不同产地榲桲(Cydonia oblonga Miller)果实性状比较

以六个不同产地的榲桲作为试材,比较榲桲果实的外观指标及其矿质元素含量,测定活性氧酶促清除系统中POD,CAT,SOD酶的活性,用气质联用仪分析榲桲的香气类型。结果表明,喀什榲桲的果实单果重最大,北京榲桲最小;西安D榲桲的SOD、POD活性极显著高于其它五地榲桲,阿克苏B榲桲CAT活性最大;在所测矿质元素方面,西安兴庆宫(即D)榲桲果实的N含量显著高于其它四地,喀什Zn含量最高,曲阜Fe、Mg含量最高,其它元素含量差异不显著;榲桲果实的香气类型主要为酯香型。不同产地榲桲的性状不仅在外观上存在着很大的差异,在果实内在品质上也有很大区别。

Study on the anti-hypertensive effect of total flavonoids of Cydonia oblonga Mill. and its mechanism based on anti-inflammatory function

Aim To study the anti-hypertensive effect of total flavonoids of Cydonia oblonga Mill. in spontaneously hypertensive rats, then preliminarily investigate the mechanism of action based on anti-inflammatory function. Methods Total flavonoids of COM （COMF） were separated and purified by the optimal process, SHR were divid- ed into 6 groups as SHR control group （SHR）, captopril group （CAP, 25mg· kg^-1 · d^-1）, Eucommia ulmoides Oliver group （EUO, 30 mg · kg^-1· d^-1）, low （COMF-L, 40 mg · kg^-1· d^-1）, middle （COMF-M, 80 mg · kg^-1 · d^-1） and high dose （COMF-H, 160 mg · kg^-1· d ^-1） of COMF groups. 8 Wistar-Kyoto （WKY） rats were given distilled water instead as control. The drugs were given by intragastric administration for 16 weeks, then the levels of IL-1β, IL-6, IL-10, TNF-α and CRP in serum were tested. Results Compared with WKY group, the levels of IL-I~, IL-6, TNF-α and CRP were increased and IL-10 was decreased; Compared with SHR group, the levels of IL-1β, IL-6, TNF-α and CRP were decreased in COMF groups （P 〈0.01 or P 〈0.05） , while IL-10 was increased a little but without any significant difference （P 〈 0.05 ）. Conclusion Total flavonoids of Cydonia ob- longa Mill. showed the anti-hypertensive activity in spontaneously hypertensive rats and the mechanism was related to the function of anti-inflammatory.

The effects and mechanisms of total flavonoids of Cydonia oblonga Mill. on myocardial hypertrophy in spontaneously hypertensive rats

Aim To study the activity and mechanism of inhibition of myocardial hypertrophy of total flavonoids of Cydonia oblonga Mill. in spontaneously hypertensive rats. Methods Total flavonoids of COM （COMF） were sepa- rated and purified by the optimal process. SHtl were divided into 6 groups： SHR control group （SHR） , captopril group （SHR ＋ CAP, 25 μg · g^-1）, Eucommia ulmoides Oliver group （SHR ＋ EUO, 30 μg · g^-1）, low （SHR ＋ COMF-L, 40 μg · g^-1） ,middle （SHR ＋ COMF-M, 80 μg· g^-1） and high dose （SHR ＋ COMF-H, 160 μg · g^-1） of COMF groups. Wistar-Kyoto （WKY） rats （n= 8 ） were given distilled water as control The drugs were given by intragastric administration for 16 weeks. The histological and pathological examination of the heart were performed and organic damage were valued. The levels of Ang II and ALD in blood and heart were evaluated. The mRNA and protein expression of ACE, ACE2 and AT~ was determined by RT-PCR and Western blot to evaluate the effect of COMF on RAAS. Results Compared with SHR control group, HW, HW/BW, LVM and LVM/BW de- creased in SHR ＋ COMF-M and SHR ＋ COMF-H groups; Cadiomyocyte hypertrophy was inhibited in COMF groups; The concentration of Ang 11 and ALD in heart and blood decreased; ACE and AT1 mRNA and protein ex- pression in heart tissue decreased while ACE2 mRNA expression increased （P 〈 0.01 or P 〈 0.05） , Conclusion Total flavonoids of Cydonia oblonga Mill. showed the effect of inhibition of myocardial hypertrophy in spontaneously hypertensive rats and the mechanism was related to. inhibit the activity of Renin-angiotensin-aldosterone system.

