大鼠心肌缺血再灌注损伤中Cyslt2r的促进作用

目的探讨Cyslt2r的过表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤中的促损伤作用。方法采用心脏左冠状动脉穿线结扎法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,免疫组织化学法检测缺血心肌组织Cyslt2r、P-选择素和MPO的蛋白表达,Western Blot法检测Cyslt2r和P-选择素的蛋白表达;大鼠尾静脉注射伊文思兰观察心肌血管通透性。结果大鼠心肌缺血再灌注损伤中缺血心肌组织CysLlt2r过表达、心肌血管通透性增加,与心肌血管通透性密切相关的MPO和P-选择素的蛋白表达增强;Cyslts抑制剂BAY-U9733明显抑制缺血心肌组织CysLlt2r的过表达,同时降低心肌血管通透性,减少MPO、P-选择素的表达。结论 Cyslt2r过表达可能促进了大鼠心肌缺血再灌注损伤。

CysLT2受体拮抗剂HAMI3379抑制LPS诱导小鼠小胶质瘤细胞系的炎性反应

目的探究半胱氨酰白三烯2(CysLT2)受体拮抗剂HAMI3379对LPS诱导小鼠小胶质细胞(BV-2)炎性反应的调控作用及其可能的作用机制。方法体外培养BV-2,将BV-2分为对照组、LPS(100 ng/mL)组、HAMI3379(0.01、0.1和1μmol/mL)组和LPS+HAMI3379组。CCK-8法检测BV-2细胞的增殖;ELISA检测细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10的含量;Western-blot检测PKCα、IKBα、NF-κB p50和p65蛋白的表达。结果LPS能够激活BV-2细胞,促进其细胞的增殖(P<0.05);显著增加细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α的分泌,减少IL-10的分泌(P<0.05);且显著上调PKCα、IKBα、p65蛋白的表达水平(P<0.05)。CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够显著减轻上述变化(P<0.05)。结论CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够抑制LPS激活BV-2细胞,抑制炎性反应,其作用机制可能与抑制PKCα/NF-κB信号通路有关。

栀子苷和黄芩苷配伍对脑缺血损伤急性期和恢复早期大鼠海马中CysLT2R蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察脑缺血再灌注损伤大鼠急性期和恢复早期的半胱氨酰白三烯受体(CysLT2R)蛋白及其基因mRNA的表达,探讨CysLT2R在各组之间表达的差异,观察黄芩苷和栀子苷对其表达的影响。方法:56只雄性SD大鼠,分为假手术组、急性期和恢复早期模型对照组、栀子苷和黄芩苷配伍组,醒脑静组。各组预防给药4d后,采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型,缺血24h后和72h后,处死大鼠,剥离海马组织,观察海马组织病理改变,采用wester-blot法Real Time-PCR技术检测脑缺血再灌注损伤急性期和恢复早期大鼠海马组织中CysLT2R蛋白和mRNA的表达情况。结果:与假手术组比较,栀子苷和黄芩苷配伍(9mg+21mg)可改善脑缺血急性期及恢复早期组织病理变化。脑缺血急性期和恢复早期模型组大鼠海马组织CysLT2R蛋白表达均明显升高。栀子苷和黄芩苷配伍组大鼠海马组织CysLT2R的蛋白表达明显降低;海马CysLT2RmRNA表达在模型组急性期和恢复早期样本中增加,在栀子苷和黄芩苷配伍组中表达减少。结论:栀子苷和黄芩苷配伍可对脑缺血急性期和恢复期大鼠CysLT2R蛋白和mRNA表达升高产生一定的抑制作用。

半胱氨酰白三烯受体2多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2)多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性及应用。方法:以KLH偶联的CysLT2受体多肽免疫家兔制备抗体,用间接ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性;同时,以新制备的抗体进行Western blot和免疫组化,检测CysLT2受体的组织表达。结果:ELISA测定显示,获得的家兔抗CysLT2受体抗体的效价大于1/1 047 296,对CysLT2受体的特异性强,对CysLT1受体和GPR17基本无交叉反应。Western blot结果显示,CysLT2受体在大鼠、小鼠肾、脑和肺中有较高的表达,其分子量在40 kD左右。免疫组化结果表明,CysLT2受体主要表达在大鼠神经元,也表达在部分星形胶质细胞。结论:制备的CysLT2受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blot和免疫组化检测的要求。

半胱氨酰白三烯及其受体的信号转导通路研究进展

半胱氨酰白三烯(Cysteinyl-leukotrienes,CysLTs)能够产生广泛的促炎作用,例如促进气道和血管平滑肌收缩,通透性增加导致的原生质渗出及水肿,粘液分泌增多等。CysLTs在哮喘、过敏性鼻炎、心血管等疾病中是一类很重要的生物活性介质。白三烯受体(Cysteinyl-LT receptors,CysLTRs)的亚型分类是基于使用天然激动剂和各种拮抗剂而获得的亲和力和功能方面的数据进行划分的。通过不同的信号转导通路CysLTs及其受体在不同组织器官产生了不同的生物学作用,本文介绍了CysLTs及其受体的下游信号转导通路研究的最新进展。

半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛

目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达CysLT2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物。采用CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和CysLT2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照。结果:RT-PCR鉴定表明C6细胞高表达CysLT2受体。LTD41μmol/L能显著升高C6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37.5%。CysLT2受体拮抗剂抑制LTD4诱导的C6细胞内钙升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD4诱导的细胞内钙升高。结论:LTD4诱导的C6细胞的钙信号变化可作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有CysLT2受体拮抗活性。

Montelukast, a leukotriene receptor antagonist, modulates lung CysLT1

AIM: To determine the expressions of cysteinyl leukotriene receptors, CysLT, and CysLT2 , in airway eosinophilic inflammation of OVA-induced asthmatic mice and the modulation by montelukast, a CysLT1 receptor antagonist. METHODS: Asthma model was induced by chronic exposure to ovalbumin (OVA) in C57BL/6 mice. The eosinophils