经组织培养快速繁殖象牙白（Cymbidium eburneum）的研究

本文论述了利用组织培养手段快速繁殖象牙白的研究结果试验表明：ＶＷ改对诱导和增殖象牙白原球茎有良好效果．采用附加ＫＴ１～２ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ的ＶＷ改培养基，原球茎发生率可达９５％，用该培养基继代培养２个月后，原球茎可增殖６～８倍；２，４－Ｄ对原球茎的形成有强烈抑制作用．培养基中含有０．１ｍｇ／Ｌ的２，４—Ｄ就足以完全抑制原球茎的形成；６—ＢＡ对原球茎的增殖和分化效果不理想，ＫＴ的效果较好；生根壮苗阶段以附加５％～１０％香蕉汁的１／２ＭＳ培养基效果最佳．文中还介绍了象牙自试管苗的移栽技术．

独占春×美花兰杂交F_(1)代基于SSR标记的杂种鉴定和遗传多样性分析

海南原生种独占春和美花兰属兰花稀缺濒危种,分别是我国野生植物二级和一级保护植物,为对其种质资源进行保护和开发利用,以独占春和美花兰作为亲本进行杂交,并获得杂交群体。为准确鉴定独占春×美花兰杂交种真实性,分析杂交F_(1)代与亲本间的遗传关系,采用SSR标记对独占春和美花兰杂交F_(1)代23个杂交后代进行杂种鉴定、遗传多样性分析和聚类分析。结果表明:通过PCR技术从48对引物中筛选出8对引物,运用SSR分子标记证实了23个杂交后代是真杂种,杂种真实率为100%。其中,引物Cym45、Hub131和Hub8鉴定的23个杂交后代均兼具双亲特异位点,Hub125鉴定的23个杂交后代仅具有父本特异位点,引物Cym9鉴定出1个新的位点;引物Cym25、Hub125和Cym47呈低度多态性[多态性信息含量(PIC)<0.25],引物Cym45、Hub131、Hub8和Cym9呈中高度多态性(0.25<PIC<0.5),引物Cym172的PIC为0.59,具有高度多态性,可作为独占春×美花兰杂交后代指纹图谱构建的优选引物;UPGMA聚类分析结果表明,当遗传系数为0.8111时,可将受测材料分为3类,亲本各为一类,杂交后代为一类。杂交后代又可分为3个分支,X_(7)为一个分支,X_(6)和X_(21)聚类在一起,其余20个F_(1)代单株聚类为一簇。表明SSR标记应用于海南原生种兰花杂种鉴定和遗传多样性分析切实可行,可为海南兰花育种、选种提供有效的技术支撑和数据基础。同时,SSR标记的PIC是反映分子标记能力的一个重要指标,本研究开发的中高度多态性引物和高度多态性引物可为海南野生兰花基因图库的构建,海南野生兰种质资源库的建立和开发奠定基础。

碧玉兰和独占春正反交及种子无菌萌发研究

以碧玉兰和独占春为亲本,采用正反交杂交法进行杂交育种试验,并在无菌条件下对其所获得的杂交种子进行培养。结果表明:2种方法杂交兰花的结实率为60%～100%,正反交对种子的萌发率没有显著影响。种子预处理、培养基激素和培养条件对种子萌发都有一定的影响,其中,氢氧化钾和次氯酸钠浸泡种子可使兰花种子提早萌发并提高萌发率。光培养和暗培养对种子萌动的影响差异不明显,但暗培养10周不利于种子后期发育。较优处理为种子在播种前用0.1mol/L氢氧化钾浸泡8min和10%次氯酸钠浸泡10min。1/2MS+6-BA(1.0～1.5)mg/L+NAA(1.0～1.5)mg/L,适合于2种兰花杂交种子的无菌萌发。

兰属腋花组若干种类的研究(英文)

对新种丽花兰CymbidiumconcinnumZ.J.Liu&S.C.Chen和新变种龙州兰C.eburneumvar.longzhouenseZ.J.Liu&S.C.Chen进行了描述和绘图;丽花兰与大雪兰C.mastersiiGriff.exLindl.有亲缘关系,区别点在于新种叶片先端不分裂,花序具18–22朵花,唇瓣中裂片上有一个V型的紫红色斑块;龙州兰(变种)与独占春(原变种)的主要区别在于唇瓣中裂片上和侧裂片顶部有较密的紫红色斑。对象牙白C.maguanense的分类问题进行了讨论,并为其指定了新模式;还为腋花组sect.Eburnea国产种类提供一个检索表。

真菌诱导子对象牙白原球茎生长的影响

在1/2MS基本培养基中,分别加入由野生春兰和华石斛根部分离到的内生真菌所制成的4种菌丝提取物,对象牙白种子萌发形成的原球茎进行诱导培养。结果表明:4种菌株诱导子中3种可不同程度地促进象牙白的生长和分化。对象牙白原球茎的诱导作用依次为HF26>CF6>CF8,与对照相比,HF26菌株显著提高了象牙白的鲜重(P<0.05),鲜重增长率分别为96.13%、86.86%和61.18%;干物质重分别增加了130.70%、96.50%和124.30%,均达到极显著水平(P<0.01)。此外,CF8菌株能促进根条数的增加;HF26菌株最有利于原球茎的增殖;CF6菌株在促进成苗和根原基的分化上效果显著。结论:在象牙白原球茎生长的不同阶段,能够促进其达到最佳生长状态的菌株是不同的。

