SARS-CoV-2S蛋白mRNA疫苗对不同毒株交叉中和活性的研究

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在感染和持续性进化过程中不断发生变异,导致现有疫苗的有效性降低,因此人类迫切需要能够建立广谱免疫保护的有效疫苗.作者采用mRNA疫苗技术,设计了原型(Prototype)株刺突(Spike,S)蛋白mRNA疫苗(P0).在S蛋白基因序列中引入氨基酸突变位点,制备了Prototype-mut mRNA疫苗P1~P7,并对小鼠进行了免疫.结果表明,引入Q498R-Y505H-H655Y和Q498R-N501Y突变位点的S蛋白mRNA疫苗可以显著提升对Delta株的中和抗体(neutralizing antibody,NAb)滴度(P<0.05).引入Q493R-Q498R-H655Y和Q498R-N501Y突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta、Omicron BA.1等多个毒株的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为1∶194.0、1∶73.5、1∶32.0、1∶194.0、1∶16.0和1∶294.1、1∶294.1、1∶64.0、1∶256.0、1∶8.0.同时,引入Q493R-Q498R-H655Y、Q498R-Y505H和Q498R-Y505H-H655Y等突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta 4种毒株的中和抗体阳转率可达到100%.通过在S蛋白mRNA疫苗中引入点突变的策略,验证了可能具有免疫逃逸或改变受体结合亲和力潜力的氨基酸突变位点的引入对mRNA疫苗交叉中和活性的影响,这为提升mRNA疫苗广谱性的研发提供了参考.

SRPK2调控前体mRNA选择性剪接在酒精性肝病脂质代谢中的机制研究进展

酒精性肝病是长期大量饮酒导致的主要疾病之一,有可能进展为肝硬化甚至肝癌。脂质代谢紊乱在酒精性肝病的发展中扮演着重要的角色。国内外研究尚未完全揭示酒精性肝病中脂质代谢紊乱机制。已有研究证实,SRPK2调控的前体信使RNA选择性剪接在酒精性肝病脂质代谢紊乱中发挥关键作用。本文就国内外文献进行综述,包括酒精性肝病中典型的脂质代谢紊乱机制以及选择性剪接的新机制,旨在为推动酒精性肝病的预防和治疗提供理论参考。

2023年诺贝尔生理学与医学奖解读--核苷碱基修饰与mRNA疫苗

2023年诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家卡塔琳•卡里科(Katalin KARIK)和德鲁•魏斯曼(Drew WEISSMAN),以表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现,为研发有效的抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的mRNA疫苗做出了杰出贡献。掺入修饰碱基的mRNA可以逃避不良的免疫反应,而且含假尿苷的mRNA能更有效地进行翻译。以两位科学家的研究为基础,科研人员完善了mRNA疫苗的研发技术体系。展望了核苷碱基修饰、mRNA疫苗、脂质纳米颗粒技术、mRNA疫苗的应用前景。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA的表达在LSIL患者中的分流价值

目的 探究宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA的表达在宫颈低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者中的分流价值。方法 180例宫颈病变患者,根据病理结果分为宫颈炎(NC)组(40例)、LSIL组(100例)及宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(40例)。比较三组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA表达量、阳性率;比较LSIL组中不同转归者的宫颈脱落细胞中mybl2m RNA及HPV E6/E7 mRNA表达量、阳性率;分析LSIL患者宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA与HPV E6/E7 mRNA的相关性。结果 NC组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA表达量分别为(1.23±0.16)、(1.76±0.32), LSIL组分别为(3.39±0.59)、(5.01±1.32), HSIL组分别为(6.56±0.93)、(8.10±1.69)。三组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);HSIL组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA表达量显著高于NC组、LSIL组, LSIL组显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。NC组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA阳性率分别为25.00%、27.50%, LSIL组分别为76.00%、71.00%, HSIL组分别为95.00%、100.00%。三组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);HSIL组的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA阳性率显著高于NC组、LSIL组,LSIL组显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。LSIL组中不同转归者的宫颈脱落细胞中mybl2mRNA及HPV E6/E7 mRNA表达量、阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);进展者的宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA及HPV E6/E7 mRNA表达量、阳性率显著高于持续者和消退者,持续者显著高于消退者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示, LSIL患者宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA与HPV E6/E7 mRNA呈正相关(r=0.816, P<0.05)。结论 LSIL患者宫颈脱落细胞中mybl2 mRNA的表达与HPV E6/E7 mRNA密切相关,其在LSIL患者中的分流价值较高。

