基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,龟鹿组、龟板组及鹿角组软骨细胞活性均明显升高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与龟板组、鹿角组比较,龟鹿组软骨细胞活性更高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率更低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均更低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。与龟板组比较,鹿角组软骨细胞活性,软骨细胞凋亡率,细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度,细胞中Caspase-3、PARP-1、MMP-13、Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量高均更高(P均<0.05)。结论 龟板胶可抑制软骨细胞凋亡及ECM降解,鹿角胶可促进软骨细胞增殖和ECM合成代谢,龟鹿二仙胶作用效果优于龟板胶及鹿角胶,作用机制可能与激活Caspase-3/PARP信号通路有关。

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。

Synthesis of N1-Substituted-3-aryl-4-alkyl-4, 5-dihydro-1H-1-pyra-zolethiocarboxamide as Novel Small Molecule Inhibitors of Cysteine Protease of T.cruzi

A series of N1-substituted-3-aryl-4-alkyl-4, 5-dihydro-1H-1-pyrazolethiocarboxamide were prepared from the Mannich bases of aryl ketones in good yields. Some derivatives were found to be active against the cysteine protease of T.cruzi..

妊娠期高血压患者血清SPARC、CTRP-3水平及对妊娠结局的预测价值

目的分析妊娠期高血压患者血清富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)、补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP-3)水平及其对妊娠结局的预测价值。方法选取2019年1月至2021年3月在安康市汉滨区第三人民医院(以下简称该院)接受治疗的妊娠期高血压患者110例作为研究组,并根据妊娠结局将其分为良好组(67例)和不良组(43例),另选取同期在该院孕检的健康孕妇108例作为对照组。收集各组临床资料并进行比较。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象的血清SPARC、CTRP-3水平;采用Pearson相关分析血清SPARC水平与CTRP-3水平的相关性及其与收缩压和舒张压的相关性;采用多因素Logistic回归分析妊娠期高血压不良妊娠结局的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SPARC、CTRP-3水平对妊娠期高血压不良妊娠结局的预测价值。结果研究组收缩压[(131.45±17.58)mm Hg]和舒张压[(95.28±8.12)mm Hg]显著高于对照组[(123.54±15.24)、(76.58±6.24)mm Hg],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组血清SPARC水平[(3.02±0.64)ng/mL]显著高于对照组[(2.18±0.59)ng/mL],而血清CTRP-3水平[(328.26±50.36)ng/mL]显著低于对照组[(417.28±65.34)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清SPARC水平与CTRP-3水平呈负相关(P<0.05),血清SPARC水平与舒张压和收缩压呈正相关(P<0.05),血清CTRP-3水平与舒张压和收缩压呈负相关(P<0.05)。不良组血清SPARC水平、收缩压和舒张压显著高于良好组(P<0.05),而血清CTRP-3水平显著低于良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清SPARC、收缩压和舒张压是影响妊娠期高血压不良妊娠结局的危险因素(P<0.05),CTRP-3是保护因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,SPARC预测妊娠期高血压不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.855,CTRP-3预测妊娠期高血压不良妊娠结局的AUC为0.858,二者联合预测妊娠期高血压不良妊娠结局的AUC为0.934,明显优于SPARC、CTRP-3单独预测(Z=2.578、4.021,P<0.05)。结论娠期高血压患者血清中SPARC高表达、CTRP-3低表达与不良妊娠结局有一定的相关性。

荧光g-C_(3)N_(4)纳米片的制备及对半胱氨酸的检测

半胱氨酸是人体内一种重要的含巯基氨基酸,对其快速定量检测可以为某些疾病的诊断提供依据.该研究利用简单的超声剥离及静电自组装方法制备了C_(3)N_(4)/Ag荧光传感器.该荧光传感器对含巯基的半胱氨酸具有超灵敏的响应,对其检测极限可以低至2.5×10-5 mol/L.该研究为新型超灵敏荧光传感器的构建提供了一条新的途径,具有非常重要的理论价值和实践意义.

SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达及相关性

目的探究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、成纤维细胞活化蛋白-α(fibroblast activation protein-α,FAP-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine aspartase-3,caspase-3)在结直肠癌中的表达及相关性。方法收集2021年4月至2022年4月整理归档较为完整的45例为结直肠癌组织石蜡标本,另外选取45例为距离癌组织边缘5 cm的癌旁组织石蜡标本。采取免疫组化法检测SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达,分析SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达变化及与预后的相关性。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达量均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤位置、远处转移无关,与淋巴结转移、肿瘤的直径、组织学类别、浸润程度、TNM分期、脉管瘤栓、分化程度有关相关,差异有统计学意义(P<0.05)。SIRT1、FAP-α、caspase-3之间Pearson相关性分析显示,SIRT1、FAP-α之间呈正相关(r=0.534,P=0.001);FAP-α、caspase-3之间呈正相关(r=0.556,P=0.001);SIRT1、caspase-3之间呈正相关(r=0.585,P=0.001)。ROC曲线显示,三项联合对结直肠癌的诊断价值高于SIRT1、FAP-α、caspase-3单项诊断(P=0.001)。结论结直肠癌患者机体内SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达上升,可看出其水平变化与结直肠癌患者产生病症有密切的关联,因此三者可作为预测结直肠癌患者治疗的重要依据。

抗菌肽抑制Caspase-3表达对内毒素诱导的急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨抗菌肽Cathelicidin-PY对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法取60只C57BL/6小鼠,随机分为对照组、模型组、小剂量Cathelicidin-PY干预组(1.0 mg.kg^(-1))和大剂量Cathelicidin-PY干预组(3.0 mg.kg^(-1)),每组15只。采用LPS/D-GalN腹腔联合注射构建小鼠ALF模型,其中干预组在注射LPS/D-GalN前2 h经尾静脉注射Cathelicidin-PY。在造模后5 h,每组取5只小鼠采集血标本和肝组织,记录剩余小鼠24 h存活情况。采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平,采用TUENL染色法检测肝细胞凋亡,采用Western blot法检测肝组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3剪切体(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果小剂量和大剂量Cathelicidin-PY干预组小鼠24 h存活率为40%(4/10)和60%(6/10),均显著高于模型组的10.0%(1/10,P<0.05);模型组小鼠血清TNF-α和IL-1β水平分别为(1069.4±178.0)pg/mL和(1354.1±162.9)pg/mL,显著高于对照组【分别为(140.7±33.6)pg/mL和(436.2±46.8)pg/mL,P<0.05】,而小剂量和大剂量Cathelicidin-PY干预组血清TNF-α和IL-1β水平均显著低于模型组(P<0.05);模型组小鼠肝细胞凋亡数量和Cleaved caspase-3蛋白表达均较对照组显著增多或增强(P<0.05),而小剂量和大剂量Cathelicidin-PY干预组肝细胞凋亡数量和Cleaved caspase-3蛋白表达均较模型组显著减少或减弱(P<0.05)。结论Cathelicidin-PY能通过减轻炎症反应和抑制肝细胞凋亡,改善LPS/D-GalN诱导的ALF小鼠肝损伤,降低动物死亡率。

乙型肝炎肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎患者外周血单个核细胞NLRP3和Caspase-1水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨乙型肝炎肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)水平变化及其预测预后的价值。方法 2018年1月~2020年5月我院诊治的乙型肝炎肝硬化并发SBP患者65例,采用PCR法检测PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平,采用ELISA法检测血清血白介素-1β(IL-1β)和IL-18水平。应用受试者工作特征曲线并计算曲线下面积(AUC)分析各指标对患者预后的预测价值。结果 21例重症组PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平及血清IL-1β和IL-18水平分别为(1.5±0.3)和(2.0±0.4)、(11.7±2.1)pg/mL和(17.4±1.6)pg/mL,显著高于44例轻症组【分别为(1.1±0.2)和(1.6±0.3)、(8.6±1.3)pg/mL和(12.1±1.3)pg/mL,P<0.05】;应用PBMCs NLRP3联合Caspase-1水平评估SBP患者病情严重程度的AUC为0.899,SE(95%CI)=0.036(0.828~0.971);15例死亡组PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平及血清IL-1β和IL-18水平分别为(1.7±0.3)和(2.3±0.5)、(12.5±2.2)pg/mL和(18.2±3.1)pg/mL,显著高于50例生存组【分别为(1.1±0.2)和(1.6±0.3)、(8.9±1.8)pg/mL和(12.7±2.5)pg/mL,P<0.05】;应用PBMCs NLRP3联合Caspase-1水平预测患者预后的AUC为0.916,SE(95%CI)=0.043(0.831~0.999)。结论 乙型肝炎肝硬化并发SBP患者PBMCs NLRP3和Caspase-1水平升高,可能与病情严重程度相关,其机制仍需要研究。

