针药联合对阿尔兹海默病模型大鼠小脑皮质谷氨酸受体2及Caspase-3表达的影响

目的观察针药联合对阿尔兹海默病(AD)模型大鼠小脑皮质谷氨酸受体(GluR2)及天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)表达的影响,探讨小脑在AD发病机制中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(C组)、模型组(M组)、电针组(EA组)、天麻素组(Gas组)、针药联合组(EA+Gas组),每组6只。C组不作任何处理;M组大鼠给予双侧海马内微量注射5μL的Aβ1-42进行造模;EA组予以频率2 Hz、强度1mA的电针刺激,选取穴位“大椎”“百会”“足三里”,每日30 min,连续4周。Gas组予以腹腔注射Gas注射液(10 mg/kg),每天1次,连续4周;EA+Gas组同时予以电针和Gas治疗,连续4周。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆行为能力,Nissl染色和免疫组化方法观察各组大鼠小脑皮质细胞形态和数量,Western Blot法检测各组GluR2和Caspase-3蛋白的表达。结果M组小脑皮质中浦肯野层细胞数量减少(P<0.05),GluR2表达降低(P<0.05),Caspase-3表达增高(P<0.05);各治疗组较M组的细胞形态趋于正常,GluR2的表达增加(P<0.05),Caspase-3的表达降低(P<0.05),其中以EA+Gas组改变最为明显。结论电针、天麻素及针药联合均可通过调节GluR2和Caspase-3的表达水平进而改善AD模型大鼠学习记忆能力,其中针药联合效果最佳。

NLRC4、DPP3、Caspase-8在脓毒症心肌损伤诊断及预后评估中的价值

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白4(NLRC4)、二肽基肽酶Ⅲ(DPP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)对脓毒症心肌损伤的诊断和预后评估价值。方法:选取本院收治的133例脓毒症患者为研究对象,根据是否合并心肌损分为心肌损伤组(44例)和非心肌损伤组(89例),根据患者预后将心肌损伤患者分为存活组(28例)和死亡组(16例),比较不同组间NLRC4、DPP3、Caspase-8水平;并分析心肌损伤组NLRC4、DPP3、Caspase-8水平与氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平的相关性。ROC曲线分析NLRC4、DPP3、Caspase-8对心肌损伤的诊断和预后评估价值。结果:与非心肌损伤组比较,心肌损伤组患者NLRC4、DPP3、Caspase-8水平升高,与存活组比较,死亡组NLRC4、DPP3、Caspase-8水平升高(P<0.05),且NLRC4、DPP3、Caspase-8水平与NT-proBNP、cTnI、CK-MB水平均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,NLRC4、DPP3、Caspase-8单独及联合检测诊断心肌损伤的AUC均>0.8,评估患者预后的AUC均>0.7。结论:NLRC4、DPP3、Caspase-8与脓毒症心肌损伤密切相关,且三者在心肌损伤的诊断及预后评估中均具有一定临床参考价值。

Casp-8通过调控NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡减轻脓毒症引起的急性肺损伤

目的:分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Casp-8)对脓毒症引起的急性肺损伤(ALI)的作用及其相关分子机制。方法:对40只C57BL/6小鼠使用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症诱导的小鼠ALI模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组(CLP组)和CLP+Casp-8抑制剂组(CLP+Z-IETD-FMK组),每组20只。另取20只正常饲养的小鼠设为假手术组(sham组)。采用称质量法测定小鼠肺组织湿干质量比值(W/D),HE染色观察小鼠肺组织病理变化,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,qRT-PCR检测肺组织中Casp-8 mRNA表达,Western blotting检测小鼠肺组织中Casp-8蛋白、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与sham组比较,CLP组小鼠24 h存活率明显降低(P<0.05);小鼠肺组织充血水肿,肺泡结构严重破坏,肺间质内大量炎症细胞浸润;肺组织W/D,细胞凋亡率,BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18水平均显著升高(P<0.05);肺组织中Casp-8 mRNA和蛋白表达水平,NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、切割蛋白D(GSDMD)蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与CLP组比较,CLP+Z-IETD-FMK组小鼠存活率明显升高(P<0.05);小鼠肺泡结构破坏减轻,肺部炎症细胞浸润减少;肺组织W/D,细胞凋亡率,BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平均显著降低(P<0.05);肺组织中Casp-8 mRNA和蛋白表达水平,NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:Casp-8通过调控NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡减轻脓毒症引起的ALI。

