小鼠孕早期Cyclin-E表达规律及意义

目的:探讨细胞周期素E(Cyclin-E)在早孕小鼠子宫内膜的的表达及其对小鼠胚胎着床数的影响。方法:应用RT-PCR及免疫组织化学的方法检测早孕小鼠子宫内膜细胞Cyclin-E基因和蛋白的表达规律;观察子宫角注射抗Cyclin-E抗体后对小鼠胚胎着床数的影响。结果:妊娠第1～7d小鼠子宫内膜组织均有Cyclin-E表达,自妊娠2d起表达增强,5d表达量达高峰。小鼠妊娠期Cyclin-E在子宫内膜腔上皮、腺上皮及内膜基质中均有表达。单侧子宫抗Cyclin-E抗体注射后双侧胚胎着床数差值较对照组(注射等体积生理盐水)明显增大。结论:在小鼠胚胎着床过程中,Cyclin-E可能参与调节子宫内膜的增殖分化,在子宫内膜蜕膜化及胚胎着床过程发挥作用。

Cyclin-A、cyclin-D1和cyclin-E在有HBV感染的HCC中的表达及其相关性研究

目的探讨细胞周期A、D1、E在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达与有无HBV感染的HCC的相关性研究。方法对64例HCC组织分别进行HE、HBV(HBsAg,HBcAg)、cyclin-A、cyclin-D1及cyclin-E的检测。结果①HCC组织学以小梁型、透明细胞型、腺泡型和实体型为主;②在HCC组织中,HBsAg阳性40例(40/64,62.5%),HBcAg阳性33例(33/64,51.56%);③cyclin-A在HCC组织中的表达率为40.63%(26/64),有HBV感染的HCC组织中的表达率为48.84%(21/43,P=0.083);④cyclin-D1在HCC组织中的表达率为34.78%(22/64),有HBV感染的HCC组中的表达率为44.19%(19/43,P=0.018);⑤cyclin-E在HCC组织中的表达率为18.75%(15/64),有HBV感染的HCC组织中表达率为27.91%(12/43,P=0.246)。结论HBV感染可延长G1期到S期的时间,促进肿瘤细胞的增殖。预防和抗HBV的感染,可降低或减少HCC的增殖能力。

p27、Cyclin-E在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的:探讨p27、细胞周期蛋白-E(Cyclin-E)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)中的表达及其临床意义。方法:选取2018年4月至2021年4月于绵阳市第三人民医院经手术病理证实为卵巢EMS的100例患者作为观察组,收集子宫内膜异位病灶组织;另选取同期因子宫肌瘤接受子宫切除手术的100例患者作为对照组,收集正常子宫内膜组织。采用免疫组织化学检查两组p27和Cyclin-E的表达。结果:观察组Cyclin-E阳性率(86.00%)显著高于对照组(11.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组p27阳性率(57.00%)显著低于对照组(78.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。p27和Cyclin-E表达与生长程度、囊肿大小及痛经有关(P<0.05)。p27和Cyclin-E在EMS中的表达呈负相关(P<0.05)。结论:p27和Cyclin-E水平的变化在EMS发生发展中起重要作用。

贲门癌变过程中Survivin和Cyclin-E蛋白的表达及相关性研究

目的检测Survivin蛋白和Cyclin—E蛋白在贲门癌和癌前病变中的表达变化，探讨两者表达的相关性。方法应用免疫组化sP法检测Survivin蛋白和Cyclin—E蛋白在贲门癌和癌前病变组织中的表达变化，分析两者在不同程度贲门病变组织中表达的相关性。结果①从贯门炎到腺上皮不典型增生（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）到贲门癌，Survivin蛋白和Cyclin—E蛋白表达均呈逐渐增高趋势，Survivin蛋白的表达率高于Cyclin-E蛋白。②两者在Ⅲ级不典型增生组中的表达与贲门癌组比较差异元显著性（P〉0．05）。③Survivin蛋白和Cyclin—E蛋白在贲门未分化腺癌组中表达均高于其在低分化、高分化腺癌组中表达，组间差异有显著性（P〈0．01）。④Survivin蛋白和Cyclin-E蛋白在贲门炎、腺上皮不典型增生（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）和贲门癌中的表达呈正相关（r=0．881，P〈0．05）。结论在贲门不同病变组织中Survivin蛋白和Cyclin-E蛋白表达随着病变严重程度和恶性程度的增高而增高；两者在贲门癌及癌前病变的发生发展过程中起协同作用，共同抑制细胞凋亡、促进细胞增殖。

