寒兰在山水盆景中的应用——以上海植物园“秋泽碧影,空谷天姿——癸卯年寒兰展”为例

中国兰花栽培技艺古称“艺兰”,这项已有2000多年历史的国粹技艺,已融入中国的经济、文化、民俗和日常生活中。作为九大国兰之一的寒兰,凌霜冒寒吐芳,香味清醇久远,有“兰中之王”的美誉。以上海植物园“秋泽碧影,空谷天姿——癸卯年寒兰三园联展”中所创作的寒兰山水盆景为例,阐述寒兰与山水盆景之间的关系,以及在山水盆景中寒兰的创新应用方法。旨在进一步推动国内寒兰资源在山水盆景中应用的同时,提高兰文化的传播普及广度和力度。

将石自然保护区野生寒兰群落物种多样性分析

采用典型的样地调查法对邵武市将石自然保护区野生寒兰(Cymbidium kanran)群落结构进行调查分析。结果表明:调查范围内共记录到79种植物,隶属43科64属。从科属构成上看,单种科数最多,有27科,占总科数的62.79%;其次是小型科,中型科仅有2科,保护区内缺乏物种数量较多的大型科。寒兰群落草本物种构成较复杂,其中芒萁(Dicranopteris pedata)的重要值(17.76%)最大,占明显优势地位;其次是淡竹叶(Lophatherum gracile)、里白(Diplopterygium glaucum)、寒兰;植物生长型与群落物种多样性的关系为:乔木层和灌木层的物种丰富度相当,明显高于草本层,物种多样性指数表现出灌木层>乔木层>草本层的规律,均匀度变化规律为灌木层>乔木层>草本层。

寒兰的快速繁殖技术

以寒兰(CymbidiumkanranMakino)根状茎为外植体,采用B5基本培养基,并附加不同浓度的6-BA、NAA、TDZ(苯基噻二唑基脲-thidiazuron)和S-3307(优康唑-uniconazole),对类原球茎的诱导、继代增殖、分化、生根等进行研究。结果表明:诱导类原球茎的最佳培养基为B5+TDZ0.50mgL-1+NAA0.25mgL-1,诱导率98.3%;继代增殖的最佳培养基为B5+S-33071.0mgL-1+NAA0.2mgL-1+蔗糖3.5%,增殖系数9.4;类原球茎分化的最佳培养基为B5+S-33070.75mgL-1+6-BA1.0mgL-1+NAA0.4mgL-1,分化率87.8%;最佳的生根培养基为1/2B5+NAA0.2mgL-1+活性炭0.05%,生根率达100%。

寒兰株系间遗传多样性和亲缘关系的SSR分子标记分析

本研究筛选了从春兰和莲瓣兰中开发的7个SSR位点的引物,用于37个寒兰株系的遗传多样性和亲缘关系研究。研究结果表明,7个SSR位点的引物在寒兰中均具有非常好的通用性,而且每个位点在不同的株系中具有特有等位基因,特别是位点CSSR05、CSSR11和195。株系具有的特有等位基因可以用于株系鉴别。7个位点在寒兰株系间具有较高的遗传多样性,这可能与长期的人工选育有关。基于Nei氏遗传距离的聚类和分支分析表明,SSR标记可以用于寒兰株系间亲缘关系的分析。

寒兰品种类型的SRAP分子鉴定

【目的】从分子水平分析寒兰品种的遗传多样性和亲缘关系,为寒兰种质资源的有效利用和开发提供依据。【方法】利用SRAP标记对37个中国寒兰和14个日本寒兰品种类型的基因组DNA进行分析。【结果】筛选出的11对引物组合对51份供试材料共扩增出586条带纹,其中504条为多态性(86.01%),平均每个引物扩增46条多态性带。聚类分析表明,51份材料根据起源和生物学特性划分为中国寒兰和日本寒兰两大类群。【结论】SRAP标记技术能很好地用于兰花植物遗传多样性和亲缘关系研究。

寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化

以改良的CTAB法提取的寒兰（Cymbidium kanran Makino）基因组DNA为模板，通过单因子试验建立最适的寒兰的ISS-PCR反应体系。结果表明，适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为：25 μl PCR 反应体积中，1×PCR buffer，2.0 mmol/L MgCl2，300 ng 模板 DNA，200 μmol/L dNTP，1.40 U Taq DNA 聚合酶，0.4 μmol/L 引物。最佳扩增程序为：94 ℃预变性 5 min，然后进行40个循环：94 ℃ 变性 30 s，复性温度根据各引物的Tm值略低1～2 ℃，30 s，72 ℃ 延伸 50 s，循环结束后 72 ℃ 延伸7 min。