健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧皮质Claudin-5、Occludin、p-BAD、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨健脾补土方减轻脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的可能作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组10只、手术组70只,手术组经模型制备后评价,剔除不成功的及死亡大鼠,二次分组,分为模型组、依达拉奉组、健脾补土方高、中、低剂量组,每组各13只。手术组采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),干预7天,取材。取材前每组选取10只,采用国际公认的大鼠脑卒中后神经功能缺损评分法(mNss评分)进行神经功能缺损评分。取材部位为缺血侧脑皮质组织。每组随机选取3只采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察病理形态改变;每组随机选取其中5只采用Western blot法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、闭合蛋白(Occludin)表达量;剩余5只采用免疫组化法检测磷酸化相关死亡启动因子(phospho-Bcl-xL/Bcl-2 asociated death promoter,p-BAD)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达量。结果(1)造模后,与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显上升,经药物干预后,各组神经功能缺损评分均有所下降(P<0.05),其中以依达拉奉组与健脾补土方高剂量组下降最为明显;(2)造模后,模型组大鼠较假手术组病理改变严重,出现组织大片坏死,经药物干预后,各组病理改变均有所改善,依达拉奉组和健脾补土方高剂量组尤为明显;(3)与模型组比较,各药物干预组脑组织缺血皮质区Occludin、Claudin-5蛋白表达均有所上调,差异有统计学意义(P<0.05),其中以依达拉奉组和健脾补土方高剂量组最为显著;(4)与模型组比较,各药物干预组脑缺血皮质组织p-BAD、Bcl-2蛋白表达均明显增加,Caspase-3蛋白表达有所降低(P<0.05),其中依达拉奉组与健脾补土方高剂量组最为显著。结论健脾补土方可能通过上调p-BAD、Bcl-2、Claudin-5、Occludin蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,从而改善脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状及脑组织病理改变,进而促进缺血脑组织损伤修复。

TIM-3、CCN1及SII与胃癌患者预后的关系

目的分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)、结缔组织生长因子/富含半胱氨酸61/肾母细胞瘤-1(CCN1)及全身免疫炎症指数(SII)与胃癌患者预后的关系及其预测价值。方法选择于2018年1月至2022年1月收治于南方医科大学附属小榄医院的120例胃癌患者,所有患者治疗后随访1年,根据其是否复发或死亡分为预后良好组与预后不良组。单因素分析影响胃癌患者预后的相关因素,Logistic回归分析明确影响胃癌患者预后的危险因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析TIM-3、CCN1及SII对胃癌患者预后不良的预测价值。结果与预后良好组比较,预后不良组患者pTNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤最大径≥5 cm占比、TIM-3、CCN1阳性表达率及SII均明显更高(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,pTNM分期、肿瘤最大径、TIM-3、CCN1及SII是影响胃癌患者预后不良的危险因素(P<0.05);TIM-3、CCN1及SII预测胃癌患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.725、0.748、0.837,三者联合预测胃癌患者预后不良的AUC为0.916,明显大于三者单独预测(P<0.05)。结论pTNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤最大径≥5 cm、TIM-3、CCN1异常表达及SII异常上升可提示胃癌患者预后不良,且TIM-3、CCN1及SII联合检测对预测胃癌患者预后不良的价值较高。

血清sST2、Caspase-3、HSP70与ACMP患者病情和迟发性脑病的关系

目的探讨血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、热休克蛋白70(HSP70)与急性一氧化碳中毒(ACMP)患者病情和迟发性脑病(DEACMP)的关系。方法选取2020年10月至2022年1月盘锦市中心医院收治的110例ACMP患者作为ACMP组,根据一氧化碳中毒程度分为轻度组、中度组、重度组;另选取同期52例体检健康志愿者作为对照组。随访6个月后,根据ACMP患者是否发生DEACMP分为DEACMP组和非DEACMP组。收集ACMP患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sST2、Caspase-3、HSP70水平。采用多因素Logistic回归分析ACMP患者发生DEACMP的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Caspase-3、HSP70对ACMP患者发生DEACMP的诊断效能。结果ACMP组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平均高于对照组(P<0.05)。重度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于轻度组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、高血压、意识障碍时间>48 h、血CO暴露时间延长、血碳氧血红蛋白(COHb)饱和度升高及血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高是ACMP患者发生DEACMP的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、Caspase-3、HSP70联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC为0.913,大于sST2、Caspase-3、HSP70单项检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC(分别为0.783、0.788、0.785),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACMP患者血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高,与中毒程度和DEACMP发生有关,血清sST2、Caspase-3、HSP70水平联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的价值较高。