p27、cyclin-E在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的探究p27蛋白、细胞周期素E(cyclin-E)在子宫内膜异位症(EMT)患者中的表达及与患者临床病理特征、妊娠关系。方法选取2016年1月至2021年1月江西省九江市妇幼保健院81例EMT合并不孕患者为EMT组,另选择同期60例非EMT患者为对照组。采用免疫组化法检测子宫内膜组织p27蛋白、cyclin-E表达情况,以半定量法评价镜下染色强度、阳性细胞百分比,统计p27蛋白、cyclin-E阳性表达情况。结果EMT组异位内膜、在位内膜组织p27蛋白阳性率55.56%、58.02%,均显著低于对照组正常内膜组织的81.67%(P<0.05),EMT组异位内膜、在位内膜组织cyclin-E阳性率69.14%、51.85%均显著高于对照组的25.00%(P<0.05)。81例EMT患者中,浸润型异位内膜组织p27蛋白阳性率36.36%较卵巢型的62.71%下降、cyclin-E阳性率90.91%较卵巢型的62.07%升高(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期异位内膜组织p27蛋白阳性率39.02%较Ⅰ~Ⅱ期的72.50%下降、cyclin-E阳性率82.93%较Ⅰ~Ⅱ期的55.00%升高(P<0.05)。Spearman相关分析显示,p27蛋白表达与cyclin-E表达、美国生育协会分类系统(rAFS)评分呈负相关(P<0.05),与子宫内膜容受性Salle评分呈正相关(P<0.05);cyclin-E表达与Salle评分呈负相关(P<0.05),与rAFS评分呈正相关(P<0.05)。81例患者术后24个月累计妊娠共38例(46.91%),其中p27蛋白表达阳性者妊娠率57.78%,较阴性者的33.33%高(P<0.05),而cyclin-E表达阳性者妊娠率37.50%,较阴性者的68.00%低(P<0.05)。调整年龄、体重指数、月经周期、术前痛经数字评分(NRS)评分、Salle评分、美国生育协会分类系统(rAFS)评分等因素后发现,cyclin-E表达阳性是术后24个月妊娠结局的影响因素(P<0.05)。结论p27蛋白在EMT患者中呈低表达、cyclin-E呈高表达,二者均与患者临床分型、分期及病情严重程度表现出一定相关性,其中cyclin-E高表达可能与患者妊娠结局有关。

益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎的效果及对Cyclin E、Th17/Treg比值的影响分析

目的分析益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎中的效果及对细胞周期蛋白E(Cyclin E)水平、辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)比值的影响。方法选取2019年6月至2022年6月在河北省石家庄市中医院确诊的150例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为益胃解毒方组、六君子汤组、益胃解毒方+六君子汤组,每组50例。益胃解毒方组使用益胃解毒方治疗,六君子汤组使用六君子汤治疗,益胃解毒方+六君子汤组使用益胃解毒方联合六君子汤治疗,均连续治疗24周。比较3组治疗效果、中医证候积分、Cyclin E水平、Th17/Treg比值、不良反应发生情况。结果益胃解毒方组治疗总有效率高于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组高于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组各项中医证候积分低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组各项中医证候积分低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组Cyclin E水平、Th17/Treg比值均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组Cyclin E水平、Th17/Treg比值低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。益胃解毒方组总不良反应发生率低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎效果显著,不仅能够改善患者临床症状,调节Cyclin E、Th17/Treg表达,还能减少不良反应发生,值得临床推广应用。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