血清可溶性细胞间黏附分子1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3水平对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛的预测价值

目的探讨血清可溶性细胞间黏附分子1(SICAM-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平在颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛(CVS)的预测价值。方法选取2016年1月—2019年12月山东省枣庄市立医院收治的203例颅内动脉瘤破裂蛛网膜下腔出血(SAH)患者,均接受开颅夹闭或介入栓塞治疗,术后4 d行数字减影血管造影,根据术后不同程度CVS将其分为重度CVS组(19例)、中度CVS组(44例)、轻度CVS组(23例)、无CVS组(117例)。检测术前和术后3、7 d血清Caspase-3、SICAM-1水平。比较四组颅内破裂动脉瘤术前后血清SICAM-1、Caspase-3水平,Pearson相关系数分析颅内破裂动脉瘤术后血清SICAM-1与Caspase-3水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,判断术后3 d血清SICAM-1、Caspase-3对颅内破裂动脉瘤术后CVS的预测价值。结果四组术后3、7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均高于术前,术后7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均低于术后3 d(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,颅内破裂动脉瘤术后3、7 d血清SICAM-1与Caspase-3水平呈正相关(r=0.493、0.585,P<0.05)。ROC曲线显示,术后3 d血清SICAM-1+Caspase-3诊断颅内破裂动脉瘤术后CVS的曲线下面积、敏感度、特异性均高于SICAM-1和Caspase-3单独检测。结论颅内破裂动脉瘤术后CVS患者血清SICAM-1、Caspase-3水平明显提升,联合检测可有效预测CVS发生。

Smac蛋白促进肿瘤细胞凋亡作用的研究进展

细胞凋亡失控是肿瘤的一个标志,与多种恶性肿瘤的发生和发展相关,肿瘤细胞内肿瘤凋亡抑制蛋白(IAP)家族的表达上调正是肿瘤细胞产生辐射抗性和耐药性的基础。Smac来源于线粒体,能特异地作用于IAP家族的XIAP,解除其凋亡抑制作用,从而激活半胱氨酸蛋白酶,发挥其促细胞凋亡作用,对肿瘤细胞有辐射和化疗増敏作用,可能成为肿瘤治疗的新方法和新途径,是目前相关领域的研究热点。

脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义

目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。

细胞凋亡抑制在子宫肌瘤发病机制中的意义

目的通过比较子宫肌瘤组织与瘤旁正常子宫肌肉组织的细胞凋亡情况、凋亡相关蛋白的表达或活化情况,探讨子宫肌瘤的发生、发展与细胞凋亡的关系。方法收集20例子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织、子宫肌瘤组织为研究组,同源正常子宫平滑肌组织为对照组。采用DNA片段化分析子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织染色体DNA,采用Western Blot分析子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达及Bcl-2/Bax比值,分析含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活化情况。结果研究组有5例出现DNA ladder条带,对照组有15例出现DNA ladder条带。研究组Bcl-2表达量为(0. 823±0. 102),显著高于对照组的(0. 348±0. 067);研究组Bax表达量为(0. 185±0. 073),显著低于对照组的(0. 429±0. 088);研究组Bcl-2/Bax比值为(4. 450±0. 760),显著高于对照组的(0. 810±0. 370)(P <0. 05)。与对照组相比,研究组中Caspase-3及Caspase-9的活化明显较少。结论子宫肌瘤的发生发展可能与细胞凋亡抑制有关,这一过程可能涉及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况、Bcl-2/Bax比值变化以及Caspase-3及Caspase-9的活化。