1H-NMR based metabolomics approach to evaluate effect of Cydonia oblanga Miller total flavonoid on atherosclerosis apoE(-/-) mice

OBJECTIVE ~1H-NMR-based metabolomics approach was conducted to holistically explore the effect and mechanisms of Cydonia oblanga Mill flavonoids(COMF) on high-fat diet induced Atherosclerosis(AS) apoE-/-mice.METHODS AS model was established on the apolipoprotein e knockout mice by high-fat diet.The ApoE-/-mice were split into 6 groups including control group,AS model group,COMF High dose(COMF-H) group,COMF medium dose(COMF-M) group,COMF Low dose(COMF-L) group and Simvastatin group as the positive control group.Serum samples from all groups were analyzed by ~1H-NMR technology and the OPLS-DA was conducted to distinguish the metabolic phenotypes.RESULTS Compared to the control group,serum levels of cholesterol,VLDL,leucine,isoleucine,valine,blood lipid,citrulline,methylamine,glucose,glycine,glycerol,myo-inositol,fructose,phenylalanine,unsaturated lipid,urea and other metabolites content significantly increased,while HDL,lactate,alanine,glutamate,glutamine,pyruvate,carnitine,citrate,choline content signifi.cantly decreased and the difference was statistically significant(P<0.05).The trend of metabolites in serum samples of COMF low,medium and high group was opposite to that of atherosclerosis model group and the difference was statistically significant(P<0.05).CONCLUSION Through functional analysis of these biomakers,amino acid metabolism,lipid metabolism,cholesterol metabolism,energy metabolism and inflammation reaction were considered as the most relevant pathological biomakers in the serum of AS mice.This study also demonstrates that COMF had the therapeutic effectiveness on AS through partly reversing the lipid,cholesterol,amino acid,energy metabolism and Inflammation reaction.

榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制

目的探讨榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型。取人晶状体上皮细胞加入含有30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖组。用含有5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h记为对照组。取人晶状体上皮细胞按照每孔5×10^(3)个接种于96孔板,分别加入含有10 mmol·L^(-1)、20 mmol·L^(-1)、40 mmol·L^(-1)榅桲总黄酮与30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖+低榅桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组。用Lipofectamine2000转染试剂向人晶状体上皮细胞分别转染anti-miR-NC、anti-miR-370,随后加30 mmol·L^(-1)葡萄糖处理24 h,命名为高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-370组。分别向人晶状体上皮细胞转染miR-NC、miR-370 mimics,加30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基及40 mmol·L^(-1)榅桲总黄酮处理24 h,记为高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组、高糖+榅桲总黄酮+miR-370组。采用ELISA法监测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测miR-370表达量,Western blot检测凋亡蛋白表达情况。结果与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞SOD和CAT的活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组、高糖组、高糖+低榅桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞miR-370表达量分别为1.00±0.00、4.04±0.36、3.22±0.24、2.42±0.23和1.62±0.14,5组比较差异有统计学意义(F=256.138,P<0.05)。与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞miR-370表达量降低,SOD和CAT活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组相比,高糖+榅桲总黄酮+miR-370组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量、细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论高糖诱导的人晶状体上皮细胞中miR-370的表达升高,榅桲总黄酮可抑制高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,其作用机制可能与其能降低miR-370表达有关。

Functional response of the ladybird, Cydonia vicina nilotica to cowpea aphid, Aphis craccivora in the laboratory

