Protective effects of total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja on STZ-stimulated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis

OBJECTIVE To explore the protective effects of total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja on STZ-stimulated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis.METHODS INS-1cells were cultured in media containing 3n M STZ and different doses of total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja.The proliferation of cells was examined by MTT assay,ROS content were detected by fluorescence enzyme label.The levels of superoxide dismutase(SOD),glutathione peroxidase(GSH-Px),hydrogen peroxidase(CAT),malondialdehyde(MDA)were also measured by colorimetry.The activities of caspase-3,9 were also observed by Caspase colorimetric assay kit in each group.The expressions of Bcl-2 m RNA and Bax m RNA were detected by Real time PCR,protein expression of LC3-Ⅱand PARP were detected by Western blotting.RESULTS Compared with the control group,total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja could promote the proliferation of INS-1 cells no matter with STZ or not when its concentration lower than 25μg·m L-1;but when its concentration higher than 100μg·m L-(1use individually)or 50μg·m L-1(combined use),total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja might significantly inhibite the growth of the cells whether STZ existed or not.Total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja(6.25,12.5,25μg·m L-1)might inhibit INS-1cell apoptosis,decrease intra-cellular ROS contents,improve the s upernatant liquid SOD,GSH-PX,CAT activities,decrease MDA level,promote INS-1 cell secreting insulin,decrease the protein expressions of autophagy protein LC3Ⅱand apoptosis regulating protein cleaved PARP protein,up-regulate the anti-apoptotic protein Bcl-2 m RNA expression,down-regulate the pro-apoptotic protein Bax m RNA expression and Bcl-2and Bax,reduce the activity of caspase-9 and caspase-3(P<0.05 or P<0.01).CONCLUSION Total triterpenoids extracts from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja has good protective effect on STZ-stimulated INS-1cells.It can inhibit STZ injured INS-1 cells to overproduce ROS production,enhance endogenous antioxidant enzymes(GSH-Px,SOD,CAT activities),reduce the expression of autophagy protein LC3Ⅱand apoptosisregulating protein cleaved PARP,up-reglute the antiapoptosis protein Bcl-2 expression,down-regulate the pro-apoptotic protein Bax expression,decrease the caspase-9 and caspase-3 activities,and improve the INS-1cell survival rate,and then play a protective effect on damaged INS-1 cells.

Callus culture of Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja leaves

The hormone combinations and dark culture of the callus induction for Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja leaves were optimized by an orthogonal experiment. The effects of hormones on callus proliferation were also studied. The results show that the optimum medium for callus induction of C. paliurus leaves was MS ＋ 1.0 mg.L-1 6-BA ＋ 0.5 mg.L-1 NAA ＋ 1.0 mg·L-1 2,4-D. The combination of 6-BA and NAA significantly affected the induction of callus, while the effect of 2,4-D was less. The maximum rate of callus induction was 95.4%. A 10-day darkness period was beneficial for callus induction. The best proliferation medium was 1/4 DKW ＋ 0.5 mg·L-1 6-BA ＋ 1.0 mg·L-1 2,4-D.

青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4转位干预2型糖尿病大鼠的作用机制

目的 观察青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转位改善2型糖尿病(T2DM)大鼠外周胰岛抵抗的作用。方法 建立T2DM大鼠模型(给予高脂饲料后注射链脲佐菌素35 mg·kg^(-1)),将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,青钱柳多糖提取物小、大剂量组(5,10 g·kg^(-1))和盐酸二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1)),每组9只,给药8周。测定空腹血糖、血脂变化;苏木精-伊红染色法观察胰岛和肝脏病理形态的改变;免疫组化法观察胰岛磷酸化磷酯酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)、GLUT4蛋白的表达;免疫荧光观察肝脏和胰岛GLUT4转位。结果 与模型对照组比较,青钱柳多糖提取物小、大剂量组和盐酸二甲双胍组大鼠胰岛和肝脏结构较完整,血糖下降(P<0.05),高密度脂蛋白升高(P<0.05),胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白表达升高(P<0.05),肝脏和胰岛GLUT4转位增强(P<0.05)。结论 青钱柳多糖可调节T2DM大鼠糖脂紊乱,其机制可能是增强胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白的表达,促进肝脏和胰岛GLUT4转位,从而调节外周胰岛抵抗。

