徐长卿中异丹皮酚的结构测定

徐长卿是常用中草药。其化学成分研究除对主要活性成分丹皮酚有报道外,未曾报道其他成分。本文分离到的七个化合物是硬脂酸癸酯、蜂花烷、十六烯、D-赤丝草醇、β-谷甾醇、丹皮酚及异丹皮酚。

气相色谱法测定徐长卿中丹皮酚含量

采用直接蒸馏－大孔树脂－气相色谱法，以正十七烷为内标，对徐长卿中的丹皮酚进行了含量测定。结果表明，在所测浓度范围内，峰面积与被测物浓度的线性关系良好．ｒ＝０．９９９７。回收率为９９．４２％（ｎ＝５），ＲＳＤ为２．２８％。

徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

探讨徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡及相关调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响。采用兔膝关节内侧半月板前1/3切除及前交叉韧带切断制备骨关节炎(OA)模型。于OA模型建立后的第1周开始对右膝关节内分别注射徐长卿丹皮酚0.2 mg、曲安奈德0.2 mg、0.9%生理盐水0.3 mg,每周2次,连续给药5周。用药结束1周后取关节软骨标本制作切片,透射电镜观察软骨细胞凋亡的结构变化;TUNEL法检测软骨细胞凋亡,计算软骨细胞凋亡指数;免疫荧光法检测软骨细胞Bcl-2和Bax的表达。结果显示徐长卿组和曲安奈德组的凋亡率与对照组相比均显著降低(P<0.05,P<0.01),徐长卿丹皮酚和曲安奈德均能上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而升高Bcl-2/Bax的比值,进而抑制细胞凋亡,其中徐长卿丹皮酚与模型组比较,升高Bcl-2/Bax的比值更为显著(P<0.01)。

徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎关节软骨MMP-1和TIMP-1表达的研究

目的观察徐长卿丹皮酚对兔膝骨性关节炎关节软骨MMP-1和TIMP-1表达水平的影响。方法健康成年雄性大耳白兔40只随机分为正常组、模型组、生理盐水组、曲安奈德组、徐长卿丹皮酚组,每组8只。生理盐水组、曲安奈德组、徐长卿丹皮酚组于模型建立后的第1周分别开始膝关节内注射0.9%生理盐水、曲安奈德、徐长卿丹皮酚各0.2mL/只,每周2次,共10次。用药结束1周后,取右侧股骨内侧髁关节面软骨标本,行HE染色观察形态学改变,RNA原位杂交对兔关节软骨MMP-1和TIMP-1 mRNA作定位和定量分析。结果徐长卿丹皮酚组软骨组织MMP-1mRNA表达水平较正常组增高,较曲安奈德组和模型组低;徐长卿丹皮酚组软骨组织TIMP-1 mRNA表达水平较曲安奈德组增高;曲安奈德组TIMP-1 mRNA表达水平与模型组、生理盐水组组间比较无统计学差异。结论徐长卿丹皮酚能通过抑制损伤软骨中MMP-1的表达水平达到治疗骨性关节炎的作用,有很好的临床推广前景。

徐长卿丹皮酚关节内注射对关节软骨影响的实验研究

目的通过对徐长卿丹皮酚关节腔注射后兔膝骨性关节炎模型的病理学和超微结构观察,探讨徐长卿丹皮酚是否具有修复骨性关节炎中退变关节软骨的作用。方法 40只雄性大耳白兔随机分为正常组、对照组、生理盐水组、曲安奈德组和徐长卿丹皮酚组。随机选取8只作为正常组,其余32只采用家兔膝关节前交叉韧带切断(ACLT)及内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎(OA)模型方法进行造模,4周后造模成功。生理盐水组、曲安奈德组、徐长卿丹皮酚组分别膝关节内注射0.9%生理盐水、曲安奈德、徐长卿丹皮酚各0.2mL,每周2次,共10次。治疗完成1周后处死,暴露膝关节腔,大体观察关节软骨病理学变化;取材后在电镜下观察超微结构的改变。结果徐长卿丹皮酚组的大体标本观察软骨损伤分级优于曲安奈德组(P<0.05);电镜超微结构观察的病理改变明显轻于曲安奈德组。曲安奈德组大体标本观察软骨损伤分级优于对照组(P<0.05);电镜超微结构观察曲安奈德组在细胞形态、细胞质改变等方面优于对照组。对照组与生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05);两组电镜观察细胞超微结构的改变相似。结论关节腔内注射徐长卿丹皮酚能推进损伤软骨的自我修复,延缓兔膝关节炎模型的关节软骨退变进程;激素类药物关节腔注射改善关节软骨退变作用不明显。