The functional response of Cydonia vicina nilotica Muls. （Coleoptera： Coccinellidae） to six densities of Aphis craccivora Koch （Homoptera： Aphididae） nymphs on broad bean （Viciafaba Linn.） was investigated in the laboratory. A linear relationship between the rate of consumption and prey density was observed with r^2 values between 0.58 and 0.97. Plotting prey density against prey killed by four larval instars, and adult males and females of C. vicina nilotica fit well with the type Ⅱ model of Holling＇ s disc equation. Adult females consumed the highest number of prey, followed by fourth instars and adult males. Based on the functional response data, the model predicts a maximum of 144.9, 116.3, 86.2, 80.0, 72.5 and 20.0 nymphs to be consumed per day by an individual adult female, fourth instar, adult male, third, second and first instars, respectively. The differences in the responses of the predator to aphid densities are discussed.

世界古老果树榅桲在中国的归化及其种群动态——以湖南省褒忠山种群为例

外来植物归化因其对本地生态系统有潜在的入侵风险而受到生态学家的广泛关注。群落和种群结构反映植物的环境适应性、种群地位、稳定性和发展趋势,可为判定外来植物归化提供可靠依据。榅桲(Cydonia oblonga)为在全球广泛引种栽培达4000多年的古老果树,引入中国已有2500多年,但关于其野外逸生种群的生存状态未见报道。以目前中国唯一逸生地——湖南省褒忠山的榅桲种群为对象,在其所在群落物种组成和群落结构分析的基础上,采用时空替代法,运用静态生命表、生存曲线和时间序列预测模型对榅桲种群动态进行了定量分析。结果表明:(1)群落内共有维管束植物20科28属31种,其中木本植物16种,草本植物15种;区系以温带成分为主,占群落内非世界分布总属数的75%;(2)群落具有明显层次结构,可分灌木层和草本层,灌木层个体集中于0—1.5 m高度级,占总个体数的81.81%;(3)种群龄级结构呈近倒“J”型,存活曲线趋近于Deevey-Ⅱ型,具有稳定的更新潜力;(4)生存分析表明榅桲种群具有前期优势、中期减少、后期稳定的特点;时间序列预测表明该种群个体数量未来能够持续增长,但幼苗及小树个体基本保持稳定,其种群更新能力一般。结果显示,榅桲已归化,研究可为区域外来物种管理和榅桲的进一步开发利用提供科学参考。

榅桲果醋的制备工艺优化及风味成分分析

果醋是一种具有独特口感和风味的发酵型饮料或调味品。该研究以新鲜喀什榅桲为原料,采用液态发酵法,通过单因素试验和正交试验优化制备工艺,使用顶空固相微萃取联合气相色谱-质谱法(HS-SPME-GC-MS)测定果醋的挥发性风味成分。结果表明,榅桲果醋发酵的最佳工艺条件为醋酸菌接种量1.0%、初始酒精度8.0%、发酵温度34℃,此时果醋总酸含量为4.05 g/dL,感官评分为89.87分,颜色呈亮黄色,澄清,酸甜爽口。榅桲果醋中共鉴定出33种挥发性风味成分,其中醇类6种、酚类3种、酮类2种、醛类3种、酸类5种、酯类11种和其他类3种,酯类和醇类相对含量较高,赋予榅桲果醋独特的风味。该研究结果为新型果醋风味饮品的研发提供了参考。