青钱柳叶化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的 研究青钱柳Cyclocarya paliurus(Batal.) Iljinskaja叶的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法 青钱柳叶95%乙醇提取物采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、聚酰胺、C18反相硅胶及半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用PNPG法评价其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果 从中分离得到15个化合物,分别鉴定为cyclopaloside C(1)、cyclopaloside A(2)、juglanosides E(3)、vaccinin A(4)、ent-mururin A(5)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(6)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(8)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸乙酯(9)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸丁酯(10)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(12)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(13)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸丁酯(14)、香橙素(15)。总提取物抑制α-葡萄糖苷酶的IC_(50)值为(1.83±0.04)μg/mL,化合物1、4~5分别为(29.48±1.86)、(0.50±0.07)、(0.71±0.07)μmol/L。结论 化合物1为新四氢萘醇苷类,化合物4~5、8~10、14为首次从青钱柳叶中分离得到。化合物4~5为较少见的黄酮木脂素类化合物,对α-葡萄糖苷酶具有潜在的抑制活性。

Geographical discrimination of Cyclocarya paliurus tea for origin traceability based on multielement analysis by ICP-OES and chemometrics multivariate

Objective: This paper focused on the geographical discrimination of Cyclocarya paliurus tea for origin traceability based on multielement analysis by ICP-OES and chemometrics multivariate.Methods: In this study, eleven trace element concentrations were determined by ICP-OES and processed by multivariate statistical analysis.Results: Based on ANOVA, the mean concentrations of 10 elements except Co differed significantly among six origins. Pearson’s correlation analysis showed that 11 pairs of elements have a positive significant correlation and 12 pairs have a negative significant correlation. The geographical origins were effectively differentiated using the eleven elements combined with PCA. And the S-LDA model offered a 100%differentiation rate.Conclusion: The overall results suggested that the combination of multielement analysis by ICP-OES and chemometrics multivariate could trace the geographical origins of tea. And the paper can provide reference for quality control and quality evaluation of C. paliurus in the future.

青钱柳多糖提取工艺的研究

以江西修水青钱柳粉末为原料,采用热水浸提法提取青钱柳多糖,研究了提取温度、提取次数、提取时间和料液比对青钱柳多糖得率的影响,并以提取次数、提取时间和料液比为考察因素,在90℃下,采用L9(33)正交试验确定了热水浸提法提取青钱柳多糖的最佳工艺参数,即提取次数为三次,提取时间为150min,液料比为1:8。在上述提取条件下,热水浸提法提取青钱柳多糖得率可达到6.54%。

青钱柳叶植物药中生命元素的溶出特性及其化学形态研究

The study on the element transference characteristics and element speciation in the extract of Cyclocarya paliurus(Batal.) Iljinskaja leaves was performed by FIA-ICP-AES on the basis of C-18 bonded silica gel column separation and microwave digestion/extraction for sample treatment. Higher transfer ratio could be obtained by artificial gastric acid or with microwave extraction method. The contents of inorganic species and organic species of the four elements in the microwave extract at the temperature of 100℃ are as follows. Zn: (4. 46±0.13) μg/g and (8. 16±0. 15) μg/g; Mn: (35. 7±1.1) μg/g and (91. 2± 3.2μg/g); Mg: (156±9)μg/g and (513±11)μg/g; Fe: (3. 28±0.19)μg/g and (8. 43±1.15) μg/g, respectively.

青钱柳多糖降血脂作用的研究

通过体内和体外试验研究青钱柳多糖降血脂作用。胰脂肪酶活力测定法体外检测青钱柳多糖降血脂效果,高脂乳剂喂养小鼠2周造成高脂血症动物模型,尔后分组给药,多糖高剂量组(300 mg/kg)、中剂量组(200 mg/kg)、低剂量组(100 mg/kg)、辛伐他汀组(3 mg/kg)、辛伐他汀+多糖中剂量组(3 mg/kg+200 mg/kg)、模型组,持续喂养4周,每2周检测小鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的含量。结果表明,在体外试验中,青钱柳多糖对脂肪酶活性具有一定的抑制作用。动物试验表明青钱柳多糖能极显著地降低高脂血症动物的TC、LDL值(P<0.01);且在治疗高血脂时呈现一定的量效关系,以高剂量(300 mg/kg/d)最佳。降脂作用与辛伐他汀相当,且具有辅助辛伐他汀降脂的作用。

