蕙兰‘红香妃’内生真菌分离鉴定及体外抑菌效应

【目的】从蕙兰‘红香妃’Cymbidium faberi‘Hongxiangfei’中筛选获得兰科Orchidaceae植物病害生防菌,为蕙兰菌根化栽培及绿色生物防治提供科学依据。【方法】通过蕙兰‘红香妃’健康根段培养、分离、纯化、鉴定内生真菌;以5株常见植物病原菌为指示菌,通过平板对峙培养法筛选出生物防治效果最优的内生真菌,并用活体接种法验证其抑菌效果。【结果】在蕙兰‘红香妃’健康植株根段培养中共分离筛选出6株内生真菌,经鉴定4株属于毛壳属Chaetomium spp.,1株属于镰刀属Fusarium spp.,另1株属于赛多孢属Scedosporium spp.。在平板对峙培养中发现:6株内生真菌对5株病原菌均具有一定的抑菌效果,其中Z2菌株腐皮镰刀菌Fusarium solani对兰花茎腐病致病菌——尖孢镰刀菌F.oxysporum的抑制效果明显,抑制率为67.51%;Z3菌株蝇生二叉毛壳菌Dichotomopilus funicola对兰花炭疽病致病菌——胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides的抑制率达68.56%。活体接种研究表明:经Z3菌株处理,春兰‘绿云’C.goeringii‘Green Cloud’的病叶率、病情指数极显著(P<0.01)低于对照。【结论】Z3菌株是筛选出的防治兰科植物病害的优势拮抗生物防治菌。

春兰叶斑病病原的鉴定和分析

【目的】明确野生春兰引种驯化过程中引发叶斑病的病原菌种类,为春兰叶斑病的诊断和防治提供科学依据。【方法】采集广东省广州市和贵州省遵义市典型春兰叶斑病的病叶,利用组织分离法对病原菌进行分离纯化;依据柯赫氏法则,通过刺伤接种和摩擦接种验证其致病性;根据病原菌形态学特征,结合ITS、ACT、CAL、EF-1a、GAPDH、GS和TUB2部分序列的多基因分子系统学分析等方法进行病原菌分类鉴定。【结果】从采集的3种不同类型症状的叶斑病病叶中共检测到4株致病菌,分别命名为GZH1、GZH2、GZH3和GZH4,其中GZH1和GZH4分离自广东广州采集的叶斑病病叶,GZH2和GZH3分离自贵州遵义采集的叶斑病病叶。致病性测定结果显示,菌株GZH1表现出较强的致病性,离体针刺接种发病明显;菌株GZH2、GZH3和GZH4离体针刺接种发病不明显,通过摩擦接种可在接种部位形成典型的坏死斑。菌株GZH1在PSA培养基上的菌落特征,大、小型分生孢子,小型分生孢子梗、厚垣孢子的形态及大小均符合尖镰孢(Fusarium oxysporum)的特征,其ITS和EF-1a部分序列与F. oxysporum菌株UACH-217相应序列的一致性分别达98.23%和97.24%,结合其多基因序列构建系统发育进化树分析,菌株GZH1被鉴定为尖镰孢(F. oxysporum)。菌株GZH2、GZH3和GZH4在PDA培养基上的菌落形态,分生孢子及其附着胞的形态和大小等,分别与兰花炭疽菌(Colletotrichum cymbidiicola)、果生炭疽菌(C. fructicola)和江西炭疽菌(C. jiangxiense)的特征相似;供试菌株GZH2的ITS、ACT、CAL、GAPDH和TUB2部分序列与C. cymbidiicola菌株CBS:123757对应序列的一致性分别达99.00%、100.00%、99.00%、99.00%、99.60%;供试菌株GZH3的ITS、ACT、CAL、GAPDH和TUB2部分序列与C. fructicola菌株ICMP:18613对应序列的一致性分别达99.00%、99.00%、99.00%、100.00%、99.70%;供试菌株GZH4的ITS、ACT、CAL、GAPDH、TUB2和GS部分序列与C. jiangxiense菌株LF687的一致性分别达99.60%、99.00%、99.00%、99.00%、100.00%和97.10%;结合多基因序列构建系统发育进化树分析,菌株GZH2鉴定为兰花炭疽菌(C. cymbidiicola)、GZH3为果生炭疽菌(C. fructicola)、GZH4为江西炭疽菌(C. jiangxiense)。【结论】不同地区春兰叶斑病的病原菌组成存在差异。尖镰孢(F. oxysporum)和江西炭疽菌(C. jiangxiense)是引起广东省广州地区春兰叶斑病的病原菌,兰花炭疽菌(C. cymbidiicola)和果生炭疽菌(C. fructicola)是引起贵州省遵义地区春兰叶斑病的病原菌。其中C. fructicola和C. jiangxiense首次报道为害兰科植物,属于兰花新记录病害。

首次测得蝴蝶兰基腐病菌rDNA ITS区序列

用Whiteetal.于1990年设计的引物ITS4和ITS5对蝴蝶兰基腐病菌(Fusariumspp )的rDNAITS区片段进行了PCR扩增,并将扩增产物克隆到大肠杆菌JM109中进行测序,测得的序列长度为565bp。该序列的测得为蝴蝶兰基腐病菌的诊断提供了有利证据。

蝴蝶兰和嘉德利亚兰的离体快速繁殖

以蝴蝶兰和嘉德利亚兰茎尖腋芽为外植体接种于ＭＳ、Ｗｈｉｔｅ、Ｋ、Ｔ４及添加不同激素配比的改良ＭＳ培养基上，观察其原球茎增殖和幼苗分化生长效果，结果表明，蝴蝶兰和嘉德利亚兰在添加６－ＢＡ５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的改良ＭＳ培养基上原球茎增殖效果最好，分别有５０％和８０％以上的原球茎表现增殖，原球茎易分化长苗，每个原球茎可分别分化生长１～２个和５～８个幼芽。其它培养基对此两种兰花的原球茎增殖和幼苗分化生长均无明显的促进作用。

进境兰花花茎萎蔫病的鉴定与处理

进境大花蕙兰上发生萎蔫病，病原经分离纯化，致病性测定等试验鉴定为砖红镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｌａｔｅｒｉｔｉｕｍ，用杀菌剂敌力脱处理病株能起到良好的防治效果。

兰花茎尖脱毒及无毒苗的快繁技术

分析了病毒病对兰花产业化发展的影响,同时从理论基础、操作方法、培养基、激素浓度、培养条件及移栽管理等方面,对兰花茎尖脱毒及无毒苗的快繁技术进行详细阐述,以期为优质兰花的工厂化育苗提供参考。