妇安迪栓质量标准研究

目的 制订妇安迪栓剂的质量标准。方法 用薄层色谱法对徐长卿、蛇床子、大黄、甘草进行定性鉴别；气相色谱法测定丹皮酚含量。结果 薄层鉴别可以检出徐长卿、蛇床子、大黄、甘草对应的斑点，斑点清晰，阴性对照无干扰；丹皮酚对照品质量浓度在3．05～79．3μg／mL。范围与峰面积有良好线性关系：A=-0．003322＋14．94和，r=0．9996（n=5）。结论 方法简便，准确，可供本品质量控制。

湿疹纳米乳中丹皮酚包封率的测定

目的建立湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法,用于评价湿疹纳米乳制备工艺。方法采用葡聚糖凝胶G-50柱分离湿疹纳米乳中包封的丹皮酚与未包封的丹皮酚。HPLC法测定湿疹纳米乳中丹皮酚的含量,并计算其包封率。结果纳米乳中丹皮酚的含量在0.4160~41.60μg/m L浓度范围内线性关系良好,r为0.999 9,加样回收率平均值为98.43%,RSD为2.90%;纳米乳中丹皮酚的包封率值为（92.43±0.44）%,RSD为0.43%（n=6）,葡聚糖凝胶柱分离纳米乳上样回收率为（90.5±0.17）%,RSD为1.84%。结论葡聚糖凝胶G-50可以将湿疹纳米乳和游离的丹皮酚较好地分开,湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法可作为工艺研究的评价方法。

徐长卿生药学研究

目的:研究徐长卿生药学特征,为药材鉴别与质量控制提供依据。方法:利用肉眼与显微镜观察各器官形态、性状、组织结构与粉末特征,TLC检测成分。结果:叶对生、披针形,花冠黄绿色,花粉粒粘连为花粉块,果角状,种子先端有一簇白色细长毛;药材根茎节及节间明显,根呈细长须状,质脆,断面粉性、白色,中央为细小黄白色木心,具丹皮酚特有香气;根维管束为外韧型,根茎、茎维管束和叶主脉维管束均为双韧型;粉末中淀粉粒为主体,单粒或复粒,脐点为裂缝状、人字状或星状,草酸钙簇晶较多且棱角较钝,具缘纹孔导管为主,表皮细胞微木化,形状特殊;活性成分丹皮酚主要存在于根和根茎中。结论:徐长卿生药学特征明显,与其他药材有显著区别;以全草作为药材应用不合理,应以根与根茎入药。

三维荧光光谱结合交替三线性分解算法测定徐长卿药材中丹皮酚的含量

目的:采用三维荧光光谱结合交替三线性分解(ATLD)算法测定徐长卿药材中丹皮酚的含量。方法:构建三线性模型,利用最小二乘原理进行ATLD,采用核一致诊断法对体系的组分数进行拟合,采用数学校正法校正内滤光效应。三维荧光光谱扫描条件:激发波长范围为250~400 nm,发射波长范围为410~600 nm,波长间隔为5 nm,狭缝宽度为5.0/5.0 nm,扫描速度为1 200nm/min;测定吸收光谱条件:扫描波长范围为250~600 nm,扫描速度为600 nm/min;以Al(Ⅲ)作敏化剂增强丹皮酚的荧光强度。以高效液相色谱法(HPLC)测定药材样品中丹皮酚含量作为验证。结果:丹皮酚检测质量浓度线性范围为0.132~1.188μg/m L(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率为100.1%~104.7%(RSD=2.39%,n=9);丹皮酚的解析光谱与其真实光谱几乎完全重合。HPLC测定结果与ATLD算法结果十分相近。结论:三维荧光光谱结合ATLD算法简便、快速、高效、准确,可用于复杂体系中特定组分的定性与定量分析。