分光光度法测定青钱柳叶中总三萜皂甙含量

以分光光度法定量,优化香草醛-高氯酸法的显色条件:50 g/L香草醛-冰乙酸与高氯酸分别为0.3 mL和0.6 mL,80℃水浴10 min,测定波长550 nm。以人参皂甙Rb1为对照品,绘制标准曲线,回归方程m=0.162 7A+0.000 1,相关系数r=0.999 6。结果显示,分光光度法测定青钱柳叶中总三萜皂甙含量的精密度、加样回收率、稳定性试验RSD分别为2.28%、2.42%、1.99%。

反相高效液相色谱法测定青钱柳中黄酮化合物含量

用反相高效液相色谱法 ,对我国特有保健食品资源青钱柳中的异槲皮甙、槲皮素和山柰酚的含量进行了测定。色谱条件为AlltimaC18柱 ( 5μm ,150mm× 4 .6mm) ,流动相A为H2 O∶HOAc=98∶2 (V/V) ,流动相B为CH3CN。洗脱程序为 :8%B→ 3 0min→ 50 %B→ 5min→ 50 %B→ 5min→8%B。检测波长为 3 60nm ,流速为 0 .6mL/min。该方法的平均回收率和RSD为 98.6%和 1.57%。测得 :青钱柳甲醇提取物中黄酮含量为异槲皮甙 0 .543 % ,槲皮素 0 .0 615% ,山柰酚 0 .0 3 87% ;水提取物中异槲皮甙 0 .4 64 % ,槲皮素 0 .0 60 3 % ,山柰酚 0 .0 3 3 7%。

青钱柳叶中黄酮化合物结构及含量研究

研究青钱柳 (Cyclocaryapaliurus (Batal.)Iljinsk .)叶中的黄酮化合物结构及含量分布。采用溶剂萃取及多种色谱技术分离纯化 ,根据理化性质和光谱分析方法鉴定其结构 ,确定从青钱柳中分离得到山柰酚、槲皮素和异槲皮苷 3个黄酮单体化合物 ,并用反相高效液相色谱法对其含量进行了测定 ,测得各自在甲醇和水提取物中的含量 :山柰酚 0 .0 387% ,0 .0 337% ;槲皮素 0 .0 6 1 5 % ,0 .0 6 0 3% ;异槲皮苷 0 .5 4 3% ,0 .4 6 4 %。

用 MAP-ICP-MS测定保健食品青钱柳 及其浸提物中多种矿质营养素的研究

将微波辅助溶样／萃取（ＭＡＰ）和电感耦合等离子体质谱（ＩＣＰ－ＭＳ）联用，建立了对青钱柳叶干制品及其浸提物中多种矿质营养素进行同时测定的方法。背景干扰采用减去空白信号和选择合适的同位素等方法进行消除。经标准参考物验证，本方法具有较好的准确性和重现性。分析结果表明：青钱柳叶中的矿质营养素丰富，以干基计，含量高于２５００ｇ／ｇ的元素有钾、钙、镁、锰、铁、铝的含量在１００～１０００ｇ／ｇ之间；锌．铜、钠的含量为１０～１００ ｇ／g其中锌和锰的含量较高，分别为６７．８１ｇ／和６５４.００g／g具有胰岛素样作用的微量元素铬、镍、 锂、硒和钒的含量分别为： １.３８ ／ｇ、 ２．６３ ｇ／ｇ、 ０．４２ ｇ／ｇ、 ０．５６ ｇ／ｇ、 ５．３８ ｇ／ｇ。上述所测元素在水中的溶出量均与温度有关。在以人工胃酸为溶媒时，这些元素有较大的溶出率。以水为溶媒、结合微波萃取也可获得良好的浸提效果。

青钱柳多糖组分及其降血糖活性研究

采用超声波萃取法 ,从胡桃科植物青钱柳中提取一种具有降血糖活性的多糖复合物 ,提取物得率为9.6 %。用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型验证了青钱柳多糖的生物活性 ,ig青钱柳提取物 4周后 ,小鼠血糖值比糖尿病模型组降低了 41.3 %。葡萄糖耐量实验表明

青钱柳多糖组分生物活性及其元素化学形态分析

为了从青钱柳(CP)中提取降血糖功能活性物质,并获得其中多种降血糖相关性微量元素的化学形态信息.本研究通过四氧嘧啶糖尿病小鼠模型进行青钱柳提取物生物活性验证,用流动注射 电感耦合等离子体质谱法(FIA ICP MS)对功能提取物中的相关元素进行表征.结果表明:青钱柳提取物具有显著的降血糖活性,提取物在IR光谱中显示典型的多糖吸收特征,得率为9.6%.连续四周腹腔注射青钱柳提取物后,小鼠血糖值比糖尿病模型组降低了41.3%.多糖复合物中降血糖相关性元素以可溶态为主.在可溶态元素中,镁主要以无机形态存在,而锰、铜和锌主要以有机形态分布.

