NF-κB和Cyto-C在紫杉醇抗肿瘤机制中的作用

核因子 (NF) κB是Rel转换因子家族的成员 ,正常情况下与细胞内抑制剂IκB α形成复合物 ,细胞受刺激后NF κB与IκB α复合物解离 ,NF κB转移到细胞内 ,以调节基因的转录诱导细胞凋亡。细胞色素 C是由于线粒体呼吸频率增加 ,通透性转移孔 (PTP)开放 ,由线粒体膜释放出来 ,然后细胞色素C激活caspase的连锁反应 ,导致细胞凋亡。

锰锌联合作用下大鼠生精细胞caspase-3和cyto-c的表达变化

目的研究锰和锌对生精细胞caspase-3、cyto-c表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只随机分为10组,空白对照组,ZnCl2对照组,15 mg.kg-1和30 mg.kg-1MnCl2组;15 mg.kg-1MnCl2+ZnCl2组和30 mg.kg-1MnCl2+ZnCl2组。锰组分别给予MnCl2.4H2O腹腔注射4周和6周;ZnCl2对照组给予100 mg Zn2+.kg-1饲料口服;锰加锌组分别染锰4周后再给予含锌饲料口服。各组大鼠分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化法检测睾丸caspase-3、cyto-c表达。结果与空白组比较,各锰组和锰加锌组caspase-3阳性细胞率均升高,cyto-c阳性细胞率均降低(P<0.01)。与同剂量组比较,染锰6周caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别较4周升高和降低(P<0.01)。与同时间组比较,30 mg.kg-1组caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别较15 mg.kg-1组升高和降低(P<0.01)。与同剂量锰组比较,锰加锌组caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别降低和升高。各组caspase-3和cyto-c阳性细胞率呈负相关(r=-0.817,P<0.01)。结论 15 mg.kg-1和30 mg.kg-1氯化锰均可诱发大鼠生精细胞caspase-3和cyto-c表达,并随染锰时间和剂量的增加而分别增加和降低,存在一定的时间-效应和剂量-效应关系,摄入含锌100 mg.kg-1的食物可抑制锰所诱发的caspase-3表达。

NaAsO_2对L-02肝细胞Cyto-c释放和Caspase-3表达的影响

目的观察NaAsO2在诱导人胚肝细胞株(L-02)细胞凋亡过程中对细胞色素-C(Cytochrome C;Cyto-c)释放和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法分别以0(对照组)、50、100和150μmol/L的NaAsO2染毒L-02肝细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cyto-c和Caspase-3在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡过程中的变化。结果流式细胞术检测到0、50、100和150μmol/L浓度NaAsO2组细胞凋亡率为6.3%±0.40%、12.1%±0.89%、20.15%±0.50%和28.23%±4.77%。与对照组相比细胞凋亡率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot法检测Cyto-c的释放量分别是1.10%±0.35%,1.73%±0.73%、1.83%±0.67%和2.43%±0.74%,随染砷剂量的增加而增加,仅高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05);Caspase-3分别为0.41%±0.45%,0.74%±0.14%、0.76%±0.04%和1.02%±0.18%,随染砷剂量的增加而增加,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论在该试验条件下,NaAsO2可诱导L-02肝细胞发生凋亡,Cyto-c和Caspase-3在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。

活血通络方对大鼠脑缺血再灌注后Cyto-C和caspase表达的干预

目的：探讨活血通络方通过线粒体途径抗大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡机制。方法：将大鼠随机分成假手术组、模型组、活血通络组，大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48h不同时间点进行神经功能评分，并用原位末端标记法检测凋亡神经元，用免疫组化法检测Cyto-C、caspase-9、caspase-3阳性细胞数。结果：活血通络方对再灌注各时间点神经功能评分有不同程度的改善，能减少神经元凋亡指数和Cyto—C、caspase一9、caspase-3的表达（P〈0．01-4）．05）。结论：Cyto-C、caspase．9和caspase-3在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用，活血通络方能减轻缺血再灌注所致神经元凋亡，保护神经功能，其机理与抑制细胞凋亡线粒体通路有关。