榅桲C4H基因的克隆、序列分析及表达

【目的】肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H)是调节木质素合成的关键基因,榅桲是新疆特色经济果树之一。目前,有关榅桲C4H基因的序列信息尚不明确。为了获得该基因的序列信息及其在果实不同发育时期的差异性表达规律,为深入研究该基因在榅桲果实发育过程中的作用和功能奠定基础。【方法】以榅桲果实为研究材料,基于GenBank已登录近源物种的C4H基因的cDNA序列,提取其果实的总RNA并反转录为cDNA,利用同源克隆的方法获得榅桲C4H基因的cDNA序列,并对该序列进行生物信息学分析,同时检测在榅桲果实开花后不同时间点C4H基因表达量的差异。【结果】同源克隆结果表明:C4H基因编码区的序列全长为1 518 bp,编码505个氨基酸,其蛋白的分子质量为58.28 kD。生物信息学分析结果显示:榅桲C4H蛋白为亲水性不稳定蛋白质,其二级结构以α-螺旋和无规卷曲结构为主。系统进化分析结果显示:榅桲C4H蛋白与甜樱桃(Prunus avium,XP021806844.1)、山杏(Prunus armeniaca,VVA16404.1)的C4H蛋白同源性均较高,其相似性分别为92.87%和91.24%。实时荧光定量PCR的结果显示:随着榅桲果实的发育,在开花后10 d的果肉中C4H基因的表达量最高,随着果实的不断发育,果肉中C4H基因的表达量逐渐减少。【结论】成功获得了榅桲C4H基因全长编码区序列,并发现了C4H基因在果实发育初期的表达最高,这与榅桲果实的木质化程度密切相关。

黑加仑、榅桲、无花果、桑椹和啤酒花苦味酸及制品抗氧化作用研究

利用单扫描示波极谱法研究了黑加仑、、无花果、桑椹及各种啤酒花有效成分对活性氧自由基(O2)的清除作用。超氧阴离子自由基通过邻苯三酚自氧化体系产生。啤酒花中主要的有效成分α-酸、β-酸、浸膏和苦水对超氧阴离子自由基有一定的清除作用,其中苦水最强,α-酸和浸膏略差,β-酸因难溶于测试溶液而未得到结果;黑加仑、、无花果和桑椹也可以清除超氧阴离子自由基,其中清除能力的大小顺序为:黑加仑>>桑椹>无花果。分别计算了各样品对自由基清除作用的IC25。.

盐胁迫对榅桲组培苗生长及其生理特征的影响

以榅桲组培苗为实验材料,采用不同质量分数的NaCl和Na2SO4处理后,观察盐胁迫对其生理生化指标的影响.结果表明:榅桲组培苗萌芽率、增殖倍数和平均株高均随2种盐质量分数的增大而降低,并在2种盐质量分数皆为1.0%时不再萌芽,平均株高降至试验最低值,而在NaCl和Na2SO4质量分数分别为0.8%和1.0%时不再增殖;榅桲组培苗叶片膜透性随着2种盐质量分数的增大而升高且与对照差异显著,并于盐质量分数为1.0%时均达到试验最大值,而当NaCl和Na2SO4质量分数分别为0.8%和1.0%时,组培苗致死率超过50%;组培苗叶片的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均随着2种盐质量分数的增大呈先上升后下降趋势,而过氧化物酶(POD)活性则随着2种盐质量分数的增加而持续增强.研究发现,盐胁迫榅桲组培苗的相关指标均与相应对照有显著差异,其中的叶片膜透性及其SOD、CAT以及POD均可作为鉴定榅桲耐盐性评价指标.

榅桲总黄酮降压作用及抗炎机制的实验研究

目的:研究榅桲总黄酮对自发性高血压大鼠血压的影响,并从抗炎角度初步探讨其作用机制。方法:自发性高血压大鼠分为模型组、卡托普利(25 mg/kg)组、杜仲平压片(30 mg/kg)组及榅桲总黄酮低(40 mg/kg)、中(80 mg/kg)、高(160 mg/kg)剂量组,以WKY大鼠为正常对照组。记录给药前(0 min)及给药后2、4、6、8、10、12、14、16 w各组大鼠的体质量与血压,并于各组大鼠灌胃给药16 w后,分别检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α及CRP的含量,评价榅桲总黄酮对炎症因子的影响。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血压及血清IL-1β、IL-6、TNF-α和CRP等炎症因子含量显著升高,IL-10含量显著降低;与模型组比较,榅桲总黄酮各剂量组血压及血清IL-1β、IL-6、TNF-α和CRP水平均有不同程度降低。结论:榅桲总黄酮可抑制自发性高血压大鼠血压升高,其作用机制可能与降低体内炎症因子水平,进而抑制高血压的发生发展有关。