美托洛尔联合重组人脑利钠肽对高龄心衰患者心功能、内皮细胞、GRK2mRNA表达的影响研究

探究美托洛尔联合重组人脑利钠肽对高龄心衰患者心功能,内皮细胞,GRK2 mRNA表达影响研究。方法 选择在2020年1月至2022年1月期间在我院接受治疗的54例高龄心衰患者作为研究对象,采用奇数偶数的顺序法进行分组,分为对照组和实验组,每组各27例。对照组接受重组人脑利钠肽治疗,实验组增加美托洛尔治疗。对比两组疗效。结果 治疗后,实验组患者的左心室射血分数和一氧化氮较对照组更高,血清NT-ProBNP水平和内皮素-1及GRK2 mRNA较对照组更低(P<0.05);两组患者的不良反应对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 美托洛尔联合重组人脑利钠肽治疗高龄心衰,可改善心功能和内皮功能及GRK2 mRNA,用药安全性较好。

HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

HPV E6/E7 mRNA和TOP2A对宫颈高级别鳞状上皮内病变锥切术后复发的影响

目的分析宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)冷刀锥切术后复发的影响因素。方法收集唐山市工人医院和唐山市妇幼保健院2015年1月—2020年6月368例宫颈HSIL患者的临床病理及随访资料,所有患者均行冷刀锥切术,术前均行人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测并定期复查,应用免疫组织化学方法检测宫颈组织ⅡA型拓扑异构酶(TOP2A)和p16表达情况,分析术后复发的影响因素。结果HPV E6/E7 mRNA持续感染组复发率(25.4%)显著高于未持续感染组(6.3%),TOP2A高表达组复发率(12.5%)显著高于TOP2A低表达组(2.9%),差异均有统计学意义(P<0.05)。年龄、象限受累范围、腺体受累、组织学分级、p16表达与复发无关(P>0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7 mRNA持续感染和TOP2A高表达是术后复发的独立危险因素(OR=4.989,OR=3.883;均P<0.05)。不同型别HPV持续感染复发率的差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA持续感染与TOP2A的高表达呈正相关(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA持续感染与TOP2A高表达是宫颈HSIL冷刀锥切术后复发的高危因素,二者可能在复发机制上存在内在联系,检测HPV E6/E7 mRNA持续感染情况及TOP2A表达对宫颈HSIL的术后临床管理具有指导意义。

Katalin Karikó和Drew Weissman助力研发抗新型冠状病毒mRNA疫苗荣获2023年诺贝尔生理学或医学奖

北京时间2023年10月2日瑞典斯德哥尔摩卡罗琳学院宣布,将诺贝尔生理学或医学奖授予美国匈牙利裔科学家卡塔琳·卡里科(Katalin Karikó)和美国科学家德鲁·魏斯曼(Drew Weissman),以表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现,进而为研发有效的抗新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS CoV-2)疫苗做出了杰出贡献。本文将介绍两位科学家的简历、主要科学贡献和他们科学发现的意义。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

鸭TLR2在免疫组织和血液中的表达分析及多克隆抗体制备

为研究Toll样受体2(TLR2)在水禽如鸭先天免疫中的作用,利用荧光定量PCR分析dTLR2 mRNA在1~10周龄鸭免疫器官中表达水平以及大肠杆菌、沙门氏菌感染后血液中dTLR2 mRNA表达变化,初步解析dTLR2在鸭抗感染中的可能作用;通过体外表达鸭dTLR2胞外段,并免疫家兔获得特异性抗体以期为鸭dTLR2免疫应答研究提供生物素材。结果表明,dTLR2 mRNA在不同周龄鸭免疫器官中都有表达,脾脏和胸腺组织中,表达量在不同周龄有显著或极显著变化,但在法氏囊组织中,各周龄间表达变化差异不显著;鸭感染大肠杆菌或者沙门氏菌后,第1天及第2天感染组表达量显著高于对照组,但在第3天时,感染组和对照组表达量差异不显著。研究分析dTLR2编码基因,预测胞外区段并设计引物,构建pET28a-TLR2重组表达质粒,重组表达dTLR2-His融合蛋白。经SDS-PAGE检测表明,重组蛋白成功高效表达,分子质量约29 ku。重组蛋白经镍柱纯化并透析后免疫家兔制备抗血清;所获家兔免疫抗血清能特异性的识别重组TLR2蛋白和组织中内源性TLR2蛋白。鸭dTLR2 mRNA组织中表达分析及多克隆抗体的成功制备将为进一步研究dTLR2的生物学功能提供生物素材。