寒兰的种内变异

对同一居群寒兰的叶(上表皮细胞形状、气孔等)、花(萼片和花瓣的形态、大小、颜色等)及其花粉进行了观察。结果表明,寒兰的花和花粉存在丰富的变异,为培育出更多的优良品种提供了基础。

寒兰种子无菌萌发及根状茎诱导分化技术研究

以成熟寒兰种子为试验材料,对寒兰种子的生物学特性与活力、无菌萌发特性及其根状茎分化技术进行研究。结果表明:寒兰种子生活力较高,平均值为78.22%;其萌发率诱导的最佳培养基配方为:1/4 MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3 mg/L,p H值5.8,萌发率高达86.87%;寒兰根状茎诱导的最佳培养基配方为:1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2 mg/L,p H值5.8,根状茎诱导率93.33%。

关于寒兰鉴赏标准的探讨

兰属植物具有非常高的观赏价值和经济价值,现就寒兰特点与分布,以及鉴赏发展的现状与原则进行了阐述,并就寒兰适应商业化发展趋势提出了鉴赏标准。

寒兰种质资源表型性状多样性分析

为探讨寒兰的表型多样性,以35份寒兰种质为研究材料,选取38项表型性状进行多样性分析。对数量性状进行变异分析及相关性分析;对质量性状进行概率分布分析,并以Simpson指数和Shannon指数为评价指标进行多样性分析。结果表明,数量性状变异系数均大于10%,变异极为显著,数量性状间存在显著正相关;花瓣斑点、唇瓣条纹等部分质量性状较稳定,一致性较高;花瓣纵切面形状、侧萼纵切面形状等多数质量性状Simpson指数和Shannon指数较高,多样性程度较高,多样性丰富。说明寒兰的表型性状变异显著、多样性丰富。

江西野生寒兰居群遗传结构与遗传多样性研究

该研究采用叶绿体基因组片段(petB-petD)和核基因组ITS序列,对分布于江西的寒兰17个自然居群的252个体进行遗传结构与遗传多样性分析,以明确江西野生寒兰遗传多样性水平与居群遗传结构特征,为探寻江西寒兰资源数量锐减以及保护提供理论依据。结果表明:(1)nrDNA ITS序列长度652~658 bp,总变异位点140处,变异位点百分率为21.3%~21.5%,(G+C)含量为58.9%~67.1%。cpDNA序列长度522~529 bp,有变异位点9处,变异位点百分率为1.70%~1.72%,(G+C)含量为32.9%~33.7%。(2)分子方差分析(AMOVA)表明,种群内的遗传变异大于种群间变异,cpDNA片段居群间的遗传变异为40.76%,居群内为59.24%;ITS居群间的遗传变异为28.96%,居群内为71.04%;基因流(Nm)较大,cpDNA片段Nm为1.2265;ITS Nm为0.7267。(3)ITS和cpDNA数据失配分析和中性检验均表明江西寒兰野生居群在历史近期经历了扩张事件,nrDNA ITS序列较叶绿体序列进化较快,变异速率也较快。

寒兰花器官发生及花发育过程的研究

为了揭示寒兰的成花机理,利用石蜡切片和花芽实体解剖记录了濒危植物寒兰花芽分化和发育的过程,并着重观察唇瓣和合蕊柱早期及中期的发育(在合蕊柱伸长之前)。结果表明:寒兰花芽分化沿着花序轴从下往上可分为4个阶段:花序原基分化,花原基分化,花被片分化和合蕊柱形成。唇瓣分化分为3个阶段:褶片分化,侧裂片分化和色块形成。唇瓣侧裂片和褶片产生较晚,与退化雄蕊可能没有关系。在合蕊柱形成过程中,首先分化出花药,随后分化产生中心皮顶部,侧心皮顶部,并形成花柱道,最终分化出蕊喙和黏盘。

寒兰离体化学诱变效果的ISSR分析

诱变育种中诱变剂的筛选与诱变效果评估是诱变育种成功的关键步骤之一。用7种化学诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)、硫酸二乙酯(DES)、秋水仙素(colchicines)、咖啡碱(caffeine)、5-溴尿嘧啶(5-BU)、马来酰肼(MH)、亚硫酸钠(Na_2SO_3)处理寒兰(Cymbidium kanran)的原球茎,经培养成再生植物株后,对其叶片进行ISSR分子标记分析。结果表明:诱变处理后的再生植株和正常植株之间的基因组ISSR扩增条带均有不同程度的增加和缺失,其中DES、EMS、5-BU三种诱变剂处理的再生植株扩增条带数变幅较秋水仙素、咖啡碱、马来酰肼和亚硫酸钠四种诱变剂丰富,EMS、DES和5-BU均缺失了条带1、3、4,EMS增加条带6,DES和5-BU均增加了条带6、7、10,DES还增加了条带8、9,这表明DES、EMS、5-BU 3种诱变剂诱变效果明显,比较适合作为寒兰的离体化学诱变剂,其中DES更适合,研究结果可为寒兰的诱变育种及其分子鉴定提供参考。

