p27kip1、VEGF在大肠粘液腺癌中的表达及其意义

目的 研究细胞周期素依赖性激酶抑制剂p2 7kip1、血管内皮生长因子 (VEGF)在大肠粘液腺癌中的表达及其与组织分级、浸润及转移的关系。方法 应用免疫组化染色及半定量分析的方法 ,检测 40例大肠粘液腺癌中的 p2 7kip1、VEGF表达及其特征。分析它们的阳性表达与肿瘤的病理组织分级、临床Duke′s分期的相关性。结果 p2 7Kip1随着肿瘤分级、分期增高 (恶性程度增高 ) ,阳性表达率逐渐下降 ;而VEGF的表达则相反 ;两者在肿瘤中的表达呈负相关。两者在肿瘤浸润区的表达均强于中央区。肿瘤浸润处见有肿瘤细胞穿越血管壁并伴炎细胞浸润现象。结论 p2 7kip1、VEGF在大肠粘液腺癌中的表达可预测该肿瘤生物学行为特征。

抑癌基因P27在急性白血病中作用的研究进展

P27是近年发现的一种抑癌基因,是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor,CDKIs)家族成员之一。作为细胞周期负调控因子,P27蛋白具有参与细胞周期调控、诱导凋亡、促进细胞分化等多种生物学功能。许多实体瘤存在着P27基因的缺失、突变和低表达,P27的表达水平与急性白血病的发生、发展、治疗、预后密切相关。P27可应用于急性白血病的靶向治疗,通过提高P27蛋白表达水平可治疗白血病。P27基因DNA甲基化研究尚处于初始阶段,急性白血病P27甲基化与基因表达的关系尚未明确,P27基因甲基化的改变能否作为白血病临床早期诊断及治疗的一个重要靶标,有待于深入探讨。

鸡血藤黄酮类有效部位通过CKI途径对人肺腺癌细胞A549细胞周期的影响

目的:从细胞周期蛋白激酶抑制因子(CKI)途径入手探讨鸡血藤黄酮类有效部位(SSCE)对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用的分子机制。方法:采用RT-PCR法检测人肺腺癌A549细胞中p21、p27 mRNA表达;应用Western Blotting法测定人肺腺癌A549细胞中p21、p27蛋白表达。结果:160mg/L SSCE作用于人肺腺癌A549细胞24h后,细胞内p21 mRNA表达较对照组增加(P<0.01);p21蛋白含量较对照组高(P<0.01),而细胞内p27 mRNA表达及蛋白含量与对照组比较差异无统计学意义;160mg/L SSCE作用人肺腺癌A549细胞48h后,细胞内p21、p27 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义;细胞内p21、p27蛋白含量与对照组比较差异无统计学意义。结论:SSCE上调p21 mRNA转录水平及蛋白表达量是引起人肺腺癌A549细胞G2/M期细胞周期阻滞的机制之一;p21、p27对SSCE引起的人肺腺癌A549细胞G0/G1期阻滞无直接作用。

S期激酶相关蛋白2在喉癌组织中的表达及调控增殖和凋亡的机制

目的检测S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，并探讨应用RNA干扰技术抑制skp2基因表达对喉癌Hep2细胞生长、凋亡、p27表达以及细胞周期的影响。方法应用免疫组织化学方法检测Skp2蛋白在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，根据设计siRNA的原则，针对人Skp2的mRNA序列，设计并合成编码siRNA的两条寡核苷酸序列，构建重组质粒pGPU6Skp2，转染重组质粒至Hep-2细胞中，应用流式细胞术检测skp2蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑蓝法（MrIT）检测细胞增殖变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期和p27蛋白表达的变化。结果52例喉癌组织标本中skp2蛋白均呈阳性表达，高分化喉癌组织标本Skp2蛋白表达低于中、低分化组（X2=7．33，P〈0．05）。经酶切和DNA测序鉴定证实重组质粒上连接序列确实为所设计序列。pGPU6-Skp2转染组skp2蛋白表达明显低于空质粒对照组（f=19．42，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞增殖抑制率为26．93％，明显高于空质粒对照组2．47％（t=15．23，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞凋亡率为11．71％，明显高于空质粒对照组1．93％（t=17．92，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组s期细胞所占比例明显高于空质粒对照组（t=7．73，P〈0．05）；pGPU6-Skp2转染组p27蛋白表达明显高于空质粒对照组（t=2．86，P〈0．05）。结论skp2蛋白在喉癌中的表达与癌组织的分化程度有关。抑制喉癌细胞系Hep-2细胞skp2的表达可以抑制细胞增殖，并促进细胞凋亡p27蛋白表达提高以及细胞s期阻滞可能是其作用机制之一。

雷公藤甲素对大鼠心肌H9c2细胞肥大的抑制作用

目的：研究雷公藤甲素对大鼠心肌H9c2细胞肥大的抑制作用。方法：以0．1、0．3、1．0、3．0、10．0、30．0μg/L雷公藤甲素作用细胞24h，采用MTT法检测细胞活力以筛选最适质量浓度。采用血管紧张素Ⅱ（1．0μmol／L）培养细胞24h以复制细胞肥大模型。实验分为正常对照（常规培养液）组、模型（常规培养液）组与雷公藤甲素①、②、③、④（O．3、1．0、3．0、10．0μg，L）组，复制模型的同时给予相应药物培养24h。染色后荧光镜下观察细胞，以ImageJ软件检测细胞面积；二辛可酸（BCA）法检测细胞蛋白质量浓度；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测声．肌球蛋白重链（β-MHC）、心房利钠肽（ANP）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子la（CDKNla）mRNA的表达水平。结果：O．1～10μ/L雷公藤甲素对H9c2细胞生长无明显影响。与正常对照组比较，模型组细胞面积、蛋白质量浓度增加，β-MHC、ANP、CDKNla mRNA表达增强，差异有统计学意义（P〈O．01）；与模型组比较，雷公藤甲素②、③、④组细胞面积、蛋白质量浓度减少，β-MHC、ANP、CDKNla mRNA表达减弱，差异有统计学意义（P〈O．01）。结论：雷公藤甲素能抑制大鼠H9c2细胞的肥大反应，其机制可能与下调cDKNla mRNA表达有关。

Alzheimer病治疗新靶点Cdk5及其抑制剂的研究进展

细胞周期素依赖性激酶-5(cylin-dependent kinase-5,Cdk5)作为细胞周期素依赖性激酶家族成员之一,其生理作用主要表现为影响神经细胞的正常发育和维持有丝分裂后神经细胞的功能及骨架结构。Cdk5催化底物磷酸化功能的失调与一些神经退行性疾病有着密切的关系。该文重点对Cdk5介导的Alzheimer病的病理过程及已报道的Cdk5抑制剂进行综述,探讨该靶点药物开发中存在的问题及可能的解决办法。