参芪复方对糖尿病GK大鼠肝脏组织mRNA、lncRNA表达谱的影响

目的应用全转录组测序与实时聚合酶链锁反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术,探索参芪复方调控糖尿病GK大鼠肝脏信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的机制研究。方法采用高脂高糖饲料建立2型糖尿病模型,将GK大鼠随机分为模型组、参芪复方组和西药组。另将10只Wistar大鼠设为空白组,予普通饲料喂养。参芪复方组大鼠予参芪复方浸膏灌胃,西药组予西格列汀混悬液灌胃,模型组及空白组灌服生理盐水。干预12周,每周检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)。运用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态,在空白组、模型组和参芪复方组中每组随机选取4只大鼠进行全转录组测序,构建mRNA、lncRNA差异表达谱,分析差异基因生物学功能,并进行RT-qPCR验证。结果与空白组相比,糖尿病GK大鼠FBG显著升高(P<0.05),模型组大鼠肝脏可见肝细胞排列紊乱,边界模糊,出现弥漫空泡状改变,呈中度脂肪变性,伴见炎性浸润、弥漫水肿;与模型组相比,参芪复方组大鼠FBG在12周时明显降低(P<0.05),肝脏组织排列较整齐,脂质沉积、细胞水肿及炎细胞浸润明显减轻。全转录组结果显示,与空白组相比,模型组大鼠mRNA、lncRNA表达谱存在显著差异,决定了糖尿病大鼠生理病理上的差异表现。参芪复方可广泛调控mRNA、lncRNA的差异表达,富集分析显示参芪复方通过调控多条内分泌系统及代谢过程相关信号通路改善糖尿病,包括胰岛素分泌、非酒精性脂肪性肝病、胆固醇代谢、鞘脂代谢、胰岛素抵抗等信号通路。RT-qPCR结果显示,基因Irf1、Trim30、Tmcc3、Insig1与转录组结果一致,转录组准确性较高。结论参芪复方发挥调节血糖及改善肝脏脂质沉积、水肿的作用,可能与广泛调控mRNA、lncRNA的差异表达有关。

假尿苷修饰体外转录mRNA在翻译过程中发生的+1核糖体框架移码

为应对世界范围内的COVID-19疫情,假尿苷(Ψ)修饰的体外转录mRNA(Ψ-IVT-mRNA)被授权应用于SARS-Cov-2 mRNA疫苗。最近,Ψ-IVT-mRNA被发现在翻译蛋白质时发生核糖体“滞顿”,导致+1核糖体移码,在体外和体内翻译出异常的蛋白质。在接种SARS-Cov-2 mRNA疫苗的人群,这种异常蛋白可能激发脱靶T细胞反应或抗体反应或产生其它意想不到的副作用。这一发现对研制有效“安全”的mRNA疫苗/药物有“警示”和指导意义。

宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达在绝经后HR-HPV并LSIL/ASC-US患者中的分流价值

目的探讨宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达水平在绝经后细胞学检查为低级别鳞状上皮内病变(LSIL)或无明确诊断意义的不典型鳞状细胞(ASC-US)且合并高危型HPV(HR-HPV)感染患者中的诊断分流价值。方法收集宫颈细胞学筛查为LSIL或ASC-US且合并HR-HPV感染绝经后患者的宫颈脱落细胞共120例,用qPCR检测宫颈脱落细胞的mybl2 mRNA表达水平。所有患者均经阴道镜下宫颈活检术行病理检查,根据病理结果分为宫颈癌(SCC)组(n=4),高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(n=18),LSIL组(n=38),宫颈炎症(NC)组(n=60),比较组间的mybl2 mRNA表达水平;根据HPV感染类型分为16/18型感染组(A组,n=35),16/18型合并其他HR-HPV感染组(B组,n=38),其余HR-HPV感染组(C组,n=47),比较组间的mybl2 mRNA水平。结果SCC组、HSIL组、LSIL组mybl2 mRNA表达水平均明显高于NC组(P<0.05);SCC组、HSIL组mybl2 mRNA表达水平均明显高于LSIL组(P<0.05);SCC组mybl2 mRNA表达水平明显高于HSIL组(P<0.05)。不同HPV感染组间宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达水平比较,A组、B组mybl2 mRNA表达水平明显高于C组(P<0.05),而A组和B组mybl2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈脱落细胞的mybl2 mRNA表达水平随宫颈病变程度的加重而升高,且16/18型HPV患者的mybl2 mRNA表达水平明显更高,提示mybl2 mRNA可能作为细胞学为LSIL或ASC-US且合并HR-HPV感染绝经后患者的诊断分流指标,以提高宫颈癌筛查准确率并减少医疗资源浪费。