榅桲果实CAD基因的克隆、序列分析及表达

【目的】研究榅桲果实木质化与CAD基因的关系。【方法】基于GenBank报道的近缘物种CAD基因cDNA序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PCR扩增引物。提取榅桲总RNA,经反转录后合成cDNA,应用RT-PCR方法成功扩增出CAD基因片段并克隆到pMD18-T载体。通过DNAstar软件进行同源序列比对,ClustalX结合MEGA4.1软件构建系统进化树,采用Protparam在线程序分析蛋白质的理化性质,用DNAstar的Protean程序预测二级结构。通过间苯二酚染色鉴定果肉发育时期木质素的积累程度,并利用RT-qPCR对CAD基因在发育期时期的表达规律进行检测。【结果】榅桲CAD基因其开放阅读框(ORF)序列为1 071 bp,编码356个氨基酸,与其他物种序列同源性最高达96%,进化关系上与苹果较近。在果实6个发育时期,木质素积累逐渐降低,而CAD基因表达与果实木质化程度紧密相关,随着木质素合成趋缓呈现一个逐步下调的趋势。【结论】CAD基因是调控榅桲果实木质化的关键基因。

榅桲子叶不定芽再生研究初报

以榅桲子叶为试材,研究了基本培养基、激素组合等对榅桲子叶初代培养、继代培养和生根培养的影响。结果表明:初代培养基以1/4MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导效果最好,芽诱导率达75.0%;继代培养基以MS+6-BA 0.6 mg/L+IBA 0.2 mg/L,组培苗叶绿,舒展;生根培养基蘸IBA 50.0 mg/L,时间3 s,30 d生根率最高,可达75%;驯化移栽,以锯末为介质,成活率为78%。

榅桲总黄酮对自发性高血压大鼠心肌肥厚的抑制作用及机制研究

目的研究榅桲总黄酮对自发性高血压大鼠心肌肥厚的抑制作用及可能的作用机制。方法自发性高血压大鼠分为模型组、卡托普利组(25μg·g^(-1))、杜仲平压片组(30μg·g^(-1))、榅桲总黄酮低(40μg·g^(-1))、中(80μg·g^(-1))、高剂量组(160μg·g^(-1)),WKY大鼠为正常对照组。给药16周后进行心脏组织病理学检查,评价靶器官损伤程度,测定血或心脏组织中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮(aldosterone,ALD)水平,并分别通过RT-PCR和Western blot检测心肌组织ACE、ACE2和AT_1的mRNA和蛋白表达水平,评价榅桲总黄酮对RAAS系统的影响。结果与SHR组相比,榅桲总黄酮中剂量组(SHR+COMF-M)和高剂量组(SHR+COMF-H)心脏质量(HW)、心脏质量/体质量(HW/BW)、左室质量(LVM)、左室质量/体质量(LVM/BW)均有不同程度减小,榅桲总黄酮可抑制SHR心肌细胞肥大,使心脏和血液中的AngⅡ和ALD含量减少(P<0.01或P<0.05)。与SHR组相比较,榅桲总黄酮各剂量组心肌组织血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)和血管紧张素受体1(angiotensin receptor 1,AT_1)的mRNA和蛋白相对表达量有不同程度减少,ACE2的mRNA和蛋白相对表达量有不同程度增加(P<0.01或P<0.05)。结论榅桲总黄酮可抑制自发性高血压大鼠心肌肥厚,主要作用机制可能与抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统有关。

