1在黄芪甲苷诱导BMSCs向神经元样细胞分化中的表达

目的:研究黄芪甲苷诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化的特点和诱导过程中Cyclin D1的表达特点。方法:采用100 mg·L^(-1)黄芪甲苷诱导BMSCs分化,在1、12、24 h倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法观察巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、Cyclin D1的表达,RT-PCR检测Cyclin D1 mRNA的表达。结果:收集获得的骨髓细胞采用原代和传代培养,至第3代BMSCs细胞基本纯化。经100 mg·L^(-1)黄芪甲苷作用后,部分细胞自胞体长出突起,形态似神经元样细胞且表达Nestin和NSE抗体,Nestin的表达时相早于NSE且表达强度高于NSE(P<0.05)。在药物作用1 h后,BMSCs细胞Cyclin D1不论在基因转录水平还是在蛋白表达水平均出现大幅度下调,此时BMSCs开始有Nestin的表达;药物作用12、24 h,BMSCs细胞Cyclin D1表达与药物作用前表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:黄芪甲苷可能首先通过调整细胞周期,延长了G1期向S期转变的时间,从而启动了BMSCs的分化程序,诱导BMSCs向神经干细胞分化。在黄芪甲苷的营养作用下,细胞的突起进一步生长并向神经元分化。

NCAPG和CDK1促进膀胱癌细胞增殖

目的:探讨非SMC凝缩蛋白Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)在膀胱癌细胞和膀胱癌组织中的作用。方法:通过生物信息学分析,比较NCAPG和CDK1在膀胱癌和正常组织中的表达。之后再对NCAPG和CDK1进行相关性分析,对新乡医学院第一和第三附属医院泌尿外科72例膀胱癌患者术后病理组织进行免疫组化染色,进一步验证其相关性。选取膀胱癌细胞T24和5637,将其分为两组,未敲低NCAPG的为对照组,转染shRNA敲低NCAPG的为shRNA组,qRT-PCR和Western印迹验证敲低效果,通过克隆形成和CCK-8实验检测其对膀胱癌细胞增殖的影响,并应用细胞周期实验,检测其对膀胱癌细胞周期的影响。结果:与正常膀胱组织相比,NCAPG和CDK1在膀胱癌组织中表达上调。NCAPG和CDK1免疫组化染色的相关性分析进一步证实了NCAPG与CDK1相关(χ^(2)=10.286,P<0.001)。通过结合临床资料进一步发现,NCAPG的表达与肿瘤大小密切相关(χ^(2)=6.675,P=0.010)。qRT-PCR和Western印迹结果显示,NCAPG shRNA明显抑制了NCAPG mRNA(t=5.422、5.238,均P<0.05)及蛋白的表达(t=4.756、4.122,均P<0.05)。同时CCK-8实验和克隆形成实验发现,敲低NCAPG会抑制膀胱癌细胞的增殖(t=5.886、4.147、3.102、3.745,均P<0.05)。细胞周期结果发现,敲低NCAPG后阻滞了膀胱癌细胞的G2/M期(t=2.566、2.926,均P<0.05)。结论:NCAPG和CDK1在膀胱癌细胞中高表达,会促进膀胱癌细胞的增殖。