血清ST2、ST2mRNA水平与脑出血患者脑损伤严重程度及预后的关系

目的 探讨脑出血患者血清肿瘤发生抑制蛋白2(ST2)、ST2mRNA表达水平与脑损伤严重程度及预后的关系。方法 选取我院收治的106例脑出血患者为研究组,根据格拉斯哥昏迷(GCS)评分将其分为中轻度组、重度组;另选同期50例健康体检者作为健康对照组。检测两组血清的ST2及ST2mRNA表达水平,对研究组出院后进行半年随访,根据格拉斯哥预后(GOS)评分分成预后不良组和预后良好组。分析不同脑损伤严重程度、预后患者的血清ST2及ST2mRNA水平差异,并评估其在脑损伤及预后方面的价值。结果 研究组血清ST2及ST2mRNA表达水平明显高于对照组,重度组高于中轻度组,预后不良组高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清ST2及ST2mRNA评估脑损伤严重程度的AUC分别为0.826、0.776;血清ST2及ST2mRNA评估脑出血患者预后的AUC分别为0.724、0.664,证明其在脑损伤严重程度和预后评估方面的价值更高。结论 脑出血患者脑出血后血清ST2及ST2mRNA水平明显升高,且不同脑损伤和预后患者存在明显差异,其可较好评估脑损伤严重程度和预后。

三角鲂foxl2基因克隆和时空表达特征及EE2对其表达的影响

为探究foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在三角鲂(Megalobrama terminalis,M.terminalis)性腺发育过程中的功能,该研究克隆了三角鲂foxl2基因的开放阅读框(open reading frame, ORF),分析了其编码蛋白的结构特征,检测了其在胚胎发育不同时期和成体不同组织中的表达情况,并研究了腹腔注射性激素17α-乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol, EE2)对foxl2表达的影响。结果表明:三角鲂foxl2基因ORF为921 bp,共编码306个氨基酸,具有保守的叉头(forkhead, FH)结构域,与斑马鱼(Danio rerio)FOXL2的同源性较高达到96%。三角鲂FOXL2蛋白与鲤科鱼类亲缘关系较近,而与人类和小鼠相距较远。qRT-PCR结果显示,foxl2 mRNA在三角鲂整个胚胎发育过程中均表达,在受精后24、48、60 h表达量较高(P<0.05);在卵巢中的表达量显著高于精巢和其他组织(P<0.05),在肌肉、皮肤、脾、肾和肠组织中弱表达或不表达,表达具有组织特异性。腹腔注射EE2对三角鲂foxl2 mRNA表达调控结果显示,在脑组织中,雌鱼foxl2 mRNA在注射24 h达到峰值且显著高于对照组和雄鱼(P<0.05);在性腺组织中,foxl2 mRNA在注射24 h后的卵巢和精巢中表达量最高,且在36 h的卵巢中持续高表达(P<0.05),表明EE2能够明显促进三角鲂脑和卵巢foxl2 mRNA的表达。研究表明,foxl2基因在三角鲂性腺中呈性别二态性表达,推测其在卵巢发育和功能维持方面起重要作用,foxl2可能是与性类固醇激素相互作用来调节三角鲂性腺发育和功能维持。该研究可为三角鲂性腺发育及性别调控机制提供基础资料。