半边旗提取物5F诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡的机制

半边旗（Pteris Semipinnata L）是凤尾蕨属植物，生长于我国南方。民间常用于治疗疗疮、毒蛇咬伤、跌打损伤、疟疾等。广东医学院梁念慈教授在九十年代初筛选二十多种中草药的抗癌作用时，发现半边旗的水提液或醇提液显示对多种培养的癌细胞均有较强细胞毒作用。其中，从半边旗中分离出的具有抗癌活性的二萜类化合物5F（ent-1lct-hydroxy-15-oxo—ent-kaur-16-en-19-oic-acid）可抑制多种培养的癌细胞的增殖。本研究通过酶联免疫技术、流式细胞技术、免疫双染技术等多途径显示出5F可通过诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡来抑制肿瘤细胞的生长，分析了该凋亡与p53、NFKB、IKB、HIF、VEGF、Bax、cyto-c及AIF等细胞因子表达变化的关系，并检测了癌细胞内活性氧浓度的变化与5F及凋亡的相关性。

胡黄连苷Ⅱ通过抑制cyto C/caspase-9/caspase-3通路发挥神经保护作用

目的研究胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血/再灌注过程中cyto C/caspase-9/caspase-3信号通路的影响及其神经保护作用机制。方法环孢素(Cs A)和苍术苷(Atr)分别作为cyto C阳性对照和阴性对照,改良Longa法制备缺血2 h再灌注24 h大鼠脑缺血/再灌注(I/R)模型。再灌注24 h后,TTC染色观察脑梗死体积;免疫组织化学和Western blot检测cyto C、caspase-9、caspase-3表达水平。结果模型组大鼠脑缺血/再灌注后TTC显示染色脑梗死体积明显增加;免疫组织化学和Western blot显示cyto C、caspase-9、caspase-3表达水平较假手术组明显增多(P<0.05)。治疗组大鼠TTC显示脑梗死体积缩小;免疫组化和Western blot显示cyto C、caspase-9、caspase-3表达水平与模型组相比明显降低(P<0.05)。与Atr组相比,Atr+胡黄连苷Ⅱ组大鼠脑梗死体积缩小,免疫组化和Western blot显示cyto C、caspase-9、caspase-3表达水平减弱(P<0.05)。结论胡黄连苷II抑制缺血/再灌注损伤大脑神经凋亡的机制可能与下调cyto C/caspase-9/caspase-3信号通路蛋白有关。

白桦脂酸对HeLa细胞的抑制作用及其机制研究

背景与目的:白桦脂酸(betulinic acid)是一类白桦树皮中提取的天然五环三萜类化合物,具有广泛的药理活性,有研究表明白桦脂酸能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料。本研究旨在探讨白桦脂酸体外对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白桦脂酸对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测白桦脂酸处理HeLa细胞后发生凋亡的形态变化;采用流式细胞术(flow cetemotry,FCM)检测白桦脂酸处理HeLa细胞后诱导凋亡作用及凋亡率;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测caspase-3、细胞色素C(Cyto C)等凋亡相关蛋白的表达。结果:MTT分析表明,白桦脂酸抑制HeLa细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01),其24、48和72 h的半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)分别为20.36、15.45和12.02μg/mL;白桦脂酸处理HeLa细胞后,Hoechst33258染色出现典型的凋亡特征,且流式细胞术检测Annexin-Ⅴ/PI双染出现早期凋亡细胞;Westernblot检测结果显示经白桦脂酸处理后HeLa细胞的caspase-3、Cyto C蛋白表达均上调。结论:白桦脂酸可显著抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,并可能通过上调caspase-3、Cyto C蛋白的表达诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡。

速效救心丸干预心肌缺血/再灌注大鼠线粒体通透性转换孔及心肌细胞凋亡

目的观察速效救心丸(川芎、冰片)对心肌缺血/再灌注大鼠线粒体通透性转换孔及心肌细胞凋亡的影响。方法将55只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,速效救心丸低、中、高剂量组(每组11只)。药物组给予对应剂量的速效救心丸混悬液灌胃,空白组与模型组给予同等容积的双蒸水灌胃,连续灌胃7 d结束后结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血/再灌注大鼠模型。观察速效救心丸干预后心肌线粒体通透性转换孔(MPTP)、细胞色素C的表达情况,并采用TUNEL检测心肌细胞凋亡,HE染色观察大鼠心肌细胞形态。结果与空白组比较,模型组MPTP开放程度增加,细胞色素C水平升高(P<0.05),TUNEL的阳性反应面积率显著上升(P<0.01)。速效救心丸高、中、低剂量组的TUNEL阳性反应面积率等较模型组降低(P<0.01),但药物组间比较无统计学差异。速效救心丸高剂量组的MPTP开放程度(P<0.05)、细胞色素C水平(P<0.01)较模型组降低。结论速效救心丸对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制MPTP的开放有关。