榅桲委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸等三萜酸类薄层色谱分离鉴别

目的建立榅桲果实和种子中委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸等三萜酸薄层色谱分离鉴定方法。方法以甲醇为溶剂,超声提取榅桲果实和种子,对展开系统、点样量、薄层板、显色剂等薄层色谱条件进行考察,确定最佳薄层鉴定条件。结果以点样量为4μL,将点于高效硅胶GF254板上的样品点浸入1%碘二氯甲烷溶液中预处理,以甲苯:乙酸乙酯:冰醋酸(体积比:14:4:0.5)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液来显色,在366 nm下观察,委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸被同时检识,分离效果好。结论薄层色谱法分辨率高、操作简便、结果可靠,可用于榅桲属中三萜酸类化合物的分离和鉴别。

优良观赏果树榅桲的推广应用

榅桲的栽培具有悠久的历史,它具有较强的耐寒、耐旱、耐盐碱能力,适于我国北方大多数城市栽培;其树姿、叶片、花和果实均具有较高的观赏价值,是较好的观赏树种;同时,榅桲又具有很高的经济价值,是优良的果树。因此,在我国北方,榅桲具有很高的推广价值。

沙尘胁迫对榅桲叶片光合和叶绿素荧光特性的影响

以榅桲(Cydonia oblonga Mill)为研究材料,以无沙尘覆盖为对照(CK),设置轻度沙尘胁迫(5mg·cm^(-2))和重度沙尘胁迫(12mg·cm^(-2))两个处理,并分别在处理第10、20、30和40天时,测定其叶片光合特性和荧光参数的变化。结果表明:沙尘处理下榅桲叶片的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)均随处理时间的延长呈下降趋势,胞间CO2浓度(Ci)呈先升后降的变化趋势;最大光量子效率(Fv/Fm)在处理第10天显著下降,此后随处理时间的延长逐渐回升至与对照一致水平。最大荧光(Fm)、非光化学淬灭(NPQ_Lss)、PSⅡ潜在活性(Fv/Fo)、光化学反应淬灭(q P_Lss)随处理时间的延长整体均呈上升趋势,初始荧光(Fo)呈下降趋势。说明榅桲在沙尘胁迫处理前期受非气孔因素的影响较大,沙尘胁迫导致榅桲叶片PSⅡ原初光能转换效率较低,对榅桲产生光抑制,导致Pn下降。而在处理后期,榅桲叶片主要通过增加q P_Lss、Fm、NPQ_Lss等来增强PSⅡ电子传递能力,提高非辐射性热耗散来消耗过剩光能,保护光合机构。

榅桲果实中生物碱粗提物的抑菌作用研究

经过定性实验确定榅桲中含生物碱,用分光光度法测定榅桲果实总生物碱含量为1.2%。又对榅桲果实生物碱粗提物对几种常见菌株进行体外抑菌实验。结果表明,榅桲果实生物碱粗提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有一定的抑制作用,但对黑曲霉、根霉、青霉和酵母菌的抑制效果不太明显。

榅桲4CL基因的克隆与生物信息学分析

【目的】克隆榅桲果肉(Cydonia oblonga Mill)中4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate CoA ligase,4CL)基因,研究其序列特征,为该基因在榅桲果实发育过程中的作用和功能奠定基础。【方法】以榅桲果肉为试材,基于GenBank报道的近缘物种4CL基因cDNA序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PCR扩增引物。提取榅桲总RNA,经反转录后合成cDNA,应用RT-PCR方法成功扩增出4CL基因片段并克隆到pMD18-T载体。通过DNAstar软件进行同源序列比对,ClustalX结合MEGA4.1软件构建系统进化树,采用Protparam在线程序分析蛋白质的理化性质,用DNAstar的Protean程序预测二级结构。【结果】榅桲4CL基因其开放阅读框(ORF)序列为1710 bp,编码570个氨基酸,蛋白分子质量为68.4 kD,与其他物种序列同源性最高达91.99%,进化关系上与水密桃较近;榅桲4CL蛋白为亲水性蛋白,二级结构中以无规卷曲(Random coil)为主,占比达到44.27%。【结论】获得了榅桲4CL基因全长编码区序列,探明了该序列的结构特征。