肝衰竭患者外周血单个核细胞hTERT mRNA及血清Ang-2和ICAM-1水平临床意义探讨

目的初步探讨肝衰竭患者外周血单个核细胞人瑞粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及血清血管生成素-2(Ang-2)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平变化的临床意义。方法2019年1月~2021年5月我院诊治的74例肝衰竭患者【亚急性肝衰竭(SALF)13例,慢加急性肝衰竭(ACLF)39例和慢性肝衰竭(CLF)22例】和同期健康体检者30例,分离并检测外周血单个核细胞(PBMC)hTERT mRNA水平,采用ELISA法检测血清Ang-2和ICAM-1水平。结果肝衰竭组PBMC hTERT mRNA、血清Ang-2和ICAM-1水平分别为(0.9±0.3)、(1344.6±55.3)ng/L和(540.2±22.4)ng/ml,显著高于健康人组【分别为(0.4±0.1)、(1062.5±36.2)ng/L和(167.3±15.6)ng/ml,P<0.05】;SALF患者PBMC hTERT mRNA、血清Ang-2和ICAM-1水平分别为(1.5±0.6)、(1507.8±38.2)ng/L和(647.3±26.2)ng/ml,显著高于ACLF患者【分别为(1.2±0.4)、(1398.6±35.8)ng/L和(582.7±24.1)ng/ml,P<0.05】或CLF患者【分别为(0.7±0.2)、(1280.5±46.3)ng/L和(468.9±20.3)ng/m,P<0.05】;经过1~3 m治疗,SALF组死亡3例,ACLF组死亡5例,CLF组死亡4例。结论肝衰竭患者PBMCs hTERT mRNA及血清Ang-2和ICAM-1水平显著升高,它们可能为判断肝损伤程度提供客观依据,值得进一步研究。

METTL3通过IGF2BP2依赖性方式参与m6A修饰调控HBV复制的机制

目的探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)协助甲基转移酶样3(methytransferase like 3,METTL3)通过N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰调控HBV复制的分子机制。方法以HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15及其亲本细胞HepG2为模型,斑点杂交分析m6A修饰水平,RT-qPCR和Western blot检测METTL3、IGF2BP2表达。生物信息学及免疫共沉淀分析METTL3与m6A阅读蛋白及其相互作用。将METTL3质粒、METTL3 siRNA和(或)IGF2BP2 siRNA转染至HepG2.2.15细胞,分别记为OE-METTL3、si-METTL3、si-IGF2BP2、OE-METTL3+si-IGF2BP2、si-METTL3+si-IGF2BP2、Control组;qPCR检测HBV DNA、HBV rcDNA、HBV cccDNA拷贝数,RT-qPCR或Western blot检测HBV pgRNA、METTL3、IGF2BP2表达。结果与HepG2细胞相比,在HepG2.2.15细胞中m6A修饰富集,METTL3、IGF2BP2表达水平升高(P<0.05)。与Control组相比,在OE-METTL3组中m6A修饰富集增强,IGF2BP2表达水平升高(P<0.05),HBV复制相关指标(HBV DNA、HBV rcDNA、HBV cccDNA、HBV pgRNA)升高(P<0.01);在si-METTL3组中则相反。生物信息学分析及免疫共沉淀显示METTL3与IGF2BP2为互作蛋白。与Control组相比,在si-IGF2BP2组中m6A修饰富集减弱,METTL3表达水平降低(P<0.01),HBV复制相关指标降低(P<0.01)。在OE-METTL3+si-IGF2BP2组中,HBV复制相关指标较OE-METTL3组降低(P<0.001)。在si-METTL3+si-IGF2BP2组中,HBV复制相关指标较si-METTL3组、si-IGF2BP2组降低(P<0.05)。结论METTL3依赖IGF2BP2富集m6A通过增强HBV rcDNA转化为cccDNA,进而增强pgRNA逆转录复制病毒。

泛素特异性蛋白酶21对胆管癌细胞增殖及迁移的影响及机制

目的:探究泛素特异性蛋白酶21(USP21)在胆管癌(CCA)中的表达及其对CCA细胞增殖与迁移的作用及其机制。方法:通过生物信息学方法和免疫组化及WB法检测CCA组织及细胞中USP21的表达情况。利用体外克隆形成、EdU及Transwell实验检测敲低USP21对CCA细胞QBC939和RBE增殖及迁移的影响。通过RNA测序、质谱、免疫共沉淀(Co-IP)及WB法探究USP21的促癌机制。结果:TCGA等数据库分析结果显示,USP21 mRNA在CCA组织中呈高表达(均P<0.05)。USP21蛋白在CCA组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.001或P<0.0001)。敲低USP21后,QBC939和RBE细胞的增殖和迁移能力均显著降低(P<0.01或P<0.001)。RNA测序结果表明,敲低USP21可以通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制CCA细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。质谱鉴定发现,USP21与胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)相结合。Co-IP和WB实验结果表明,USP21与IGF2BP1结合并通过泛素化途径调控IGF2BP1的蛋白表达(P<0.001或P<0.0001)。结论:USP21在CCA组织和细胞中均呈高表达,其通过IGF2BP1/PI3K/AKT信号通路增强CCA细胞的增殖及迁移能力。