青钱柳提取物对家兔实验性糖尿病模型降血糖作用的研究

分别以每天8g/kg体重剂量的青钱柳水提物和醇提物灌饲糖尿病模型家兔,以血糖、体重、糖耐量为指标研究青钱柳提取物的降糖作用。结果表明,经5周试验,灌饲青钱柳提取物家兔的血糖浓度明显低于糖尿病模型对照组,其中青钱柳醇提取物的降糖效果更好(P<0.01)。青钱柳提取物还能减缓实验性糖尿病家兔体重下降,对试验性家兔的糖耐量具有显著的增强作用。

青钱柳中黄酮甙和维生素含量的测定

采用化学和仪器分析方法，对不同产地青钱柳叶中黄酮甙、胡萝卜素、维生素E和维生素C的含量进行了测定。结果表明：江西修水和井冈山所产青钱柳叶中黄酮甙的含量分别为6.26mg/g和6.05mg/g；胡萝卜素分别为：2.08mg/100g和3.07mg/100g；维生素E分别为：7.02 mg/100g和7.57 mg/100g；维生素C分别为：3.08mg/100g和3.42mg/100g。

青钱柳多糖对人宫颈癌HeLa细胞和人脐带内皮细胞生长的影响

目的:研究青钱柳多糖(polysaccharides isolated from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskjk,PCP)对人宫颈癌HeLa细胞和人脐带内皮细胞(HUVEC)生长的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法,观察不同浓度、不同提取方法获得的PCP对HeLa细胞和HUVEC细胞生长的影响。结果:PCP I、II在50、100、200、400μg/ml浓度条件下,均可极显著性抑制HeLa细胞生长(p<0.01)。PCP I、II对HUVEC细胞生长有一定影响,但增殖抑制率不高;在PCP抑癌作用最高的浓度处(200μg/ml),PCP对HUVEC细胞的生长没有影响。结论:PCP极显著性抑制HeLa细胞的生长;在P C P抑癌作用最高的浓度处,P C P对H U V E C细胞的生长没有影响。

青钱柳多糖对高脂血症小鼠脂肪酸合成酶(FAS)表达影响

为探讨青钱柳多糖对高脂血症小鼠脂肪酸合成酶基因表达的影响,通过建立高血脂模型,每天以不同剂量的多糖(100、200和400 mg/kg体重)进行灌胃,以辛伐他汀(4 mg/kg体重)做为阳性对照,持续喂养四周,采用半定量PCR和Western Blot检测小鼠肝脏和脂肪组织FAS mRNA和蛋白表达水平。结果表明,青钱柳多糖能抑制小鼠肝脏组织中FAS mRNA表达水平(P>0.05),而对脂肪组织中FAS mRNA表达水平影响不明显;青钱柳多糖能显著抑制小鼠肝脏组织中FAS蛋白表达水平,以高剂量的多糖效果最佳,与模型组相比,差异极显著(P<0.01);同时也能轻微抑制脂肪组织中FAS蛋白表达水平。结果提示,青钱柳多糖对高脂血症小鼠各内脏中FAS mRNA和FAS蛋白表达具有一定的影响作用。

青钱柳无机元素的初级形态分析

根据元素形态分析模式 ,采用原子吸收光谱法 (FAAS和GFAAS) ,探讨了天然食物资源青钱柳中无机元素的初级形态 结果表明 :青钱柳嫩叶干制品中含有丰富的与人体健康和降血糖作用有关的无机元素 得出了这些元素的含量。

超声波法提取青钱柳多糖

利用超声波法提取青钱柳多糖,研究了超声时间、超声功率、料液比对青钱柳多糖得率的影响,并采用正交试验对青钱柳多糖提取工艺进行优化设计。结果表明,超声波法提取青钱柳多糖的最佳条件为:超声时间70 m in,超声功率1 200 W,料液比1∶10。超声功率和超声时间对提取青钱柳多糖的影响分别为显著差异和极显著差异,因此利用超声波法提取青钱柳多糖可以缩短提取时间,提高得率。