cyclin E、p53、CD44s、CD44v6与早期乳腺癌的相关性及预后预测分析

目的分析肿瘤组织的细胞周期素E(cyclin E)和p53、CD44s、CD44v6蛋白与早期乳腺癌的相关性及预后预测价值。方法选取2018年7月—2020年7月喀什地区第二人民医院收治的80例临床分期为Ⅰ~Ⅱ期的早期乳腺癌患者进行回顾性分析,将其分为恶性组;另选取同期喀什地区第二人民医院收治的80例通过病理学检验确诊为良性乳腺肿瘤患者,将其分为良性组。分别对两组患者留存的肿瘤组织进行免疫组化检测,检测cyclin E、p53、CD44s、CD44v6表达,并对比上述指标的阳性率,应用Spearman相关分析方法分析cyclin E、p53、CD44s、CD44v6与早期乳腺癌的相关性。所有患者均采取手术治疗,随后对80例早期乳腺癌患者进行3年随访,依照随访结果将患者分为2个亚组,即预后不良组(n=25)和预后良好组(n=55),对比两组患者一般临床特征及cyclin E、p53、CD44s、CD44v6阳性率,并应用Logistic回归分析cyclin E、p53、CD44s、CD44v6对早期乳腺癌预后的预测价值。结果恶性组患者cyclin E、p53、CD44s、CD44v6阳性率分别为42.50%、61.25%、77.50%、81.25%,明显高于良性组1.25%、5.00%、10.00%、12.50%(P<0.05);Spearman相关分析结果显示:cyclin E、p53、CD44s、CD44v6与早期乳腺癌呈正相关(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者绝经情况、年龄、病理类型、治疗方式、三阴性乳腺癌、肿瘤大小、组织分化程度对比,差异无统计学意义(P>0.05),预后良好组与预后不良组患者临床分期、cyclin E、p53、CD44s、CD44v6阳性例数对比,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果表明:cyclin E、p53、CD44s、CD44v6阳性表达为影响早期乳腺癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论cyclin E、p53、CD44s、CD44v6表达水平与乳腺癌的发生、发展具有明显关系,且上述指标呈阳性表达为早期乳腺癌预后不良的独立预测因素。

maspin、Cyclin-1与胃癌临床分期及VEGF的相关性分析

目的探讨maspin、Cyclin-1与胃癌临床分期及血管内皮生长因子(VEGF)的相关性。方法选取2019年1月至2021年5月该院收治的240例胃癌手术患者作为研究对象,收集其癌组织及癌旁组织进行相关指标检测,采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织及癌旁组织maspin、Cyclin-1的表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测VEGF水平。结果胃癌组织中maspin阳性42例(17.50%),Cyclin-1阳性174例(72.50%);癌旁组织中maspin阳性198例(82.50%),Cyclin-1阳性66例(27.50%)。与胃癌组织比较,癌旁组织中maspin阳性表达较高,Cyclin-1阳性表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ期胃癌患者maspin阳性21例(26.92%),Cyclin-1阳性36例(46.15%);Ⅱ期胃癌患者maspin阳性12例(21.05%),Cyclin-1阳性48例(84.21%);Ⅲ期胃癌患者maspin阳性9例(17.65%),Cyclin-1阳性42例(82.35%);Ⅳ期胃癌患者maspin阳性0例(0.00%),Cyclin-1阳性48例(88.89%)。各期胃癌患者maspin和Cyclin-1阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ期胃癌患者VEGF表达水平为(62.60±7.22)pg/mL,Ⅱ期胃癌患者为(85.20±15.25)pg/mL,Ⅲ期胃癌患者为(118.30±22.34)pg/mL,Ⅳ期胃癌患者为(140.30±30.56)pg/mL,各期胃癌患者VEGF表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。maspin与VEGF呈负相关(r=-0.365,P<0.05),maspin与Cyclin-1呈负相关(r=-0.298,P<0.05),VEGF与Cyclin-1呈正相关(r=0.386,P<0.05)。结论maspin在胃癌组织中呈低表达,Cyclin-1在胃癌组织中呈高表达,且不同分期胃癌患者maspin、Cyclin-1及VEGF表达水平不同,通过检测maspin、Cyclin-1和VEGF表达水平,对胃癌诊断分期有重要作用。

