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胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞株BRL凋亡的影响
被引量:
1
1
作者
闫骏
李彦敏
+1 位作者
郭雪西
章明放
《天津医药》
CAS
北大核心
2014年第9期853-858,I0002,I0003,共8页
目的:探讨内源性胱硫醚β-合酶(CBS)/胱硫醚γ-裂解酶(CSE)-硫化氢(H2S)体系在生理状态肝细胞凋亡中的作用及其机制。方法培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA(siRNA)序列筛选:设阴性siRNA序列转染组(对照组)、CBS siRNA序...
目的:探讨内源性胱硫醚β-合酶(CBS)/胱硫醚γ-裂解酶(CSE)-硫化氢(H2S)体系在生理状态肝细胞凋亡中的作用及其机制。方法培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA(siRNA)序列筛选:设阴性siRNA序列转染组(对照组)、CBS siRNA序列转染组(CBS 1~3序列组)和CSE siRNA序列转染组(CSE 1~3序列组),转染24、48 h;siRNA转染后检测细胞凋亡:设阴性对照组、溶剂对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、(CBS+CSE)siRNA组,作用时间为转染后0、4、8、12、24 h;凋亡机制探讨:设阴性对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、(CBS+CSE)siRNA组,作用时间为转染后4、8、12、24 h;每组均4个平行样。RT-PCR、Western blot检测BRL细胞中CBS、CSE mRNA和蛋白的表达,siRNA基因静默CBS、CSE,去蛋白法检测H2S生成,Hoechst荧光染色、流式细胞术检测BRL细胞凋亡,荧光染色检测线粒体膜电位(MMP)变化,Western blot 检测胞浆内细胞色素 C(Cyt C)和激活型 caspase 3(cleaved-caspase 3)蛋白表达变化。结果 BRL细胞株存在CBS、CSE表达。CBS/CSE siRNA转染后,细胞内源性H2S生成降低,凋亡细胞数量和细胞凋亡率随时间延长而逐渐增加,BRL细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)活性均未见明显变化,MMP下降,胞浆内Cyt C蛋白表达上调,cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论抑制内源性H2S体系可引起生理状态肝细胞凋亡,机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。
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关键词
胱硫醚Β合酶
胱硫醚γ裂合酶
硫化氢
RNA
小分子干扰
细胞凋亡
brl
细胞
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职称材料
胱硫醚γ-裂解酶产生的内源性硫化氢对脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡的调节作用
2
作者
李翠
陈锋
张永亮
《中国急救复苏与灾害医学杂志》
2013年第5期431-436,共6页
目的探讨内源性胱硫醚γ-裂解酶(CSE)/硫化氢(H2S)体系在脂多糖(LPS)诱导的肝细胞凋亡中的调节作用。方法培养大鼠正常肝细胞系BRL。实验随机分组为溶剂对照组、siRNA阴性对照组、CSEsiRNA组、LPS组、CSEsiRNA+LPS组。设立时间点...
目的探讨内源性胱硫醚γ-裂解酶(CSE)/硫化氢(H2S)体系在脂多糖(LPS)诱导的肝细胞凋亡中的调节作用。方法培养大鼠正常肝细胞系BRL。实验随机分组为溶剂对照组、siRNA阴性对照组、CSEsiRNA组、LPS组、CSEsiRNA+LPS组。设立时间点为0h、4h、12h、24h;每组4个平行样。通过LPS孵育大鼠肝细胞系BRL不同时间,造成细胞损伤模型,以培养液上清中LDH活性反映细胞损伤程度。通过RT—PCR与Westernblot检测CSE基因、蛋白表达,用去蛋白法检测H2S生成情况;应用RNAi干扰技术,成功转染CSEsiRNA于肝细胞中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多。通过荧光染色法检测BRL细胞线粒体膜电位(MMP)变化,通过Westernblot检测胞浆细胞色素c蛋白表达变化,应用流式细胞术检测BRL细胞凋亡率变化情况。结果LPS可显著提高CSE基因、蛋白的表达,并使H2S生成增多。同时也可使MMP降低并导致细胞凋亡率的增加。通过RNAi干扰技术,成功转染CSEsiRNA于肝细胞系BRL中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多。与LPS单独作用BRL细胞相比,LPS作用转染后BRL细胞可导致MMP在短时间点降低,而在长时间点出现逐渐增加趋势;相应的细胞凋亡率则出现相反的趋势。结论在LPS诱导的细胞凋亡过程中,内源性CSE/H2S体系表现为早期抑制凋亡,晚期促进凋亡的特点。
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关键词
胱硫醚γ-裂解酶
硫化氢
凋亡
脂多糖
brl
细胞
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职称材料
题名
胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞株BRL凋亡的影响
被引量:
1
1
作者
闫骏