瑞香素通过含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶通路对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨瑞香素(DAP)通过含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)通路对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与凋亡的影响。方法体外培养CIA-FLS,选取对数生长期细胞以不同浓度DAP(0、5、10、20、40、80 mg/L)作用48 h后,倒置显微镜下观察细胞生长状态,并通过人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)检测CIA-FLS细胞活力;采用DAP(40 mg/L)作用48 h后,通过Real-time PCR检测CIA-FLS中caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA相对表达量;采用特异性不可逆的caspase抑制剂(Casp3-In、Casp8-In、Casp9-In、Pancasp-In)以不同浓度、不同时间预处理CIA-FLS后,通过CCK-8检测DAP(40 mg/L)对CIA-FLS细胞活力的影响;采用不同caspase抑制剂预处理CIA-FLS 2 h后,再与DAP(40 mg/L)共处理48 h,通过Hoechst 33258荧光染色观察CIA-FLS凋亡形态以及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测CIA-FLS凋亡率。结果经DAP作用后CIA-FLS细胞活力下降,增殖明显受抑,并与DAP作用浓度呈剂量依赖性;经DAP作用后CIA-FLS中caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA相对表达量分别为(3.07±0.43)、(1.67±0.09)、(2.35±0.20),与对照组相比明显增加(P<0.05);各caspase抑制剂预处理均在不同程度上减弱DAP抑制CIA-FLS增殖的效应,但Casp8-In不如Casp3-In、Casp9-In、Pancasp-In效果明显;荧光染色显示,经DAP作用后CIA-FLS细胞核形状大小不一,细胞核固缩、碎裂明显,出现较多浓染致密的颗粒状、块状荧光,Casp3-In、Casp9-In、Pancasp-In预处理组,呈均匀蓝色荧光的正常细胞核较DAP组明显增多,Casp8-In预处理组与DAP组差异不明显;流式结果显示,经DAP作用后CIA-FLS凋亡率为(34.80±3.90)%,与对照组相比明显升高(P<0.05),Casp3-In、Casp8-In、Casp9-In、Pancasp-In预处理组CIA-FLS凋亡率分别为(18.09±2.50)%、(29.46±2.16)%、(20.41±3.53)%、(10.17±1.91)%,均明显低于DAP组(P<0.05),但Casp8-In预处理组CIA-FLS凋亡率明显高于Casp3-In、Casp9-In、Pancasp-In预处理组(P<0.05)。结论DAP可呈剂量依赖性地抑制CIA-FLS增殖,并通过caspase依赖的途径诱导CIA-FLS发生凋亡,可能与线粒体凋亡途径密切相关。

法舒地尔联合依达拉奉对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者血清SICAM-1及Caspase-3的影响

目的探讨法舒地尔联合依达拉奉对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者血清可溶性细胞间黏附分子-1(SICAM-1)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的影响。方法选择2015年5月~2017年3月收治的蛛网膜下腔出血患者95例,经脑血管造影确诊为动脉瘤,以随机数表法分为观察组50例和对照组45例,对照组使用依达拉奉治疗,观察组在对照组的基础上使用法舒地尔进行治疗。比较两组的术后血管痉挛及迟发脑梗死发生率、治疗前后血清SICAM-1、Caspase-3水平、格拉斯哥昏迷评分(Glasgow Coma Scale,GCS)、巴氏(Barthel)指数评分、神经功能缺损(NFI)评分、大脑中动脉(MCA)平均血流速度及不良反应发生情况。结果观察组后血管痉挛及迟发脑梗死发生率均显著低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者血清SICAM-1、Caspase-3水平无显著差异(P>0.05);治疗后,两组各血清SICAM-1、Caspase-3水平较治疗前均显著下降(P<0.05),且观察组血清SICAM-1、Caspase-3水平均明显低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者MCA平均血流速度无显著差异(P>0.05);治疗后,两组MCA平均血流速度较治疗前均显著升高(P<0.05),且观察组MCA平均血流速度均明显高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者GCS评分、Barthel指数评分及NFI评分无显著差异(P>0.05);治疗后,两组GCS评分、Barthel指数评分较治疗前均显著升高,NFI评分显著降低(P<0.05),且观察组GCS评分、Brthel指数评分均明显高于对照组,NFI评分显著低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应总发生率为12.00%,显著低于对照组的33.33%(P<0.05)。结论在颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者中使用法舒地尔联合依达拉奉效果显著,可有效改善患者的血清血清SICAM-1、Caspase-3水平,值得推广与运用。

