沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

核因子-κB激活与细胞凋亡在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）活化及细胞凋亡与肺损伤的关系.方法：SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜和电镜下病理观察,免疫组织化学观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果：对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞及血管内皮细胞有线粒体肿胀、基膜增宽、核染色质边集、间质水肿、电子密度升高等病理改变.NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及部分血管内皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论：SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.

Survivin基因在重症急性胰腺炎并发肺损伤大鼠中的表达及作用

目的研究大鼠重症急性胰腺炎(sever acute pancreatitis,SAP)肺损伤时凋亡抑制因子Survivin表达与肺损伤的关系。方法 40只雄性SD大鼠随机分为四组:对照组(n=10)和SAP 6 h组(n=10)、12 h组(n=10)、24 h组(n=10),采用胰胆管逆行穿刺注射4.5%牛磺胆酸钠建立SAP模型。采用RT-PCR法检测肺组织中Survivin的表达,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡的变化。结果 SAP造模后,肺组织细胞6 h、12 h、24 h凋亡指数分别为3.97±1.67、9.69±1.01、12.10±1.71,对照组为0.171±0.045(P<0.05);Survivin蛋白mRNA的表达分别为0.512±0.169、0.813±0.201、1.431±0.251,对照组肺组织中未见Survivin蛋白mRNA表达(P<0.05)。结论 Survivin基因在SAP大鼠并发肺损伤时肺组织中呈异常高表达,Survivin表达的高低与肺组织损伤的严重程度有关,可能起到减轻肺组织损伤和促进其修复的作用。

低剂量环磷酰胺对特重度烧伤大鼠早期肺实质细胞凋亡的影响

目的探讨低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)对特重度烧伤大鼠早期肺实质细胞凋亡的影响及可能机制。方法清洁级雄性SD大鼠90只,随机分为3组:空白组(n=10)、实验组(n=40)和单纯烧伤组(n=40)。实验组和单纯烧伤组制备30%体表面积Ⅲ度烧伤动物模型,实验组于造模后立即腹腔注射CY(2mg/kg),单纯烧伤组和空白组不作任何处理。造模后3、6、12和24h取肺组织,行HE染色观察,并采用TUNEL法观察肺实质细胞凋亡变化。结果组织学观察示空白组肺泡结构清晰,肺泡腔及支气管腔未见明显炎性细胞及渗出物,可见少许RBC;单纯烧伤组见肺泡隔明显增宽,肺泡壁破坏,肺间质水肿,肺萎陷等病理改变,且随时间延长肺病理损害逐渐加重;实验组相应时间点上述损害均好于单纯烧伤组。单纯烧伤组肺实质细胞凋亡比例于建模后3h持续增高,12h达峰值,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肺实质细胞凋亡比例于建模后3h增高,6、12h降至正常水平,24h显著下降,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。12、24h时两组肺实质细胞凋亡比例差异有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量CY能抑制特重度烧伤大鼠早期肺实质细胞的凋亡,减轻肺组织损伤。

实验性重症急性胰腺炎肺损伤中核因子-κB活化与细胞凋亡关系的研究

目的探讨核因子-κB(NF-κB)激活及细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺组织损伤中的作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、SAP组、PDTC预处理组。建立各组模型后取肺组织行光镜下病理观察,免疫组织化学法观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡。SAP组中NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6 h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞。PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组。结论 SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤。PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡减轻重症急性胰腺炎并发肺损伤。