响应面法优化徐长卿中丹皮酚提取工艺研究

目的利用响应面法优选徐长卿中丹皮酚的最佳提取工艺。方法采用水蒸气蒸馏法提取徐长卿中丹皮酚,采用响应面法优选提取工艺,以浸泡时间(A)、液料比(B)、氯化钠量(C)为自变量,以归一值(OY值,Y)为因变量,分别进行多元线性方程回归和二次多项式方程拟合,优选最佳提取工艺并进行验证。结果最佳提取工艺为浸泡时间3 h,料液比1∶15,氯化钠量150 g/kg。结论该优选工艺可用于徐长卿中丹皮酚的提取,方法简便、稳定、可行。

丹皮酚制剂不同给药途径在家兔体内的药动学研究

目的建立家兔血浆中丹皮酚含量的测定方法,观察徐长卿与丹皮酚注射液中丹皮酚在家兔体内的药物动力学行为。方法将家兔随机分组分别灌胃徐长卿水煎液6mg.kg-1,肌肉注射丹皮酚注射液0.96mg.kg-1;采用HPLC法测定不同时间间隔的血药浓度,运用3P87药动学程序计算药动学参数。结果家兔灌胃给药后符合一室开放模型,主要的药动学参数:t1/2(α)=0.174h,t1/2(e)=0.796h,Tm ax=0.489h,Cm ax=0.225μg.mL-1,AUC=0.395μg/(mL.h);肌注后符合二室开放模型,主要的药动学参数:T1/2(α)=0.112h,T1/2(β)=1.417h,Tm ax=0.179h,Cm ax=0.439μg.mL-1,AUC=0.546μg/mL.h,CL=8.832L.h-1。结论丹皮酚在家兔体内能快速分布并消除,两种给药途径丹皮酚的体内药动学过程不同,肌肉注射明显优于灌胃给药。

徐长卿丹皮酚对骨癌痛大鼠镇痛作用的研究

目的探讨徐长卿丹皮酚(Paeonol of Cynanchum paniculatumhas,Paeonol)是否具有抗骨癌痛的作用。方法采用Von Frey hair和热辐射仪分别检测Paeonol对骨癌痛大鼠机械痛和热痛的影响;采用膜片钳技术记录Paeonol对骨癌痛大鼠DRG神经元兴奋性和TRPV1电流的影响;采用Western blot检测Paeonol对TRPV1蛋白表达的影响。结果Paeonol能剂量依赖性地抑制骨癌痛大鼠的机械痛和热痛,上调骨癌痛大鼠DRG神经元静息膜电位的绝对值、诱发动作电位的去极化电流阈值和动作电位爆发的阈值,也能降低去极化电流诱发的DRG神经元动作电位发放的频率;此外,Paeonol还能抑制骨癌痛大鼠DRG上TRPV1总蛋白和膜蛋白的表达,下调骨癌痛大鼠DRG神经元上TRPV1的功能。结论Paeonol可以通过下调TRPV1的表达进而抑制神经元的兴奋性,从而治疗骨癌痛。

壮药了刁竹质量控制方法的研究

目的 建立壮药了刁竹全草定性鉴别方法和含量测定方法，为了刁竹的质量控制提供参考。方法 采用性状、显微、薄层层析（TLC）鉴别方法和高效液相色谱（HPLC）含量测定方法，对了刁竹进行定性和定量检测，其中HPLC色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，流动相为甲醇-水（55 ∶45），检测波长为274 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃。结果 在TLC鉴别中，两种鉴别方法均可见特征斑点，具有专属性，且特征性强、重复性好。应用HPLC法，当丹皮酚进样量为0.004328～0.2164 μg时，进样量与峰面积呈良好的线性关系：Y=5053.4X-1.7687，r=0.9998，平均加样回收率为99.42%；10批药材丹皮酚含量为0.15%～1.16%，平均为0.59%。结论 建立的了刁竹全草定性鉴定和定量测量标准可有效控制该药材的质量。

不同产地寮刁竹药材中丹皮酚的含量的测定

目的：对不同产地的寮刁竹药材中丹皮酚含量进行测定，为更好地评价寮刁竹药材的质量提供依据。方法：用高效液相色谱法采用Promosil C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水（55：45）为流动相，流速1．0ml·min^-1，检测波长为274nm，进样量为10μl。结果：丹皮酚在0．0494～0．7908mg·ml^-1范围内线性关系良好（r=0．9999），回收率为99．98％，RSD为0．17％，不同产地寮刁竹中。丹皮酚含量有明显差异。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于不同产地寮刁竹药材中丹皮酚含量的测定。