寒兰花总黄酮超声提取工艺

研究超声提取寒兰花总黄酮的工艺,通过单因素试验和L9(34)正交试验,分析料液比、乙醇体积分数和超声时间对寒兰花总黄酮得率的影响。结果表明,寒兰花总黄酮的最佳提取工艺条件为料液比1∶20,乙醇体积分数90%,超声时间10min,寒兰花总黄酮得率为2.055 4%,该工艺方法重现性好,稳定性高,加样回收率为98.10%～100.20%。

寒兰转录组SSR信息分析及其分子标记开发

寒兰(Cymbidium kanran)是中国传统名花,其观赏与经济价值极高。简单重复序列(simple sequence repeats,SSR),又名微卫星标记,有多态性高,非共显性等优势。基于转录组数据对SSR标记的开发具有经济效能高等优点,通过高通量测序平台对寒兰EST-SSR标记进行开发,了解其在转录组序列中的分布类型及特性,为寒兰的SSR多样性的分析及遗传图谱构建奠定基础。通过MISA程序筛选寒兰转录组测序得到的68699条unigene(序列总长60.06 Mb),并分析了其SSR位点分布情况,获得了9837个SSR位点,在总unigene的比例为14.32%,平均每6.25kb出现1个SSR。SSR位点中二核苷酸重复频率达到最高,占55.22%,其中AG/CT高达38.83%;接下来为三、单核苷酸重复,频率依次为25.37%和14.49%。利用Primer3共设计出6017对SSR引物。随机选取141对引物进行PCR扩增,有79对引物扩增得到的条带清晰可重复,15对在15个不同地区寒兰中表现出多态性。结果表明,本研究中设计的SSR引物在寒兰遗传多样性分析中具有较高的适用性,可用于寒兰的遗传研究。

贵州寒兰的生物学特性及其保育研究

通过对贵州寒兰原生地生态环境的科学考察,掌握了寒兰的生长规律、生成条件,对土样及伴生的多种植物进行了取样测定、鉴别,在试验地进行了科学的土壤配制和栽培环境的改善。在栽培管理方面,我们主要注意它的病虫害防治和施肥,提高了寒兰的成活率、发苗率、开花率,为今后贵州寒兰的保育与规模种植提供参考依据。

寒兰盆苗栽培适宜基质配比研究

[目的]研究寒兰盆苗栽培适宜基质配比。[方法]通过连续4年测定不同基质配比培养的寒兰叶长度、宽度、花葶数量、发苗量生长指标的变化情况,采用方差分析和同比分析方法,选出较适宜的基质配比。[结果]M5(树皮∶腐质土∶珍珠岩=8∶1∶1)是培育寒兰较为适宜和理想的基质配比。[结论]该研究为寒兰的产业化发展及居室培植提供技术基础。

寒兰、墨兰花的表型结构分析

对寒兰(Cymbidium kanran)、墨兰(Cymbidium sinense)的花表型结构物征中所占比例较大的10个性状进行测量,分析寒兰与墨兰各种性状之间的频数分布与相关关系。分析得出花的各性状的变异系数相对较小、性状相对稳定,可作为分类学的依据。

寒兰菌根的显微结构与菌根真菌的分离

以寒兰的新鲜营养根为材料,采用徒手切片法和苯胺蓝染色压片法,研究寒兰菌根的显微结构和菌根真菌的侵染方式,并采用常规分离法,对其内生真菌进行分离和初步鉴定。结果表明:寒兰(Cymbidium kanran)营养根具有典型的兰科植物菌根构造,菌根真菌通过破坏根被细胞进入根被,侵染皮层组织,在皮层薄壁细胞内形成菌丝团;从菌根中共分离到36个真菌菌株,包括帚霉属、丝核菌属、丛梗孢属、色二孢属、木霉属、镰刀菌属、角菌根菌属等11个种属,为进一步研究寒兰与其菌根真菌的共生关系和有益菌株的筛选奠定基础。

宜丰野生寒兰资源的生存环境特点及开发利用

分析宜丰野生寒兰资源生存环境特点及开发利用中存在的问题,对今后寒兰保护及开发利用的思路进行探讨,以期为本地资源品种开发提供参考。