黄芩苷与栀子苷组合物对脑缺血损伤大鼠5-LOX/CysLTs/CysLT通路的影响

目的研究黄芩苷、栀子苷配伍治疗脑缺血损伤中对5-LOX/CysLTs/CysLT通路的影响。方法 SD大鼠分为对照组、模型组、黄芩苷-栀子苷(7∶3)30、45、60 mg/kg组,以模型模拟脑缺血恢复期损伤。持续恢复1周,神经功能学评分及HE染色观察药物的脑保护作用,ELISA测定脑组织Cys LTs水平,Western-blot检测脑部5-LOX、CysLT_1、CysLT_2的表达,免疫荧光双标研究小胶质细胞活化与5-LOX通路相关性。结果黄芩苷、栀子苷持续给药一周后可以降低缺血区炎细胞浸润及组织水肿,与模型组比较能显著降低神经功能学评分,抑制小胶质细胞激活,降低Cys LTs的水平及下调5-LOX、CysLT_1、CysLT_2的表达(P<0.01)。结论黄芩苷与栀子苷组合物可以通过改善炎症损伤来减轻脑缺血损伤,其作用机制与抑制小胶质细胞活化和5-LOX/CysLTs/CysLT信号通路相关。

穿山龙对支气管哮喘大鼠CysLTs炎症通路的影响研究

目的:探讨穿山龙对哮喘大鼠炎症因子的抑制作用。方法:将雌性SD大鼠50只随机分为5组,分别是正常组、哮喘模型组、穿山龙组、孟鲁司特钠组、穿山龙合孟鲁司特钠组。除了正常组外,其余各组均制作哮喘模型;除了哮喘模型组外,其余3组均给予对应的药物治疗,正常组和哮喘模型组用生理盐水代替。治疗20天后取材,使用HE染色法观察病理变化,采用ELISA检测各组血清中IL-5、CysLTs水平,采用RT-PCR法测定肺组织中Eot-3mRNA、CysLTR1mRNA的表达水平。结果:哮喘模型组血清中IL-5、CysLTs水平明显高于穿山龙组、孟鲁司特钠组、穿山龙合孟鲁司特钠组3个治疗组,差异有统计学意义;与哮喘模型组相比,3个治疗组大鼠肺组织中CysLTR1和Eot-3的mRNA水平均有降低,差异有统计学意义。结论:穿山龙可能通过抑制炎症因子IL-5、CysLTs、CysLTR1mRNA及Eot-3mRNA,对CysLTs炎症通路产生影响。

5-LOX-CysLTs-CysLTsR表达规律及黄芩苷-栀子苷配伍对大鼠脑缺血抗炎作用机制研究

目的动态观察脑卒中大鼠脑组织半胱氨酰白三烯(CysLTs)活性及其5-脂氧酶(5-LOX)、半胱氨酰白三烯受体1(CysLTs1)、半胱氨酰白三烯受体2(CysLTs2)表达水平变化规律,探讨黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍抗脑缺血炎性损伤机制.方法线栓法制备大脑中动脉堵塞模拟脑缺血模型,模型成功后随机分为空白对照组(Control)、模型组(pMCAO)、黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组、齐留通45mg/kg组、孟鲁司特0.5mg/kg组,持续35d给药治疗,每隔7d,神经功能评分观察神经保护作用,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测脑组织CysLTs含量;蛋白质印迹(WesternBlot)法检测脑组织5-LOX、CysLTs1、CysLTs2蛋白表达水平.结果与模型组相比,黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组在脑缺血28d内可显著降低了CysLTs水平;WesternBlot结果显示,5-LOX、CysLTs1和CysLTs2蛋白表达明显降低;至恢复期35d,各蛋白表达水平已无显著性差异.结论黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍可减轻MCAO大鼠的神经功能障碍,其作用机制可能与抑制5-LOX活性、降低CysLTs1和CysLTs2蛋白表达有关.

过表达5-脂氧合酶通路对氧糖剥夺/复氧小胶质细胞增殖、凋亡的影响

目的:探索5-脂氧合酶(5-LOX)通路在脑缺血炎性损伤中发挥神经保护作用机制。方法:通过慢病毒包装构建5-LOX过表达载体病毒,转染BV2细胞,建立5-LOX过表达的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)BV2细胞模型。OGD/R BV2细胞分别给予抑制剂齐留通(Zileuton)、半胱氨酰白三烯受体阻断剂孟鲁司特(Montelukast)和白三烯B4受体抑制剂U75302,分别阻断5-LOX、白三烯B4受体(BLTs)和半胱氨酰白三烯受体(CysLTRs)。实验分为空载体对照组、过表达组、模型组和给药组,显微镜观察细胞形态变化,采用MTT与流式细胞术分别检测空载体对照组与5-LOX过表达组细胞活力与凋亡。结果:显微镜观察显示出空载体对照组OGD后细胞数目减少,细胞形态逐渐形成“阿米巴状”,5-LOX过表达增加细胞损伤;与模型组相比,给予Zileuton、Montelukast、U75302后,细胞形态恢复,减缓细胞的“阿米巴状”。BV2细胞缺氧缺糖4 h复氧12 h后,与空载体对照组相比,过表达5-LOX细胞活力下降(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01);与模型组相比,过表达5-LOX介导OGD/R损伤;Zileuton、Montelukast、U75302显著提高细胞活力(均P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01)。结论:5-LOX通过CysLTs/CysLTRs和LTB4/BLTs途径介导小胶质细胞OGD/R的损伤和激活,这一结果能够为脑缺血/再灌注损伤的诊断和临床治疗提供分子基础。