和胃降逆胶囊对胃癌前病变病理改善效果及安全性分析

【目的】探讨和胃降逆胶囊对胃癌前病变(precancerous lesion of gastric cancer,PLGC)的病理改善效果及安全性。【方法】将100例PLGC患者随机分为对照组和观察组,每组各50例。对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组的基础上配合和胃降逆胶囊治疗,3个月为1个疗程,连续治疗3个疗程。观察2组患者治疗前后中医证候积分及血清表皮生长因子(EGF)、生长激素(GH)和胃黏膜组织细胞周期蛋白E(Cyclin E)、肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和安全性。【结果】(1)研究过程中,2组各有4例患者脱落,最终各有46例患者完成全部疗程的治疗。(2)治疗3个疗程后,观察组的总有效率为73.91%(34/46),对照组为52.17%(24/46),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的胃痛、纳差、乏力、嗳气、便溏等中医证候积分均较治疗前明显改善(P<0.05),且观察组的改善作用均明显优于对照组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者的血清EGF水平均较治疗前明显降低(P<0.05),血清GH水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对血清EGF水平的降低作用和对血清GH水平的升高作用均明显优于对照组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者胃黏膜组织中的Cyclin E、TRAF1表达水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(6)观察组的不良反应发生率为4.35%(2/46),对照组为0,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】在常规西药治疗基础上配合和胃降逆胶囊治疗PLGC患者疗效确切,能有效调节血清EGF、GH及胃黏膜组织Cyclin E、TRAF1表达水平,改善PLGC病理状态和中医临床症状,具有较高的安全性。

CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨细胞角蛋白19抗原21-1(CYFRA21-1)、细胞周期蛋白E(CyclinE)、微小RNA-451(miRNA-451)在膀胱癌中的表达及意义。方法选取郑州大学附属郑州中心医院2021年1月至2023年1月收治的60例膀胱癌患者作为膀胱癌组,选取同期60例泌尿系良性疾病患者作为良性疾病组,60例健康体检者作为对照组。比较三组研究对象CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平,比较不同临床特征膀胱癌患者CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平,ROC曲线分析CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451单独及联合检测诊断膀胱癌的价值。结果膀胱癌组CYFRA21-1、CyclinE水平高于良性疾病组和对照组,良性疾病组高于对照组;膀胱癌组miRNA-451低于良性疾病组和对照组,良性疾病组低于对照组;不同肿瘤分期膀胱癌患者CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451联合检测诊断膀胱癌的AUC值高于单项检测,差异有统计学意义(ZCYFRA21-1~联合检测=3.400,ZCyclinE~联合检测=3.581,ZmiRNA-451~联合检测=3.279,P<0.05)。结论膀胱癌患者中CYFRA21-1、CyclinE呈高表达,miRNA-451呈低表达,其表达与肿瘤分期有关,CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451联合检测有助于早期诊断膀胱癌。