细胞色素C及相关细胞凋亡蛋白、基因在原发性肝癌组织表达的临床意义

目的观察外源性凋亡通路中Caspase8和Bid及内源性凋亡通路中Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)和Cas-pase9在50例原发性肝细胞癌(肝癌组)及30例正常肝组织(对照组)中的表达,并分析其与病理分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学方法检测Bax表达,应用核酸原位分子杂交方法检测Caspase8、Bid、Bcl-2、Cyt-C和Caspase9表达。结果 Caspase8表达强度与对照组比较呈升高趋势(P<0.05),阳性表达率组间差异未见统计学意义(P>0.05)。Bid阳性表达率与对照组比较呈下降趋势(P<0.01),表达强度两组间差异未见统计学意义(P>0.05)。Bcl-2阳性表达率和表达强度较对照组均明显下降(P<0.01),Bax阳性表达率和表达强度较对照组均下降(P<0.05和P<0.01)。Cyt-C和Caspase9的阳性表达率和表达强度两组间比较差异均未见统计学意义(P>0.05)。高、中分化肝癌组Cyt-C阳性表达率均明显高于低分化肝癌组(P<0.05和P<0.01),但其与病理分级和淋巴结转移未见相关性(P>0.05)。Caspase8、Bid、Bcl-2、Bax和Caspase9在不同病理分级、肿瘤分化程度和淋巴结转移组中表达差异均未见统计学意义(P>0.05)。结论在肝癌发生发展过程中,早期外源性凋亡通路发挥促凋亡活性,而随着肿瘤分化程度的降低,内源性凋亡通路发挥抗凋亡活性,且Cyt-C的表达调节应该是一晚期事件。

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)和Cyt C的影响

目的:探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制.方法:应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,透射电镜观察线粒体的变化:应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)的改变。荧光发光法检测细胞色素(cytochrome C,Cyt C)含量,Bcl-2蛋白表达和流式细胞仪测定caspase-3活性.结果:黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,线粒体结构出现明显改变;肝癌细胞线粒体膜电位降低,6h、24h、48h分别为85.49±2.17、82.59±2.18、28.45±2.39;细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放增加,Bcl-2蛋白表达下降和caspase-3活性增加.在6h、24h、48 h时细胞线粒体膜电位,细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放分别为(6h:85.49±2.17、19.56±2.09、35.36±3.21:24h:82.59±2.18、14.76±1.03、44.57±5.56:48h:28.45±2.39、88.79±4.32、78.63±7.65).结论:线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进caspase-3活性增加,使细胞内Ca^(2+)增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,降低线粒体跨膜电位,促进Cyt C的释放.

Effects of experimental varicocele on mitochondria calcium and cytochrome C of epididymis in adolescent rats

Aim: To investigate the effect of experimental varicocele on mitochondrial calcium and cytochrome C of the epididymal cells in adolescent rats. Methods: Forty male adult Wistar rats were divided into two groups randomly: the varicocele group (VG) and the sham operated group (SOG). Varicocele was produced by partial ligation of the left renal vein. Bilateral epididymides were removed after ten weeks. The mitochondrial calcium and cytochrome C levels of the epididymal cells were determined. Results: The mi-tochondrial calcium was decreased (P<0.01) while the cytochrome C increased (P<0.05) markedly in the experimental group compared with the controls. Conclusion: Varicocele-induced calcium dyshomeostasis and mitochondrial damage of the epididymal cells may play an important role in causing subfertility.

κ-硒化角叉菜胶对大鼠红细胞膜流动性与封闭度的影响(英文)

通过测定大鼠红细胞膜荧光偏振度P和N A DH-细胞色素c氧化还原酶的变化,研究kappa-硒化卡拉胶对红细胞膜流动性和封闭度的影响。结果表明,kappa-硒化卡拉胶140mg·kg^(-1)·d^(-1)×30 d可显著降低大鼠红细胞膜荧光偏振度,即可显著提高细胞膜流动性(P<0.05),ig 140及70 mg·kg^(-1)·g^(-1)×30d可显著提高大鼠红细胞膜封闭度(P<0.05)。