HPLC法测定徐长卿药材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量

目的建立徐长卿药材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量测定方法。方法色谱柱:Venusil XBP-C18(200mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇—水(70∶30,v/v);流速:1.0mL.min-1;检测波长:274nm。结果丹皮酚在0.03225～12.9μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),药材和丹皮酚注射液样品的平均回收率分别为97.8%和98.6%,RSD分别为1.2%和1.3%。结论本法快速、准确,可有效控制徐长卿药材和丹皮酚注射液的内在质量。

正骨水中徐长卿的提取工艺优化

目的:优选正骨水中徐长卿的提取工艺。方法:以丹皮酚提取量为指标,采用正交试验考察粉碎度、乙醇体积分数及提取时间对提取工艺的影响,通过HPLC测定丹皮酚含量。结果:最佳提取工艺为粉碎度20目,加70%乙醇浸提60 h,丹皮酚提取量5.34 mg.g-1。结论:该工艺稳定可行,为正骨水的工业生产提供参考。

徐长卿化学成分和药理作用的研究进展及质量标志物(Q-Marker)预测分析

徐长卿为萝摩科植物徐长卿Cynanchum paniculatum的干燥根和根茎,为我国传统中药,于《神农本草经》中列为上品。其化学成分多样,至今已发现挥发油类、C21甾体类、多糖类、黄酮类成分等共计168余种。现代药理学研究表明,徐长卿具有广泛的镇痛、抗炎、抗病毒、神经保护等药理作用。主要对徐长卿的化学成分和药理作用的研究进展进行综述,并对其质量标志物(quality marker,Q-Marker)进行预测分析,丹皮酚和邻羟基苯乙酮可作为徐长卿的主要Q-Marker,以期为徐长卿进一步深入研究和临床应用提供参考。

徐长卿丹皮酚-β-环糊精包合物的制备方法

为克服丹皮酚水溶性差和易挥发的缺陷,提高丹皮酚的稳定性和生物功效。研究从萝摩科植物徐长卿中提取丹皮酚结合β-环糊精的功能性特质,研究采用超声饱和溶液法制备丹皮酚-β-环糊精包合物。试验中分别考察了包和温度、包和时间、投料比和分散溶剂浓度对丹皮酚-β-环糊精包合物收得率和包合率的影响,以收得率和包和率为评价指标,利用正交设计优化丹皮酚的提取工艺。试验结果显示,徐长卿丹皮酚-β-环糊精包合物的最佳制备工艺条件为,包合温度30℃、包合时间1 h、料液比1∶10。此时,丹皮酚-β-环糊精包合物的包合物收得率可达73.19%,包合率可达58.73%。研究得出,超声饱和溶液法工艺方便,设备要求简单,结合适当的工艺条件可用于徐长卿丹皮酚-β-环糊精包合物的制备。

HPLC测定了刁竹不同部位中的丹皮酚

目的采用HPLC法测定壮药了刁竹不同药用部位中丹皮酚的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(55∶45),流速1.0 m L·min-1,柱温为室温,检测波长274 nm。结果除6号样品外,其余9批样品的根及根茎中丹皮酚的含量均高于地上部分;10批样品不同部位中丹皮酚的平均含量依次为:根及根茎(0.81%)>全草(0.59%)>地上部分(0.49%),全草中丹皮酚的含量仍较高。结论广西壮医使用了刁竹全草入药具有一定的科学性,了刁竹的地上部分资源值得开发利用。

定量核磁共振氢谱法对徐长卿中丹皮酚含量的快速提取和含量测定

徐长卿是一种治疗多种疾病的中药材。丹皮酚是徐长卿的主要活性成分,也是质量控制的关键指标物。本文以核磁共振氢谱建立了一种徐长卿中丹皮酚含量的快速、准确、精密的检测方法。结果表明,氘代甲醇作溶剂可以很好的实现核磁共振氢谱中信号的分离,H-6 (δ7.78)可用作定量分析特征信号,均苯三甲酸用作内标。所建立的方法经线性范围、专属性、重复性和稳定性进行了确证。本文首次采用定量核磁共振氢谱检测徐长卿中丹皮酚的含量,线性范围较其他药材中丹皮酚的含量检测更宽。采用单次提取方式对丹皮酚进行提取,方法快速,更利于应用于质量控制中。本文研究表明相对现有基于高效液相色谱检测方法,定量核磁共振氢谱法是一种适合徐长卿质量控制可行的替代方法。