基于NLRP3/caspase-1研究电针刺激对脑卒中大鼠小胶质细胞形态转换及神经元凋亡的影响

目的探究不同电针刺激方法对脑卒中大鼠小胶质细胞形态、神经元凋亡的影响。方法Longa线栓法改良建立脑卒中模型,将建模成功的48只大鼠随机分为4组:模型组、阳陵泉+配穴组、关元组、照海+申脉组,每组12只;另12只设置假手术组。阳陵泉+配穴组、关元组、照海+申脉组分别于相应穴位处针灸取穴电针刺激,7 d为一个疗程,电针刺激两个疗程。观察不同电针刺激对脑卒中大鼠行为学,小胶质细胞、神经元形态,神经元凋亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白的影响。结果形态学变化:模型组小胶质细胞突起明显,激活数量增多;神经元形状不规则、染色较浅。阳陵泉+配穴组、关元组、照海+申脉组小胶质细胞形态恢复,激活状态减少;神经元形态有所改善。与假手术组相比,模型组Longa评分、Iba1/ED-1、Tunel阳性细胞数、脑组织中NLRP3、caspase-1、pro-caspase-1蛋白水平升高(P<0.05);尼氏小体数量减少(P<0.05)。与模型组相比,阳陵泉+配穴组、关元组、照海+申脉组Longa评分、Iba1/ED-1、Tunel阳性细胞数、脑组织中NLRP3、caspase-1、pro-caspase-1蛋白水平降低(P<0.05);尼氏小体数量升高(P<0.05)。结论电针分别刺激阳陵泉+配穴、关元、照海+申脉穴位处,均可使脑卒中大鼠小胶质细胞突起减少、凋亡神经元数量降低,且可能是通过抑制NLRP3/caspase-1通路实现的。

宫颈癌术后感染状况及其与Caspase-1、IL-1β表达情况的相关性

目的探讨宫颈癌术后感染状况及其与半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的相关性。方法选取宫颈癌手术患者共297例,观察术后感染率,并对感染患者感染病原菌分布检测。同时对所有患者术后组织样本内Caspase-1、IL-1β表达情况进行检测。结果手术后有15%的患者出现术后感染,在术后感染患者病原菌分布检测中可以看出,革兰阴性菌占感染病原菌的主要部分(P<0.05)。同时对所有患者组织样本的Caspase-1、IL-1β表达情况进行比较发现,术后感染组患者血清内的Caspase-1、IL-1β阳性表达情况明显高于未感染组。结论宫颈癌术后感染主要为革兰阴性菌所致,因此术后应进行必要的抗菌处置。同时,术后积极检测患者血清Caspase-1、IL-1β表达情况,可以及时预防及治疗术后感染的发生。

益气养阴活血方改善2型糖尿病大鼠胰岛分泌功能的作用机制

目的:探讨益气养阴活血方改善2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛分泌功能的作用机制。方法:选取无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠66只,随机分为对照组11只及造模组55只。造模组用高糖高脂饲料喂养联合链脲佐菌素建立T2DM模型,对照组给予标准颗粒饲料喂养及等体积0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。造模成功的大鼠分为模型组、益气养阴活血方低、中、高剂量组及西药组,每组11只。模型组及对照组给予蒸馏水,益气养阴活血方低、中、高剂量组给予0.43 g/mL、0.86 g/mL、1.72 g/mL益气养阴活血方;西药组予以20 mg/mL二甲双胍悬液;各组灌胃剂量10 mL/kg,1次/d,连续12周。检测比较空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)、胰岛细胞凋亡指数、胰岛微小核糖核酸-375(miR-375)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与模型组比较,各组FBG水平、胰岛细胞凋亡指数、胰岛组织miR-375及Caspase-3表达水平较低,FINS、HOMA-β水平及胰岛组织Bcl-2表达水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05),且益气养阴活血方组呈一定量效关系。结论:益气养阴活血方能剂量依赖性的降低T2DM大鼠血糖,改善胰岛分泌功能,抑制胰岛细胞凋亡,其作用机制可能与抑制胰岛组织miR-375表达,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3表达有关。