20(s)-原人参二醇对体外培养宫颈癌Siha细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对体外培养宫颈癌Siha细胞生长周期的作用及其对p53、p21及细胞周期素E(cyclin-E)基因转录和表达的影响,探讨PPD抑制Siha细胞增殖的机制。方法:体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)和实验组(20μg·L-1 PPD),分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48h后流式细胞术检测细胞周期,Real time PCR和Western blotting法检测宫颈癌Siha细胞内p53、p21及cyclin-E mRNA及蛋白的表达情况。结果:与阴性对照组比较,20μg·L-1 PPD处理48h后,G0/G1期Siha细胞比例增加(P<0.01),G1期阻滞作用明显增强;Siha细胞中p53与p21mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01),cyclin-E mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01)。结论:PPD可抑制人宫颈癌Siha细胞增殖,其机制可能与上调p53、p21基因表达,下调cyclin-E基因表达有关。

人参皂苷Rg1对细胞衰老过程中p21,cyclin E和CDK2表达的影响

目的 探讨p21、细胞周期蛋白E(cyclin E)和周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导’WI-38细胞衰老过程中的可能作用。方法 细胞超微结构、流式细胞分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞,蛋白印迹法检测p21,cyclin E和CDK2蛋白的表达。结果 Rgl预处理可明显减弱t-BHP对WI-38细胞衰老的诱导作用,同时p21表达水平明显降低,cyclin E和CDK2表达水平增加。结论 人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢对细胞衰老的诱导作用可能与其改变p21,cyclin E和CDK2的表达水平有关。

丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对纤维化人肾间质成纤维细胞体外增殖及cyclin E蛋白表达的影响

目的研究丹参酮Ⅱ-A磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ-A sulfonate,DS-201)对人肾间质纤维化来源的成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)体外增殖及细胞周期素E(cyclin E)基因表达的影响,探讨该药治疗肾间质纤维化的作用机制。方法体外培养并鉴定hRIFs;用四甲基偶氮唑(MTT)法检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs的增殖活性;用免疫细胞化学S-P法和图像分析技术检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs cyclin E基因的表达。结果随药物浓度的升高和作用时间的延长,抑制率逐渐升高,抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖性和时间依赖性。用药组阳性细胞的平均光密度值在第3、5、7、9天显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),第1天用药各组与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。结论①DS-201对hRIFs体外增殖有显著抑制作用,可能是其治疗肾间质纤维化的机制之一。②DS-201抑制hRIFs体外增殖可能是通过抑制细胞中cyclin E基因的表达,阻滞细胞通过G1/S关卡,延长细胞周期实现的。

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制。方法MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变。结果甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L。甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体。甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低。甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关。结论甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期。该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药。

斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析

为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用,构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库,获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin)E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bp的cDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)为1 263 bp,编码420个氨基酸。生物信息学分析表明,该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)等多种节肢动物细胞周期蛋白E有很高的同源性。组织分布分析表明,该基因在斑节对虾精巢、卵巢、肠、脑、肝胰腺、胃和心脏组织中均有表达,其中卵巢中表达量较高,而心脏、胃及肝胰腺中表达量相对较低。分别对蜕皮抑制激素(MIH)注射和眼柄切除的对虾进行表达分析,发现眼柄切除后,Pmcyclin E大量表达,而注射MIH后细胞Pmcyclin E的表达量相对降低。结果表明,细胞cyclin E基因在斑节对虾卵巢发育过程中起重要作用,且眼柄切除对细胞cyclin E的表达具有影响,该结果为进一步探究斑节对虾卵巢的发育机理提供了理论依据。