CDK12参与模拟失重抑制成骨细胞增殖的作用及机制

目的失重环境下成骨细胞增殖能力下降是引起失重性骨丢失的重要原因之一,然而其具体机制仍不清楚。本文在前期研究基础上,研究CDK12参与模拟失重抑制成骨细胞增殖的作用及机制。方法采用RPM模拟失重条件,以CDK12高/低表达成骨细胞与对照组成骨细胞为研究对象,分别采用Ed U染色、流式细胞术、细胞免疫荧光染色、Real time PCR和Western Blot检测成骨细胞增殖、细胞周期、CDK12分布,以及CDK12介导的信号转导的变化,并检测CDK12高表达对失重抑制成骨细胞增殖的挽救作用。结果(1)模拟失重条件抑制成骨细胞增殖,改变细胞周期,下调成骨细胞中CDK12表达;(2)CDK12低表达抑制成骨细胞增殖,且改变细胞周期;(3)模拟失重条件或CDK12低表达抑制了RNAPⅡ磷酸化水平,并下调了DNA复制相关基因表达;(4)模拟失重条件下,CDK12高表达促进成骨细胞增殖、增加RNAPⅡ磷酸化水平,并上调DNA复制相关基因表达,对模拟失重条件抑制成骨细胞增殖具有挽救作用。结论CDK12在模拟失重条件抑制成骨细胞增殖中起重要作用。模拟失重条件下,CDK12表达受到抑制,RNAPⅡ磷酸化水平降低,进而抑制CDC6等DNA复制相关基因表达,改变细胞周期,导致成骨细胞增殖能力下降,而CDK12高表达对模拟失重抑制成骨细胞增殖具有挽救作用。

CDK4/6抑制剂联合内分泌、靶向一线治疗HR+/HER2+晚期乳腺癌疗效分析

目前乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤第一位,且乳腺癌出现年轻化趋势,年轻乳腺癌患者,恶性程度高,进展迅速,预后相对较差。本文通过总结1例HR+/HER2+乳腺癌患者晚期一线应用CDK4/6抑制剂联合内分泌联合靶向治疗,并取得相对较好的临床疗效,生活质量得到极大改善,为更多年轻晚期乳腺癌患者的临床治疗提供新的治疗方案及思路。

益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎的效果及对Cyclin E、Th17/Treg比值的影响分析

目的分析益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎中的效果及对细胞周期蛋白E(Cyclin E)水平、辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)比值的影响。方法选取2019年6月至2022年6月在河北省石家庄市中医院确诊的150例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为益胃解毒方组、六君子汤组、益胃解毒方+六君子汤组,每组50例。益胃解毒方组使用益胃解毒方治疗,六君子汤组使用六君子汤治疗,益胃解毒方+六君子汤组使用益胃解毒方联合六君子汤治疗,均连续治疗24周。比较3组治疗效果、中医证候积分、Cyclin E水平、Th17/Treg比值、不良反应发生情况。结果益胃解毒方组治疗总有效率高于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组高于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组各项中医证候积分低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组各项中医证候积分低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组Cyclin E水平、Th17/Treg比值均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组Cyclin E水平、Th17/Treg比值低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。益胃解毒方组总不良反应发生率低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎效果显著,不仅能够改善患者临床症状,调节Cyclin E、Th17/Treg表达,还能减少不良反应发生,值得临床推广应用。

PRMT5和CDKN2B在宫颈癌组织的表达及临床意义

目的研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法收集2019年3月—2020年3月南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科诊治宫颈癌患者88例。免疫组织化学法检测宫颈癌和癌旁组织中PRMT5、CDKN2B表达;采用Spearman相关分析PRMT5与CDKN2B表达的相关性;比较不同临床特征宫颈癌癌组织中PRMT5、CDKN2B表达的差异;Kaplan-Meier曲线评估PRMT5、CDKN2B表达对宫颈癌患者无进展生存预后的影响;多因素Cox回归分析宫颈癌患者无进展生存预后的影响因素。结果癌组织中PRMT5蛋白阳性率70.45%(62/88),高于癌旁组织6.82%(6/88)(χ^(2)=75.155,P<0.001)。宫颈癌组织中CDKN2B阳性率22.73%(20/88),低于癌旁组织79.55%(71/88)(χ^(2)=75.336,P<0.001)。宫颈癌中PRMT5与CDKN2B呈负相关(r=-0.734,P<0.001)。FIGOⅠB2~ⅡA期、有淋巴结转移宫颈癌组织中PRMT5阳性率高于FIGOⅠA~ⅠB1期、无淋巴结转移者,而CDKN2B阳性率则降低(χ^(2)/P=6.359/0.012、4.606/0.032、5.205/0.023、3.893/0.048)。PRMT5阳性组3年累积无进展生存率74.19%(46/62),低于PRMT5阴性组92.31%(24/26)(Log-Rankχ^(2)=4.386,P=0.017)。CDKN2B阴性组3年累积无进展生存率75.00%(51/68),低于CDKN2B阳性组95.00%(19/20)(Log-Rankχ^(2)=4.423,P=0.012)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、合并淋巴结转移、PRMT5阳性、CDKN2B阴性是影响宫颈癌患者无进展生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.407(1.159~1.696),1.464(1.201~1.784),1.614(1.189~2.192),1.595(1.191~2.136)]。结论宫颈癌组织中PRMT5表达升高,CDKN2B表达降低,两者与宫颈癌患者的不良临床病理特征有关,是评估宫颈癌预后的标志物。