亚低温联合高压氧对重型颅脑损伤术后患者应激反应的改善作用及对血清半胱氨酸蛋白酶3、髓鞘碱性蛋白水平的影响

目的:观察亚低温联合高压氧对重型颅脑损伤患者术后应激反应的改善作用及对于血清中半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响,为重型颅脑损伤患者术后恢复提供临床治疗方案。方法:选取2018年6月—2019年6月民权县人民医院收治的94例重型颅脑损伤术后患者作为研究对象,随机数表法分为A、B组,每组各47例,A组给予亚低温治疗,B组给予亚低温联合高压氧治疗。比较治疗前后A、B两组患者的颅内压值(ICP)及日常生活能力;比较A、B两组患者的治疗效果;比较A、B两组患者治疗前后血清皮质醇(CORT)、肾上腺素(E)、Caspase-3和MBP水平。结果:治疗后,两组患者ICP水平降低,Barthel指数升高,差异有统计学意义(t=2.380、2.815,P<0.01);B组总有效率高于A组,差异有统计学意义(χ2=4.398,P<0.05)。治疗后两组患者CORT、E、Caspase-3、MBP水平均降低,B组低于A组,差异有统计学意义(t=2.349、4.239、7.855、6.353,P<0.05)。结论:重型颅脑损伤患者术后应用亚低温联合高压氧治疗可减轻应激反应,降低血清Caspase-3、MBP水平,改善恢复效果。

血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死患者脑血栓形成及临床应用价值

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死(ACI)患者脑血栓形成及临床应用价值。方法选取2022年1—12月收治的ACI 120例作为观察组,另选取同期健康体检者120例作为对照组。观察组予以机械取栓术治疗,依据是否获取血栓组织分为血栓组和非血栓组2个亚组。比较观察组和对照组血清NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平及血栓组和非血栓组临床资料,分析ACI患者脑血栓形成相关因素,探讨血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估ACI脑血栓形成和临床应用价值,分析ACI脑血栓形成者临床转归情况。结果血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平,观察组高于对照组,血栓组高于非血栓组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18均为ACI患者脑血栓形成的独立危险因素(P<0.01)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18联合评估ACI患者脑血栓形成的曲线下面积高于单独评估,且联合评估时净获益阈值范围大于单独检测(P<0.05)。血栓组出院时mRS评分4~6分所占比例(22/92,23.91%)高于非血栓组(1/28,3.57%)(P<0.05)。结论ACI患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平升高,其联合检测对脑血栓形成具有一定评估价值,且具有更高临床净获益。

eNOS、CAV1、PI3K/Akt信号通路在同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞迁移、增殖中的作用研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、小凹蛋白-1(CAV1)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在同型半胱氨酸(Hcy)促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移、增殖中的作用。方法 2016年1—6月采用组织贴块法分离SDF级SD大鼠胸主动脉中膜并传代培养VSMCs,取4~7代细胞用于实验。细胞分为4组,分别为空白对照组、100μmol/L Hcy组、200μmol/L Hcy组、500μmol/L Hcy组,使用相应浓度Hcy(0、100、200、500μmol/L)进行干预培养,采用Transwell法检测VSMCs迁移能力、MTT法检测VSMCs增殖情况[以光密度(OD)值表示],硝酸还原酶法测定VSMCs释放NO情况,Western blotting检测VSMCs e NOS、CAV1、PI3K、p-Akt蛋白表达情况。结果 VSMCs穿膜细胞数与Hcy浓度呈正相关(r=0.582,P=0.020)。OD值与Hcy浓度呈正相关(r=0.620,P=0.015)。100、200、500μmol/L Hcy组释放NO低于空白对照组(P<0.05)。NO(r=-0.479,P=0.028),e NOS蛋白表达水平(r=-0.544,P=0.033)与Hcy浓度呈负相关。NO与e NOS蛋白表达水平呈正相关(r=0.721,P=0.009)。100、200、500μmol/L Hcy组VSMCs CAV1、PI3K、p-Akt蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05)。CAV1蛋白表达水平(r=0.505,P=0.042),PI3K蛋白表达水平(r=0.428,P=0.030)、p-Akt蛋白表达水平(r=0.389,P=0.047)与Hcy浓度均呈正相关。结论 Hcy可能通过促进CAV1蛋白表达,抑制e NOS活性和NO释放,活化PI3K/Akt信号通路,从而诱导VSMCs的迁移和增殖,导致动脉粥样硬化。