康莱特抑制肝癌细胞HepG2增殖的实验研究

目的:探讨康莱特注射液(KLT)抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用机制。方法:以低、中、高剂量(分别为5μl/ml、10μl/ml、15μl/ml)的KLT处理肝癌细胞HepG2,用免疫组化法检测周期素D1(cyclinD1)、周期素E(cyclinE)蛋白在肝癌细胞HepG2中的表达,用MTT比色法观察KLT对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,用流式细胞仪检测细胞周期分布;另设盐水对照组。结果:1)KLT对肝癌细胞HepG2有明显的抑制效应,且具有时间、剂量依赖关系。2)低、中、高剂量组KLT使G1期细胞分别上升至66.5%、70.1%、75.8%,明显高于对照组(P<0.05);中、高剂量组KLT使S期细胞分别下降至13.2%、20.0%,明显低于对照组(P<0.05)。3)低、中、高剂量组KLT使肝癌细胞cyclinD1蛋白水平分别减少26.3%、35.1%、45.6%,与对照组比较P均<0.05;使cyclinE蛋白水平分别减少18.8%、27.1%、33.3%,与对照组比较P均<0.05。结论:KLT对肝癌细胞HepG2有明显的抑制效应,其抑制效应具有时间、剂量依赖关系,其机理是通过抑制下游cyclinD1、cyclinE表达阻止细胞进入S期。

胰腺癌组织中p57^(kip2)、cyclin E和PCNA表达与临床病理因素的关系

背景与目的:细胞周期调控异常、细胞过度增殖与肿瘤发生密切相关,p57kip2蛋白作为细胞周期负性调控因子与胰腺癌的关系尚很少报道。本研究的目的是探讨p57kip2、cyclinE蛋白和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)在胰腺癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)对32例胰腺癌组织及癌旁组织中p57kip2、cyclinE蛋白和PCNA表达进行检测。结果:p57kip2蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率为46.9%,显著低于癌旁胰腺组织(75.0%)(χ2=5.317,P<0.05),并与胰腺癌组织分化程度有关(P<0.05),而与淋巴结转移情况无关(P>0.05);cyclinE蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为68.8%,显著高于癌旁胰腺组织(43.8%)(χ2=4.063,P<0.05),并与胰腺癌组织分化程度和淋巴结转移情况相关(P<0.05);PCNA阳性表达率在胰腺癌组织中为71.9%,显著高于癌旁胰腺组织(43.8%)(χ2=5.189,P<0.05),并与胰腺癌组织分化程度和淋巴结转移情况有关(P<0.05)。p57kip2阳性胰腺癌组织中cyclinE蛋白阳性表达率(60.0%)低于p57kip2阴性胰腺癌组织中cyclinE蛋白阳性表达率(76.5%),但两者无相关(r=-0.11211,P>0.05)。结论:p57kip2蛋白低表达和cyclinE、PCNA蛋白过度表达与胰腺癌的发生、发展有关。

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。

胃癌及癌前病变组织中TGFα和cyclin E的表达及两者关联性分析

背景与目的:研究发现,转化生长因子α(transforminggrowthfactoralpha,TGFα)或细胞周期素E(cyclinE)表达增高与肿瘤的发生、发展关系密切。但在胃癌前病变中的表达报道较少;两者表达的关联性分析未见报道。本研究旨在检测TGFα和cyclinE在慢性浅表性胃炎、胃癌前病变和胃癌组织中的表达情况,分析两者表达的关联性。方法:用免疫组织化学方法,检测TGFα和cyclinE在上述组织中的表达,分析两者表达在不同病理组织中的差异,以及两者表达的关联性。结果:在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生及胃癌组织中,TGFα表达的阳性率分别为15.1%、53.6%、51.7%和61.7%,cyclinE分别为7.5%、28.6%、37.9%和42.6%,两者在肠上皮化生、不典型增生和胃癌的表达均高于在慢性浅表性胃炎的表达(均P<0.05)。在中-高分化腺癌和低分化腺癌,TGFα表达的阳性率分别为41.7%和81.0%,cyclinE分别为16.7%和57.1%,两者在低分化腺癌的表达均高于在中-高分化腺癌的表达(均P<0.05)。在胃慢性炎症组织(含癌前病变)以及在胃癌组织,TGFα和cyclinE的表达均存在显著的关联(分别为P<0.001和P=0.005)。结论:在慢性浅表性胃炎、癌前病变和胃癌组织中,TGFα和cyclinE的表达随病变严重程度以及胃癌恶性程度的增高而增高;