吲哚类菁染料Cy3嵌入的核壳荧光纳米颗粒的制备及其性质研究

以蛋白质或多肽修饰的吲哚类菁染料Cy3为内核,采用实验条件简单的油包水反相微乳液方法成核,通过正硅酸乙酯水解形成的网状二氧化硅包壳的方法制备吲哚类菁染料Cy3嵌入的核壳荧光纳米颗粒.考察了以不同等电点的蛋白质和多肽修饰的Cy3为内核材料对吲哚类菁染料Cy3嵌入的核壳荧光纳米颗粒制备的影响.结果表明,分别采用人免疫球蛋白(IgG)或多聚赖氨酸修饰的Cy3为内核材料,都能制备荧光强度高、荧光稳定性强和染料泄漏极少的Cy3嵌入的核壳荧光纳米颗粒.进一步对Cy3嵌入的核壳荧光纳米颗粒进行了表征,并将基于这一新型的荧光纳米颗粒建立起来的生物标记方法初步应用于流感病毒DNA的检测,其检测线性范围为3.18×10-10～1.27×10-9mol/L,检测下限为3.51×10-10mol/L,相关系数r为0.9865.

芽孢杆菌CY1-3株碱性纤维素酶基因celC的克隆及其在大肠杆菌中的表达

芽孢杆菌CY1-3株基因组DNA经Sau3A Ⅰ部分消化后回收2～7 kb片段,构建了部分文库.通过刚果红染色鉴定,筛选出6个纤维素酶基因的阳性克隆子,经酶切鉴定为同一克隆子,命名为pGJc-1.经测序分析,该片段包含一个由1 593个核苷酸组成的开放阅读框（ORF）,命名为celC.经推导,celC基因编码由一531个氨基酸残基组成的CelC蛋白.氨基酸序列分析表明,CelC蛋白的氨基酸序列与多种细菌的β-1,4-内切葡聚糖酶具有很高的同源性.粗酶液的SDSPAGE分析表明,celC基因在大肠杆菌中所表达的CelC蛋白具有纤维素酶活力,其分子质量约为58 ku.

兔宫颈固相转染靶向HPV16 siRNA抑制荷宫颈癌SCID小鼠HPV的复制

目的:(1)探讨在体细胞固相转染siRNA的可行性、安全性及有效性。(2)探讨改变宫颈表面黏膜通透性提高转染效果的可能性。方法:(1)设计针对HPV16 siRNA,长度为21nt,采用Cy3荧光标记,制备siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶。(2)选新西兰雌性未孕兔12只,随机分为实验组及对照组,实验组在转染前使用200mmol/L高渗盐水处理兔宫颈表面10min,对照组则使用生理盐水处理兔宫颈,将siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶1.5mL涂于兔宫颈表面,进行siRNA转染,持续24h。24h后将兔处死,取其宫颈组织。(3)肉眼观察宫颈局部有无红肿、破溃等改变,取部分作快速冰冻切片,荧光显微镜检测转染siRNA的转染效果;部分组织进行石蜡包埋切片,普通显微镜观察宫颈局部组织细胞形态,评估siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶的副反应。(4)将12只荷HPV宫颈癌SCID小鼠随机分为siRNA转染组及对照组,转染组使用siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶进行基因治疗,对照组仅使用Lipo2000-卡波姆凝胶,转染后取瘤体,采用PCR检测治疗前后瘤体中HPV16-DNA滴度,鉴定siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶疗效。结果:(1)高渗氯化钠预处理组及对照组兔宫颈局部上皮组织内均可见红色的荧光;被转染组织局部无红肿、破溃等不良反应。宫颈局部组织结果正常,细胞形态完整,局部无炎性细胞浸润。(2)使用siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶治疗后小鼠瘤体中HPV-DNA的滴度较前明显下降(P<0.05)。结论:(1)siRNA可通过Lipo2000成功转染入在体宫颈局部组织细胞中,siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶对宫颈局部组织无明显毒、副反应。(2)siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶可有效降低荷SiHa细胞宫颈癌瘤体中HPV16-DNA滴度,具有抑制HPV复制的作用。(3)目前没有足够的证据表明转染前增加宫颈黏膜的通透性可以提高siRNA的转染效果。