Livin、Caspase-3、MTA1在结肠癌组织中的表达及相关性的研究

目的探讨Livin、Caspase-3及MTA1蛋白的表达与结肠癌的临床病理学特征的关系,以及它们三者之间的相互关系。方法采用免疫组织化学染色方法检测88例结肠癌组织中Livin,Caspase-3及MTA1的表达情况。结果(1)结肠癌组织中Livin的阳性表达率显著高于癌旁组织,且Livin的表达与结肠癌的组织分化程度及淋巴结转移程度显著相关。(2)结肠癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率显著高于癌旁组织,且Caspase-3蛋白的表达与结肠癌的组织分化程度显著相关。(3)结肠癌组织中MTA1的阳性表达率显著高于癌旁组织,且MTA1的表达与结肠癌的组织分化程度及淋巴结转移程度显著相关。(4)Caspase-3蛋白的表达又与Livin的表达呈显著负相关。结论(1)Livin在结肠癌组织中过表达,它可能是促进结肠癌发生的重要因素之一。(2)Caspase-3蛋白在结肠癌组织中表达被抑制而降低,且与Livin的表达呈负相关。因此,抑制Caspase-3蛋白的活性是Livin促进结肠癌发生的途径之一。(3)MTA1对结肠癌的组织分化及淋巴转移发挥重要作用。

电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制。选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9%氯化钠注射液。于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20min,每天1次,连续3天。假手术组和模型组仅每天抓空1次。分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达。结果假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase-3少量表达;模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达;电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P<0.01)。结论电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关。

癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中caspase3新底物的寻找

目的:在癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中寻找caspase 3新底物。方法:建立癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建含caspase 3的P12和P17两亚基的三杂交诱饵载体,检测其效果,并进行酵母三杂交筛库。结果:成功建立了癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了大鼠caspase 3基因的酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase 3与eIF2α之间的相互作用验证;以此三杂交诱饵载体筛库获得caspase 3的新底物PIAS1及MIZ1。结论:从癫癎模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase 3的新底物,为进一步研究caspase 3在癫癎发作引起海马神经损伤中的作用创造了条件。

重组干扰素联合抗生素对宫颈上皮内瘤变LEEP术后HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响

目的观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊对宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈电环切除术(LEEP)后人乳头状瘤病毒(HPV) DNA负荷量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)、生存素(survivin)蛋白表达的影响。方法选取2016年10月-2018年10月海南省人民医院妇科收治的CIN患者180例作为研究对象,CINⅠ级、CINⅡ级患者各90例,按照随机数字表法将CINⅠ级患者分为CINⅠA组、CINⅠB组、CINⅠC组,CINⅡ级患者分为CINⅡA组、CINⅡB组、CINⅡC组,各30例。CIN患者均接受LEEP治疗,CINⅠA组及CINⅡA组术后均口服抗生素头孢拉定胶囊,CINⅠB组及CINⅡB组术后均给予重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药,CINⅠC组及CINⅡC组给予口服头孢拉定胶囊联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药。观察各组患者临床疗效,术后6个月HPV转阴率,术前、术后6个月HPV-DNA负荷量及宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白阳性率。结果 CINⅠC组治愈率显著高于CINⅠA组、ⅠB组(χ2=4.216,P=0.040);CINⅡC组治愈率明显高于CINⅡA组、ⅡB组(χ2=6.585,P=0.037)。术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均明显少于术前(P均<0.001),且C组明显少于A组、B组(FCINⅠ=84.294,P<0.001;FCINⅡ=82.601,P<0.001)。术后6个月CINⅠC组患者HPV转阴率为93.3%,明显高于CINⅠA组的73.3%和CINⅠB组的70.0%(χ2=6.634,P=0.036),CINⅡC组为83.3%,显著高于CINⅡA组的60.0%和CINⅡB组的56.7%(χ2=6.104,P=0.047)。术后6个月各组患者Caspase-3、survivin蛋白阳性率均显著低于术前,且C组显著低于A组、B组(Caspase-3蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.079,P=0.024;χCINⅡ2=4.286,P=0.038。survivin蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.963,P<0.001;χCINⅡ2=4.295,P=0.040)。结论CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊效果明显优于单独应用,不仅可有效减少HPV-DNA负荷量,促进HPV转阴,还能明显降低Caspase-3、survivin蛋白阳性率。

海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究

目的阐明癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中caspase-3的作用机制。方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经元凋亡情况,以WesternBlot方法检测其海马神经元中eIF2α的表达变化。取模型鼠海马组织制备cDNA文库,以caspase-3的大小亚单位构建酵母三杂交诱饵载体,并进行酵母三杂交筛库实验。结果在癫痫发作后12h海马出现凋亡神经元,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72h。成功制备癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase3酵母三杂交诱饵载体,验证了caspase3与eIF2α之间的相互作用,并经筛库获得caspase3的新底物PIAS1。结论在癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中eIF2α被caspase3酶切。酵母三杂交技术可用于筛库寻找caspase3下游底物,从癫痫大鼠海马中获得caspase3的新底物PIAS1,为进一步研究在癫痫发作致神经元损伤中caspase3的作用建立了基础。