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用及对MAPK通路的影响

[目的]观察大黄素对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺损伤的保护作用,并初步探究其作用机制。[方法]将80只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级SD大鼠随机分为对照组、模型组、大黄素高剂量组和大黄素低剂量组,每组20只。除对照组外,其余组大鼠均使用牛磺脱氧胆酸钠建立SAP大鼠模型,动物苏醒后1h及6h,大黄素高、低剂量组大鼠分别给予60mg·kg^(-1)和30mg·kg^(-1)的大黄素灌胃,对照组和模型组大鼠以等量0.5%羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na)灌胃。造模12h后检测大鼠肺组织湿干重比(wet-to-dry weight ratio,W/D)、动脉血氧分压(partial pressure of oxygen,PaO2)、二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)、氧合指数(oxygenation index,OI);苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测肺组织病理变化;酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测血清脂肪酶、淀粉酶、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量、肺组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein gene,Bax)mRNA表达水平;Western blot检测肺组织Bcl-2、Bax蛋白表达水平和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase 1/2,ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平。[结果]与对照组比较,模型组W/D和PaCO2升高,PaO2和OI降低,血清脂肪酶、淀粉酶、TNF-α、IL-6、MDA含量升高,SOD活力降低,肺组织充血、水肿,有大量炎症细胞浸润,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,BaxmRNA和蛋白表达增加,p38 MAPK、ERK1/2、JNK蛋白磷酸化水平增加。与模型组比较,大黄素可降低W/D和PaCO2,增加PaO2和OI,降低血清脂肪酶、淀粉酶、TNF-α、IL-6、MDA含量,提高SOD活力,改善肺组织肺损伤,提高Bcl-2 mRNA和蛋白表达,减少Bax mRNA和蛋白表达,降低p38 MAPK、ERK1/2、JNK蛋白磷酸化水平,其中高剂量大黄素的作用优于低剂量。上述指标差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]大黄素对SAP大鼠肺损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路的关键蛋白活化有关。

川芎嗪防护严重烧伤大鼠急性肺损伤及对NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的探讨川芎嗪对严重烧伤大鼠急性肺损伤(ALI)的防护作用及核因子κB(NF-κB)/NLRP3信号通路的影响。方法将60只SD大鼠随机分成对照组、模型组、川芎嗪组,其中模型组、川芎嗪组构建严重烧伤大鼠ALI模型,并于造模成功后给予相应药物腹腔注射,对照组和模型组分别给予37℃温水和等体积生理盐水。结果与对照组比较,模型组、川芎嗪组大鼠湿肺/体质量比值、肺损伤评分明显升高,动脉氧分压(PaO2)水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,川芎嗪组大鼠湿肺/体质量比值、肺损伤评分明显降低,PaO2水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组、川芎嗪组肺NF-κBmRNA及NLRP3mRNA、蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,川芎嗪组大鼠肺NF-κBmRNA及NLRP3mRNA、蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组、川芎嗪组大鼠IL-2,IL-6,TNF-α蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,川芎嗪组大鼠IL-2,IL-6,TNF-α蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论川芎嗪对严重烧伤大鼠ALI具有防护作用,其机制可能与川芎嗪能抑制炎症信号通路NF-κBmRNA和NLRP3mRNA、蛋白表达水平,从而抑制炎性因子IL-2,IL-6,TNF-α的表达有关。

电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组（n=8）：对照组、烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-银环蛇毒素组（α-BGT组）.对照组尾静脉注射生理盐水1 ml.烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-BGT组先制备30%总体表面积Ⅲ度烫伤模型,然后烫伤组尾静脉注射生理盐水1 ml;足三里组于双侧足三里穴垂直进针7 mm,给予脉冲电流（电压3V,电流2ms,频率3 Hz）持续刺激12 mim,间隔8 h刺激1次,持续2 d;非经非穴组于双侧足三里穴旁5mm处给予脉冲刺激,方法同足三里组;α-BGT组尾静脉注射α-BGT 1.0 μg/kg,再于双侧足三里穴给予脉冲刺激,方法同足三里组.各组处理结束后,处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,电镜下观察超微结构,采用ELISA法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBl）含量,采用免疫组化法测定HMGBl蛋白表达,采用RT-PCR法测定HMGBl mRNA表达.结果 烫伤组肺组织光镜下可见肺泡壁崩解,泡内大量渗出液,间质水肿、肥厚和增生,伴大量炎性细胞浸润;电镜下可见细胞核形态不规则,核膜僵硬,部分凸凹不平和核溶解,胞质内板层小体明显减少,肺组织病理损伤程度较对照组减轻.与对照组比较,烫伤组、非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）,足三里组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与烫伤组比较,足三里组肺组织HMGBl含量降低,HMGBl蛋白及其mRNA的表达下调,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl mRNA表达下调（P〈0.05）;与足三里组比较,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）.结论 电针足三里可减轻严重烫伤致大鼠急性肺损伤,其机制与激活含α7亚基N型胆碱能受体介导的胆碱能抗炎通路,抑制肺组织HMGBl的表达有关.