甲醇对三甲川菁染料敏化TiO_2纳米晶电极的影响

用光电化学方法研究了三甲川菁染料敏化TiO2纳米晶电极的光电化学行为。结合三甲川菁Cy3的UV-Vis吸收光谱和循环伏安曲线,确定了染料Cy3电子基态和激发态能级位置。结果表明,Cy3电子激发态能级位置能与TiO2纳米粒子导带边位置相匹配,因而用染料Cy3敏化TiO2纳米晶电极,可使其吸收波由紫外光区红移至可见光区,显著提高了TiO2纳米晶电极在可见光区的光电流密度,光电转换效率得到明显改善,在膜厚为6.5μm、敏化时间为4h的条件下,IPCE值(incident photo-to-electricity conversion efficiency)最高可达22.9%,甲醇浸泡处理可进一步提高至29.0%,此时光电池的光电转换效率η=1.51%。

壳聚糖支载菁染料荧光探针及荧光特性

壳聚糖支载有机荧光染料可在生理条件下改变其荧光特性,本文采用壳聚糖(CTS)支载有机荧光染料Cy3,利用红外光谱和热分析对产物进行了表征,研究了壳聚糖支载的荧光染料紫外吸收光谱和荧光光谱特性,结果表明,壳聚糖支载的荧光染料Cy3的紫外吸收特征峰的波长无明显变化,荧光强度明显增强,支载后的荧光染料光稳定性良好,初步细胞标记实验显示,壳聚糖支载后的Cy3染料对脑胶质瘤细胞具有良好的亲和性,并能穿透细胞膜且发出明显荧光。

CY3菌株代谢中间产物的氧化产物的分析与鉴定

实验通过研究发现CY3菌株不但能代谢原始的多环芳烃,还可以在很短的时间内将中间产物代谢掉,从而使这些中间产物不易积累。通过GC-MS来鉴定CY3菌株将1-羟基-2-萘甲酸降解为1-羟基萘,1,2-二羟基萘等。

单芯大功率LED匀光照明阵列的设计

为构造大功率LED激发Cy3/Cy5荧光染料的均匀面照明系统,选择单芯大功率LED芯片PT54TE设计了红绿双通道匀光照明阵列。首先通过分析单芯大功率LED芯片PT54TE辐射强度的分布,建立大功率LED环形照明阵列的模型;然后为提高光线利用率,在LED外侧建立柱面镜反射结构,并通过斯派罗法则求解该结构的参数;最后由Tracepro仿真验证。研究表明,分别由4颗红/绿PT54TE构成的环形阵列在目标平面(30mm×30mm)内的光照均匀度大于95.4%,光通量大于700lm,比未配置柱面镜反射结构的环形阵列的光通量至少提高了52.5%。

生物芯片高效点样微悬臂梁探针的微细加工

生物芯片技术是 90年代初发展起来的一门新兴技术 ,将给 2 1世纪生命科学和医学研究带来一场革命。其中生物芯片中的微阵列分析最为关键 ,尤其受到人们的关注和研究。微阵列形成主要由各种探针接触式点样而得的。微机电系统(MEMS)的兴起和发展为点样探针的制备提供了简单而有效的微细加工技术。介绍了基于MEMS技术的SiO2 基微悬臂梁探针的设计和制备 ,并用这种探针进行Cy3标记链亲和素点样。结果表明这种微悬臂梁探针可以点样 2～ 3μm的样点 ,并且一次取样可以点样至少 30 0 0个点 ,从而实现高价生物微阵列点样。

