囊虫病诊断用抗原编码cDNA的分子克隆

目的 :克隆与分析囊虫病诊断用抗原及其编码基因。方法 :采用基因重组技术 ,构建来源于猪囊尾蚴 m RNA的 c DNA文库。以囊虫病患者、囊虫病病猪的血清为探针从 c DNA文库中筛选出目的克隆。结果 :获得人、猪共同抗原 2个 (分子量分别为 2 8k Da和 18k Da) ,人特异性抗原和猪特异性抗原各 1个 (分子量为 34 k Da、 14k Da)。这些抗原的编码克隆分别命名为λc C1、λc C2、λc H1及 λc P1。c C1c DNA含有编码 2 8k Da的人、猪共同抗原的完整基因 ,全长 10 70 bp,起始密码 ( ATG)从自 2 2 bp,终止密码 ( TGA)结于 74 7bp,长为 74 7bp的开放阅读框架编码由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,其理论推导分子量为 2 7.36k Da。结论 :以 c C1等融合蛋白为诊断用抗原 ,具有高度的特异性和较理想的敏感性。

猪囊尾蚴cDNA文库的构建

从猪囊尾蚴内提取 m RNA经反转录合成 c DNA,应用定向克隆的方法 ,将合成的 c DNA片段重组到噬菌体载体 Uni- ZAP XR的 Eco R 和 Xho 双酶切位点之间。5 μg poly(A) + RNA所构建的表达文库容量为 0 .98×10 6重组子。经含有 IPTG和 X- gal的颜色选择平皿测定 ,提示重组率达 86 %。随机取 6个噬菌斑做 PCR,检查插入片断的长度在 10 0～ 2 0 2 0

猪囊尾蚴一种蛋白抗原的cDNA分子克隆

目的 从猪囊尾蚴 c DNA文库中克隆某种编码蛋白抗原的基因。方法 用脑囊尾蚴病人血清筛选猪囊尾蚴 c DNA文库 ,获得阳性克隆后 ,经 PCR技术扩增噬菌体载体中插入的 c DNA片段 ,并将其亚克隆入 p U C18质粒载体中 ,用双脱氧核苷酸末端终止法测定插入片段的核苷酸序列。测序后与 Gen Bank中的核苷酸序列进行同源性分析。结果 经 3次筛选 ,从 c DNA文库中克隆出一个阳性克隆 ,测序后其长度为 5 4 6 bp,含有一个开放读码框 ,编码 15 8个氨基酸。同源序列分析结果表明此基因片段与编码猪囊尾蚴的一种免疫原性蛋白基因 (NC- 9)同源性高达 99%。

一种新的猪囊尾蚴蛋白的cDNA分子筛选、序列分析和克隆

目的免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,为猪囊尾蚴病临床免疫学诊断提供新的候选抗原分子。方法利用脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,测序后与生物信息网站进行分析,并将一个类似血吸虫核糖体蛋白的基因克隆入PMD-18T载体。结果从cDNA文库中筛选出1个编号为5H的基因,长度是528bp;对其编码的氨基酸序列的分析显示其与日本血吸虫的L18a核糖体蛋白具有高度同源性。结论克隆了猪囊尾蚴的未知核糖体蛋白基因。

猪囊尾蚴一种蛋白抗原基因的分子克隆

目的 从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出编码某种蛋白抗原的基因。 方法 提取猪囊尾蚴mRNA ,经反转录合成cDNA ,构建cDNA文库。以兔抗猪囊尾蚴多克隆抗体筛选cDNA文库 ,得到阳性克隆后 ,将其亚克隆到pBlue scriptSK质粒中 ,以载体臂上的通用引物采用双脱氧末端终止法测定插入片段的核苷酸序列 ,GENETYX软件分析核苷酸序列编码的氨基酸序列 ,在GenBank中进行核苷酸序列同源性检索。 结果与结论 经过 3次筛选 ,从cDNA文库中筛选出一个长度为 13 2 0bp的基因片段。此克隆的开放阅读框为 12 60bp ,编码 42 0个氨基酸 ,含有两个糖基结合位点。与GenBank中的基因进行同源性分析 ,其部分核苷酸序列与秀丽隐杆线虫 (Caenorhabditiselegans)红细胞膜内蛋白和恶性疟原虫 (Plasmodiumfalciparum )