c-Fos、Cyclin-D1、CDK4在乳腺癌中的表达及相关性分析

目的:探讨癌基因c-Fos、细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况以及其与临床病理特征相关性,并进行生存分析。方法:随机选取20例乳腺癌及癌旁组织进行蛋白印迹实验(western blot,WB)和实时定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-qPCR),分别检测乳腺癌组织中c-Fos的蛋白表达和c-Fos、Cyclin-D1、CDK4的mRNA含量;购买乳腺癌组织芯片进行免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)实验,研究c-Fos、Cyclin-D1、CDK4的表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果:WB实验结果提示c-Fos在乳腺癌组织表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);RT-qPCR实验结果提示乳腺癌组织中c-Fos mRNA含量与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0.05),乳腺癌组织中Cyclin-D1 mRNA、CDK4 mRNA含量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);IHC实验表明c-Fos、Cyclin-D1、CDK4在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中三者的表达均呈正相关(r=0.320,r=0.486,r=0.514,P<0.05);在乳腺癌组织中,c-Fos的表达与临床分期有关(P<0.05);Cyclin-D1的表达与脉管侵犯有关(P<0.05);CDK4的表达与淋巴结转移有关(P<0.05);生存分析提示三者的高表达是乳腺癌患者总生存时间的危险因素。结论:乳腺癌组织中c-Fos、Cyclin-D1、CDK4高表达并存在正相关性,且与乳腺癌的临床病理特征相关,提示共同参与乳腺癌的发生及发展过程;三者的高表达影响乳腺癌患者的预后。

长链非编码RNA LINC00996通过抑制CDKN2A促进胃癌进展

背景长链非编码RNA长基因间非蛋白编码RNA 996(long intergenic non-protein coding RNA 996,LINC00996)在多种肿瘤中发挥促癌或抑癌作用,而其在胃癌中的表达和作用尚不清楚.目的探索LINC00996在胃癌组织和细胞系中的表达,并探讨其对胃癌细胞生物学行为的作用及机制.方法用生物信息学法分析胃癌中LINC00996的表达,及其对胃癌患者总生存期的影响.用RT-qPCR检测胃癌及癌旁组织、胃癌及正常胃上皮细胞系中LINC00996表达.胃癌细胞(SGC7901、NCI-N87)转染针对LINC00996的小干扰RNA(si-LINC00996)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(cyclin-dependent kinase inhibitor 2A,CDKN2A)的小干扰RNA(si-CDKN2A)后,用细胞计数试剂盒-8法、EDU染色法、流式细胞术法、划痕法和Transwell法分别检测细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移与侵袭;Western blot法检测细胞中CDKN2A、周期蛋白D1、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和劈开的半胱胺酸蛋白酶-3(Cleaved cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Cleaved caspase-3)表达.结果LINC00996在胃癌组织和细胞中表达较癌旁组织和胃正常细胞系显著升高(P<0.05),Kaplan Meier Plotter数据库显示LINC00996高表达组的胃癌患者的总生存期较低表达组显著缩短(P<0.05).敲降LINC00996能抑制胃癌细胞增殖、细胞周期运行、迁移、侵袭(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);降低cyclin D1和Bcl-2表达(P<0.05);升高CDKN2A、Bax和Cleaved caspase-3表达(P<0.05).敲降CDKN2A能部分逆转敲降LINC00996对胃癌细胞的作用(P<0.05).结论敲降LINC00996能通过上调CDKN2A诱导胃癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭.