棉蚜P450 CYP6CY3的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

【目的】克隆得到棉蚜(Aphis gossypii)P450 CYP6CY3,将其开放阅读框(ORF)在原核细胞中进行表达,纯化融合蛋白,多次免疫小鼠获得CYP6CY3多克隆抗体,为进一步分析CYP6CY3在棉蚜不同组织部位的分布及其在抗性中的作用打下基础。【方法】利用RT-PCR及3′-RACE技术克隆获得CYP6CY3的ORF,并对其进行生物信息学及系统进化分析。构建重组质粒pET32a-CYP6CY3,转化大肠杆菌transetta(DE3)进行原核表达,利用切胶回收法获得纯化的融合蛋白,继而用纯化得到的融合蛋白免疫昆明白小鼠制备鼠抗棉蚜CYP6CY3多克隆抗体;ELISA检测鼠抗CYP6CY3蛋白多克隆抗体的效价,并通过Western blot及免疫组化检测该抗体特异性。【结果】棉蚜CYP6CY3 ORF长1 266 bp,编码421个氨基酸,预测蛋白分子量为48.8 k D,理论等电点为8.99,不含有信号肽序列,属亲水性蛋白;氨基酸序列包括W×××R、AG××T、E××R、P××F×PE/DRT和F××G×××C×G 5个P450家族的特征基序。通过NCBI Blastx进行同源序列的比对分析,棉蚜CYP6CY3氨基酸序列与豌豆长管蚜(Acyrthosiphon pisum)(XP_001948581.1)氨基酸一致性最高,达到81%,与麦双尾蚜(Diuraphis noxia)(XP_015379193.1)一致性为79%,与桃蚜(myzus persicae)(AHB52749.1)氨基酸序列一致性为76%,4种蚜虫的氨基酸序列都含有位于螺旋K中参与稳定核心结构的E××R完全保守序列及P450基因标志性的F××G×××C×G(358—367)血红素结合位点的共有序列。使用MEGA5软件构建系统进化树,显示棉蚜、豌豆长管蚜、麦双尾蚜及桃蚜聚为一类,亲缘关系较近。通过原核表达得到的CYP6CY3融合蛋白的相对分子量约为66 k D,基于纯化的CYP6CY3重组蛋白多次免疫昆明白小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测获得的鼠抗CYP6CY3抗体效价达到1﹕409 600。Western blot和免疫组化进一步证实,该抗体既能与异源表达的CYP6CY3蛋白特异性结合,也能与棉蚜组织中存在的天然CYP6CY3蛋白特异性结合,具有较好的免疫反应特异性。【结论】利用3′-RACE技术克隆获得CYP6CY3的开放阅读框,并用异源表达的蛋白免疫昆明白小鼠制备了高滴度、特异性强的鼠抗棉蚜CYP6CY3的多克隆抗体,可用于进一步研究CYP6CY3功能及其在棉蚜抗药性方面的作用。

PLC在CY3型液压式分相操作机构的断路器控制信号系统中的应用

利用日本OMRON (立石 )公司的C系列P型PLC实现了CY3型液压式分相操作机构的断路器控制信号系统。文中给出PLC的接线原理图和梯形图 ,并介绍了其工作原理和相关技术。

水稻总RNA反转录出Cy3-dUTP标记cDNA的研究

以提取的水稻叶总RNA为模板,Cy3-dUTP为标记,进行反转录,得出Cy3-dUTP标记的cDNA,对影响本实验结果的因素进行了探究。

高压断路器CY_3型液压操作机构故障分析

部分220kV变电站的少油断路器采用CY3型液压操作机构，目前断路器运行时间大多为10年以上，其液压操作机构的部分部件老化，导致运行故障。

操作机构造成的断路器事故

通过一起越级跳闸事故的分析,找出液压操作机构造成断路器拒跳的原因,并提出了具体的解决办法。

PPARγ在阿尔茨海默病中的作用及影响因素研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是一种以记忆丧失和认知衰退为主要临床症状的大脑神经退行性疾病。目前有关AD的病因仍然不明确且临床上无有效的防治措施。PPARγ是一种配体激活型转录因子,在AD的病理过程中扮演着重要角色,可作为神经保护作用靶点;同时许多PPARγ的激动剂己经被证明在AD的细胞和动物模型上具有神经保护作用。文中综述了PPARγ在AD中发挥的作用,以及影响PPARγ活化的因素,特别强调矢车菊素-3-O-葡糖糖苷(Cy3G)在发挥神经保护作用的同时,可能作为神经系统中潜在的PPARγ激动剂。