补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2及切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其抑制骨质破坏的作用机制。方法:将30只BALB/c雌性裸鼠随机分成空白组6只、造模组24只。将乳腺癌细胞株4T1经裸鼠右下肢胫骨注射构建乳腺癌骨转移模型,将成膜裸鼠随机分为模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组,每组6只。补肾活血汤组予以补肾活血汤中药灌胃36.67 g·kg^(-1),每日1次,唑来膦酸组予以皮下注射100μg·kg^(-1),每周2次,联合用药组给予相同剂量补肾活血汤组灌胃联合唑来膦酸皮下注射,正常组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃,连续14 d,次日脊柱脱臼法处死,观察裸鼠一般情况及体质量变化,截取每组裸鼠右下肢,称重,X射线扫描及苏木素-伊红(HE)染色观察裸鼠骨组织形态学变化、原位末端标记法(TUNEL)检测裸鼠骨组织凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸鼠骨组织中Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组第5~15天裸鼠体质量显著减轻(P<0.01),右下肢组织质量显著增加(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组第10~15天裸鼠体质量显著增加(P<0.01),右下肢组织质量显著降低(P<0.01)。HE染色显示与空白组比较,模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠肿瘤细胞异型性明显,核染色深,骨转移明确。X射线扫描示与空白组比较,模型组裸鼠右下肢出现明显溶骨性破坏,胫骨近段、膝关节完整结构基本丧失,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组右下肢溶骨性病变明显减少,部分结构完整,对骨质破坏具有抑制作用。TUNEL染色显示与空白组比较,模型组骨转移瘤细胞凋亡率降低,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠骨转移瘤中细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。Western blot显示,与空白组比较,模型组骨转移瘤中Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组骨转移瘤Bax蛋白含量明显升高(P<0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾活血汤组对乳腺癌骨转移模型裸鼠具有抑制骨质破坏作用,其机制可能和上调Bax,下调Bcl-2,激活cleaved Caspase-3诱导细胞凋亡相关。

金香丹抑制NLRP3/IL-1β/Caspase-1信号通路缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:观察金香丹预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型心肌组织NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响,探讨金香丹对MIRI的保护作用及其机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型组,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组,每组10只。造模前7 d开始,金香丹组给予金香丹片高、低剂量(0.72,0.18 g·kg^(-1))灌胃;假手术组和模型组每天给予等体积生理盐水灌胃;地奥心血康组给予地奥心血康(1.29 g·kg^(-1))灌胃。末次灌胃12 h后,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。心电图检测ST段升高评价模型;比色法检测心脏组织肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织损伤情况,DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织NLRP3,Caspase-1和IL-1β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌组织中NLRP3,Caspase-1和IL-1βmRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组心电图ST段显著升高(P<0.01),心肌组织CK和LDH活性显著增加(P<0.01),心肌组织凋亡细胞显著增加(P<0.01),NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组心电图ST明显降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织CK和LDH活性明显降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡明显改善(P<0.05,P<0.01),降低NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);与地奥心血康组比较,金香丹低剂量组心电图ST段明显升高(P<0.05),金香丹高剂量组明显降低(P<0.05),金香丹高、低剂量组和地奥心血康组心肌组织绿色荧光强度明显降低(P<0.05,P<0.01),金香丹高剂量NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。结论:金香丹可以降低心肌缺血再灌注损伤,其可能机制为抑制炎症小体NLRP3,降低IL-1β表达,抑制心肌细胞凋亡,缓解心肌缺血再灌注损伤。