CDK4/6抑制剂在HR^(+)晚期乳腺癌治疗中的耐药机制及进展后治疗策略

细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)抑制剂联合内分泌治疗已成为激素受体阳性(HR^(+))、人类表皮生长因子受体-2阴性(HER2^(-))乳腺癌患者的晚期一线及二线标准治疗方案。尽管CDK4/6抑制剂可实现有效的疾病控制,但对于晚期乳腺癌患者最终仍会因耐药出现疾病进展。目前CDK4/6抑制剂相关耐药机制尚不完全清楚,同时治疗失败后的最佳治疗策略仍是一个亟待解决的问题。本文就CDK4/6抑制剂的潜在耐药机制和后续治疗策略的最新研究进展做一综述。

胃癌组织中CCNB1、CDK1的表达及其与总体生存率的相关性

目的:观察胃癌组织中细胞周期蛋白B1(Cyclin B1,CCNB1)和细胞周期蛋白质依赖激酶1(Cyclin-dependent kinases1,CDK1)的表达与患者总体生存率之间的关系。方法:回顾分析2017年9月至2023年9月于本院完成胃癌根治术和术后5年随访的58例胃癌患者资料,查阅资料,记录癌组织与癌旁组织的CCNB1、CDK1表达情况,重点分析癌组织CCNB1和CDK1表达与胃癌患者术后总体生存率的关系。结果:癌组织CCNB1、CDK1阳性表达占比高于癌旁组织(P<0.05);不同浸润程度患者的CDK1阳性占比比较差异有统计学意义(P<0.05),不同淋巴结转移、肿瘤转移(Tumor Node Metastasis,TNM)分期和分化程度胃癌患者的CCNB1、CDK1阳性占比比较差异有统计学意义(P<0.05);58例患者病死42例,病死率为72.41%;病死组癌组织CCNB1、CDK1阳性占比高于存活组(P<0.05);经相关性检验,胃癌患者癌组织CCNB1和CDK1阳性表达与生存情况(病死)存在正相关关系(r>0,P<0.05)。结论:CCNB1、CDK1在胃癌癌组织中呈异常表达,这种异常表达可能与患者术后总体生存率有关,提示术后病死高风险,应引起临床重视。

CDK4/6抑制剂联合氟维司群二线治疗Luminal型晚期乳腺癌的Meta分析

目的:对CDK4/6抑制剂联合氟维司群二线治疗Luminal型乳腺癌进行有效性及安全性评价。方法:根据检索式从Embase、PubMed、Web of Science、中国知网、万方医学网和维普网等数据库中网络检索与CDK4/6抑制剂联合氟维司群治疗Luminal型内分泌耐药乳腺癌有关的随机对照试验并进行筛选,使用Stata17.0和RevMan5.4软件对纳入的RCT进行评价及Meta分析。结果:纳入8篇文献,共5项RCT,纳入研究对象2466例。Meta分析结果显示,CDK4/6抑制剂联合氟维司群与单纯应用氟维司群相比可延长患者的无进展生存期[HR=0.51,95%CI(0.46,0.56),P<0.00001]及总生存期[HR=0.73,95%CI(0.65,0.83),P<0.00001],两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。然而CDK4/6抑制剂联合氟维司群治疗时更容易造成中性粒细胞减少、白细胞计数下降、贫血、血小板下降及疲乏等不良反应,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:与氟维司群加安慰剂相比,CDK4/6抑制剂联合氟维司群显著延长Luminal型乳腺癌患者的PFS和OS。用药过程中常见的不良反应是血液系统的中性粒细胞减少、白细胞计数下降、贫血、血小板下降及疲乏等,且3级及以上不良反应发生率可控,在临床治疗上获益较大。

CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。