基于CdSe/ZnS量子点荧光生物传感器构建与应用

设计了一种由CdSe/ZnS量子点和荧光染料Cy3(C31H37KN2O8S2)基于荧光共振能量转移(FRET)原理的生物传感器,并进行了该体系下不同浓度和不同pH溶液中荧光转移强度的实验。实验表明:CdSe/ZnS荧光半导体量子点作为供体对Cy3(C31H37KN2O8S2)染料的荧光增强作用明显。在CdSe/ZnS量子点与Cy3的比例为1∶1.2时,荧光转移效率达到83.68%,对细胞外液p H值荧光变化敏感(pH=5.93~8.36)。此外,该生物传感器可以清楚地识别前列腺癌细胞。该实验结果对前列腺癌细胞的早期诊断和前列腺癌生物传感器的设计提供了一种新的方法。

壳聚糖偶联Cy3复合探针制备条件优化及光谱特性分析

将壳聚糖(CTS)与Cy3偶联得到一种复合探针分子CTS-Cy3,通过紫外标准曲线法计算出CTS-Cy3的偶联比.研究了不同条件下CTS与Cy3的偶联规律以及光谱特性.实验结果表明:在70,℃以下,壳聚糖(相对分子质量3,000)与Cy3比例为1∶2,反应20 h得到的产品有较好的偶联比;光谱特性研究发现,复合探针分子与菁染料Cy3有相同的紫外最大吸收波长,荧光stocks位移不变,而荧光量子产率有明显提高,具有一定的荧光加合效应.

CY3液压机构故障的原因分析和处理

110 kV以上高压少油断路器,一般都配置CY3型液压操作机构.该液压机构具有体积小、功率大等优点,但是其故障率也明显高于弹簧和电磁操作机构.……

紫甘蓝花色苷及其复合体的抗炎活性研究

为了探究紫甘蓝花色苷—3-二糖-5-D-吡喃葡糖苷矢车菊素(cyanidin-3-diglcoside-5-glcoside,Cy)及其复合体对鼠源单核-巨噬细胞RAW264.7的抗炎活性,首先采用紫甘蓝花色苷碱水解产物中的Cy为原料,模拟天然蓝花中结构相对稳定的花色苷复合体存在形式,与芦丁(rutin)及2种不同金属离子(Mg^(2+)和Fe^(3+))构建5种Cy复合体;然后通过建立脂多糖(LPS)诱导的鼠源单核-巨噬细胞RAW264.7炎症模型,评价Cy复合体构建前后对Cy抗炎活性的影响。结果表明,Cy可以显著性抑制RAW264.7细胞上清液中NO释放及细胞内炎症相关基因iNOS、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA的表达(P<0.05)。在构建的复合体中,与Cy相比,Cy-Fe^(3+)、Cy-rutin-Fe^(3+)、Cy-Mg^(2+)和Cy-rutin-Mg^(2+)复合体的抗炎活性均显著提高(P<0.05)。其中,Cy-Mg^(2+)和Cy-rutinMg^(2+)复合体的抗炎活性高于Cy-Fe^(3+)和Cy-rutin-Fe^(3+)复合体,而Cy-Mg^(2+)复合体的抗炎活性最强。由这些结果可以得出Cy及其复合体均具有显著的抗炎活性,且Cy复合体的抗炎活性高于Cy。Cy复合体有望开发成为一种新型食品添加剂,辅助干预炎症反应及其引起的相关疾病。

碱性纤维素酶高产菌株Bacillus sp.CY1-3的诱变选育

以一株产单组分羧甲基纤维素酶芽孢杆菌Bacillus sp.CY1-3为出发菌,经紫外线和亚硝基胍复合诱变处理后,其纤维素酶产量达到了53.86 U/mL,是出发菌株的4倍.研究发现最优的紫外辐射时间和亚硝基胍浓度分别是4min和0.06%.