独占春种子非共生萌发和低温离体保存

独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L+LH(水解乳蛋白)1g/L+BA(细胞分裂素)0.5 mg/L+NAA(生长素)0.1 mg/L+CM (椰子汁)100 ml/L+AC 2 g/L+蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS+LH 0.5 g/L+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L+AC 2g/L+蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS+BA 3～5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 1g/L+CM 100 ml/L+蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。

独占春菌根真菌的调查

采用根组织切片法调查独占春菌根真菌,菌根感染率为31.88%;共得到22株真菌,属于半知菌,共计6属,其中刚毛菌属7株,占31.82%,为优势菌;从独占春栽培土壤中分离到21株真菌,其中,丝核菌属12株,占57.14%,为优势菌。

象牙白花兰种子及茎尖培养与原球茎形态发生

象牙白花兰授粉后 5个月的种子开始具有较高的萌发率 ;椰乳或适量激素有利于种子的萌发 ;种子在萌发后胚发育形成原球茎 ,原球茎经过增殖 ,分化出叶片和根系 ,形成完整的小植株。从播种到小植株的形成历时约 7个月。茎尖在MS+NAA 0 .1 +BA 3 .0 (单位 :mg·L-1,下同 ) +椰乳 1 0 %的培养基上诱导产生原球茎 ;原球茎在MS +NAA 0 .1 +BA 5 .0的培养基上增殖 ,在无激素培养基上分化成芽 ;小芽在附加 7%香蕉汁和 3 %马铃薯汁的 1 / 2MS培养基上诱导出根而再生完整小植株。不同pH值、光照强度和培养方式对增殖效果有显著影响。

独占春×美花兰杂交后代观赏性状综合评价

为了充分开发利用海南野生兰资源,有效保护海南野生兰种质资源,对海南原生种独占春和美花兰进行杂交育种。本研究以独占春×美花兰F1代群体中筛选的7个株系为材料,采用主成分分析法,对植株整体形态、花部性状等20个性状指标进行观赏性综合评价。结果表明:7个株系除了花开展情况性状表现一致外,其他19个性状表现上差异显著,变异系数在7.56%~71.63%之间;20个性状指标可归纳为5个成分因子,即花数、花形、花香、花色和花枝5个成分因子,累积贡献率达95.62%;利用主成分法计算各株系主成分分值,筛选出2个观赏性状优良的杂交后代株系,此研究结果可以为兰花新品种选育提供重要依据。

玻璃化超低温保存对独占春原球茎生理生化特性影响

为探明兰花稀缺品种独占春(Cymbidium eburneum Lindl.)玻璃化超低温保存技术中成活率较低的问题,以独占春原球茎为研究对象,研究了玻璃化超低温保存技术对其生理生化特性的影响,并分析了各生理指标之间的相互关系。结果表明:逆境胁迫中,含水量随玻璃化超低温保存进程缓慢降低,卸载处理迅速降低,其含水量是对照处理的79.06%;相对电导率逐渐升高,卸载处理达到最高(86.36%);氧化损伤指标中的丙二醛(MDA)质量摩尔浓度显著升高,玻璃化处理达到最大;蛋白质羰基(PCO)质量摩尔浓度则是先升高后降低再升高,玻璃化处理质量摩尔浓度最低;氧化物质指标中的过氧化氢酶(CAT)活性和抗坏血酸(ASA)质量摩尔浓度变化趋势一致,均先升高后降低,且预培养处理达最大值;超氧化物歧化酶(SOD)活性先降低后升高,呈现双峰变化趋势;活性氧成分中H_(2)O_(2)和·OH质量摩尔浓度在玻璃化处理均达到最大值,且H_(2)O_(2)质量摩尔浓度变化趋势和CAT活性变化趋势在玻璃化超低温保存进程中表现为相互抑制。通过相关性分析,CAT活性和超氧自由基(O·-2)质量摩尔浓度呈极显著正相关,和H_(2)O_(2)质量摩尔浓度呈显著负相关,表明氧化酶物质对活性氧成分具有清除作用。

LED光质对碧玉兰×独占春组培苗生理生化影响

以碧玉兰♀×独占春♂组培苗为试材,研究了LED光源(以荧光灯作为对照)不同光质配比组合对兰花组培苗生理生化指标的影响。结果表明:红蓝绿光质(RBG)培养下的植株,形态指标综合系数较高。红蓝白光质(RBW)促进植株叶绿素a、b和胡萝卜素含量增加;蓝光(B)处理下的植株可溶性糖含量显著增加;白光(W1)和红蓝光质(1RB)培养的植株可溶性蛋白质含量较高。红光(R)处理的植株MDA含量最高;红蓝绿光质(RBG)培养的植株SOD活性最高;白色荧光灯(W2)处理下的植株POD活性最高;红蓝白光质(RBW)处理的植株CAT活性最高。研究表明,红蓝绿组合光质(RBG)培养的碧玉兰♀×独占春♂组培苗各项形态指标综合系数较高;LED复合光质促进兰花叶绿素a、b和胡萝卜素的合成;蓝光(B)有利于兰花可溶性糖的积累;1RB、W1光质能促进兰花蛋白质的合成;红光提高了兰花SOD活性、POD活性、CAT活性,有效地清除细胞中的超氧自由基,缓解对细胞质的伤害。