不同瘢痕类型中Caspase-3、Caspase-8及PCNA的表达差异分析

目的探究正常皮肤、浅表性瘢痕、瘢痕疙瘩组织中细胞凋亡关键因子Caspase-3、Caspase-8的表达水平,并通过增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达水平推测组织细胞增殖情况。方法随机选取2017年1~6月就诊的胸部瘢痕患者共18例,按胸部瘢痕性质分为正常皮肤组(A组)、浅表性瘢痕组(B组)和瘢痕疙瘩组(C组),每组各6例。通过各组HE染色切片观察其组织形态,并通过免疫组织化学染色和Western blot技术对3组Caspase-3、Caspase-8以及PCNA的表达情况进行分析。结果 3组经HE染色后可见胶原含量依次增多,排列逐渐紧密,但C组中Caspase-3(1.03±0.21)、Caspase-8(0.95±0.17)及PCNA(3.93±1.02)的表达水平较其他2组显著升高。结论瘢痕疙瘩组织相对于正常皮肤和浅表性瘢痕可能具有较高的细胞凋亡水平和细胞增殖水平。

补肾益肺消癥方对TGF-β1诱导的A549细胞凋亡及Caspase12信号通路关键蛋白表达的影响

目的:观察补肾益肺消癥方对TGF-β1诱导A549细胞凋亡的影响及其对半胱天冬氨酸蛋白12(cysteme aspartate specific protease 12,Caspase12)信号通路中关键蛋白表达的影响。方法:通过CCK-8筛选两种浓度的中药冻干粉干预TGF-β1诱导的A549细胞,以TGF-β1抑制剂为阳性对照,流式细胞仪检测细胞凋亡,western-blot检测Caspase12信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:模型组细胞凋亡率较正常组显著增高(P<0.01),对照组及中药组细胞凋亡率较模型组显著降低(P<0.01);模型组细胞中Caspase12通路相关蛋白表达较正常组显著增高(P<0.05或P<0.01);对照组及中药组Caspase12通路相关蛋白表达较模型组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾益肺消癥方可通过缓解Ⅱ型肺泡上皮细胞中持续的内质网应激及其诱导的Caspase12凋亡信号通路中关键蛋白的表达,减少Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡,延缓肺纤维化的病理进程。

宫颈癌患者外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平对术后感染的预测ROC曲线分析

目的探究宫颈癌患者外周血半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFR)、辅助性T细胞(Th)1/Th2水平对术后感染的预测价值。方法选取2016年5月—2021年6月本院128例宫颈癌手术患者,根据术后是否发生感染分为感染组(n=40)与非感染组(n=88)。比较2组患者临床资料、手术前后外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平,分析外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平与临床分期的关系,绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平对术后感染的预测价值,比较不同预后患者外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平,分析外周血Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平与预后的关系,比较不同Caspase-1、STNFR、Th1/Th2水平宫颈癌患者生存情况。结果感染组患者临床分期Ⅰ期比例低于非感染组患者,差异有统计学意义(P<0.05);感染组患者术后外周血Caspase-1、STNFRⅠ、STNFRⅡ水平高于非感染组,Th1/Th2水平低于非感染组患者,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,宫颈癌患者术后外周血Caspase-1、STNFRⅠ、STNFRⅡ、Th1/Th2,四者联合评估术后感染的AUC为0.948,最佳敏感度为95.00%,特异度为81.82%,较四者单独预测价值高;logistic回归分析显示,Caspase-1、STNFRⅠ、STNFRⅡ、Th1/Th2水平均与宫颈癌患者预后独立相关(P<0.05);宫颈癌术后Caspase-1、STNFRⅠ、STNFRⅡ低水平患者住院28 d累积生存率高于高水平患者,Th1/Th2低水平患者生存率低于高水平患者(P<0.05)。结论宫颈癌术后感染外周血Caspase-1、STNFRⅠ、STNFRⅡ水平升高,Th1/Th2水平下降,临床检测其水平,有助于术后感染早期诊断及预后预测。