李彦敏
郭雪西
章明放
机构
第一中心医院病理科
出处
《天津医药》
CAS
北大核心
2014年第9期853-858,I0002,I0003,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(81300346)
文摘
目的:探讨内源性胱硫醚β-合酶(CBS)/胱硫醚γ-裂解酶(CSE)-硫化氢(H2S)体系在生理状态肝细胞凋亡中的作用及其机制。方法培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA(siRNA)序列筛选:设阴性siRNA序列转染组(对照组)、CBS siRNA序列转染组(CBS 1~3序列组)和CSE siRNA序列转染组(CSE 1~3序列组),转染24、48 h;siRNA转染后检测细胞凋亡:设阴性对照组、溶剂对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、(CBS+CSE)siRNA组,作用时间为转染后0、4、8、12、24 h;凋亡机制探讨:设阴性对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、(CBS+CSE)siRNA组,作用时间为转染后4、8、12、24 h;每组均4个平行样。RT-PCR、Western blot检测BRL细胞中CBS、CSE mRNA和蛋白的表达,siRNA基因静默CBS、CSE,去蛋白法检测H2S生成,Hoechst荧光染色、流式细胞术检测BRL细胞凋亡,荧光染色检测线粒体膜电位(MMP)变化,Western blot 检测胞浆内细胞色素 C(Cyt C)和激活型 caspase 3(cleaved-caspase 3)蛋白表达变化。结果 BRL细胞株存在CBS、CSE表达。CBS/CSE siRNA转染后,细胞内源性H2S生成降低,凋亡细胞数量和细胞凋亡率随时间延长而逐渐增加,BRL细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)活性均未见明显变化,MMP下降,胞浆内Cyt C蛋白表达上调,cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论抑制内源性H2S体系可引起生理状态肝细胞凋亡,机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。
关键词
胱硫醚Β合酶
胱硫醚γ裂合酶
硫化氢
RNA
小分子干扰
细胞凋亡
brl
细胞
Keywords
cystathionine
β-synthase
cystathionine
gamma
-lyase
hydrogen
sulfide
RNA,small interfering
apoptosis
brl
cells
分类号
R363.1 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
胱硫醚γ-裂解酶产生的内源性硫化氢对脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡的调节作用
2
作者
李翠
陈锋
张永亮
机构
中国人民武装警察部队总医院放射科
中国人民武装警察部队后勤学院训练部
出处
《中国急救复苏与灾害医学杂志》
2013年第5期431-436,共6页
文摘
目的探讨内源性胱硫醚γ-裂解酶(CSE)/硫化氢(H2S)体系在脂多糖(LPS)诱导的肝细胞凋亡中的调节作用。方法培养大鼠正常肝细胞系BRL。实验随机分组为溶剂对照组、siRNA阴性对照组、CSEsiRNA组、LPS组、CSEsiRNA+LPS组。设立时间点为0h、4h、12h、24h;每组4个平行样。通过LPS孵育大鼠肝细胞系BRL不同时间,造成细胞损伤模型,以培养液上清中LDH活性反映细胞损伤程度。通过RT—PCR与Westernblot检测CSE基因、蛋白表达,用去蛋白法检测H2S生成情况;应用RNAi干扰技术,成功转染CSEsiRNA于肝细胞中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多。通过荧光染色法检测BRL细胞线粒体膜电位(MMP)变化,通过Westernblot检测胞浆细胞色素c蛋白表达变化,应用流式细胞术检测BRL细胞凋亡率变化情况。结果LPS可显著提高CSE基因、蛋白的表达,并使H2S生成增多。同时也可使MMP降低并导致细胞凋亡率的增加。通过RNAi干扰技术,成功转染CSEsiRNA于肝细胞系BRL中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多。与LPS单独作用BRL细胞相比,LPS作用转染后BRL细胞可导致MMP在短时间点降低,而在长时间点出现逐渐增加趋势;相应的细胞凋亡率则出现相反的趋势。结论在LPS诱导的细胞凋亡过程中,内源性CSE/H2S体系表现为早期抑制凋亡,晚期促进凋亡的特点。
关键词
胱硫醚γ-裂解酶
硫化氢
凋亡
脂多糖
brl
细胞
Keywords
cystathionine γ-lyase
,
hydrogen sulfide
,
apoptosis
,
lipopolysaccharide
,
brl
分类号
R333.4 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞株BRL凋亡的影响
闫骏
李彦敏
郭雪西
章明放
《天津医药》
CAS
北大核心
2014
1
下载PDF
职称材料
2
胱硫醚γ-裂解酶产生的内源性硫化氢对脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡的调节作用
李翠
陈锋
张永亮
《中国急救复苏与灾害医学杂志》
2013
0
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职称材料
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