应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的:检测乳腺癌患者外周血中CEAmRNA和CK-19mRNA的表达,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法:65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CEAmRNA和CK-19mRNA的检测。结果:以巢式RT-PCR终产物出现131bp为CEAmRNA阳性,460bp为CK-19mRNA阳性。65例乳腺癌患者CEAmRNA和CK-19mRNA分别有26例和24例表达,总阳性率分别为40.0%和36.92%。37例乳腺良性疾病者无1例CEAmRNA和CK-19mRNA表达,两组有统计学意义(P<0.001)。结论:RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移。

用荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌病人外周血CK-19 mRNA的表达

【目的】探讨鼻咽癌病人外周血中CK-19 mRNA表达与鼻咽癌临床的关系。【方法】用荧光定量RT-PCR方法检测97例鼻咽癌病人及26例正常人外周血中CK-19 mRNA的表达量。【结果】鼻咽癌病人外周血中CK-19 mRNA阳性表达94％(91/97),健康对照组阳性表达8％(2/26);T4期病人及远处转移病人外周血中CK-19 mRNA拷贝数显著升高,CK-19 mRNA拷贝数与鼻咽癌临床分期呈正相关。【结论】荧光定量RT-PCR方法检测鼻咽癌病人外周血CK-19 mRNA表达,方法简单、准确,在预测鼻咽癌远处转移及准确临床分期方面有一定可行性。

CK-19、CK-20、CEA mRNA检测在乳腺癌患者外周血微转移的意义

目的:探讨外周血细胞角蛋白(cytokeratin CK)-19、CK-20以及CEA mRNA检测在乳腺癌诊治中的意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测40例乳腺癌患者外周血CK-19、CK-20、CEAmRNA在术前、术后3d、术后14d(化疗前)、术后35d(化疗后)的表达,以健康志愿者及乳腺良性肿瘤各10例作为对照,统计分析手术及化疗后乳腺癌患者血循环肿瘤标志物的表达状况,同时根据CK-19的表达水平,分析影响乳腺癌外周血微转移的相关临床病理因素。结果:术前,乳腺癌组CK-19、CK-20、CEA mRNA阳性者分别为26例(65%)、20例(50%)、16例(40%),与对照组相比,3组P值均<0.01;手术后,3组阳性者分别为14例(35%)、10例(25%)、8例(20%),3组阳性率均较术前明显下降(P=0.013,P=0.037,P=0.023);化疗前3组阳性者分别为19例(47.5%)、15例(37.5%)、10例(25%);化疗后则为6例(15%)、2例(5%)、2例(5%),3组化疗后的阳性率亦有显著降低(P=0.003,P=0.001,P=0.025)。根据CK-19 mRNA表达水平,Logistic相关性分析,乳腺癌外周血微转移与淋巴结转移(P=0.0087)、TNM分期(P=0.0125)和病理类型(P=0.0451)有相关性。结论:CK-19、CK-20、CEA在乳腺癌患者外周血中有高表达,其表达状况高低与肿瘤负荷相关。乳腺癌外周血微转移相关性因素为淋巴结转移、TNM分期和肿瘤类型。

CK-19、Tg及HBME-1在甲状腺结节患者中的表达水平及联合检测的临床应用价值

目的探讨甲状腺结节患者术前及术后血清Tg值的变化及CK-19、HBME-1在甲状腺结节组织中的表达和在甲状腺结节鉴别诊断及预后评估方面的价值。方法选择153名入院手术的甲状腺结节患者,监测其术前3天内和手术后1月的Tg值,并且采用免疫组化法检测结节标本中CK-19及HBME-1的表达。结果 Tg、HBME-1、CK-19及HBME-1和CK-19联合表达以恶性结节伴转移最强,恶性无转移较低,甲状腺良性结节最低,在良恶性结节中的差异具有统计学意义。各指标中CK-19的敏感性最高,HBME-1的特异性最高,HBME-1与CK-19联合检测,能提高诊断的准确度。术后Tg值高于或等于术前的患者和术后Tg值低于术前的患者之间复发率差异存在统计学意义。结论对于甲状腺结节患者,HBME-1、CK-19的表达是具有高度敏感性和特异性的检测指标,联合检测HBME-1和CK-19有利于提高诊断的准确性,对于术前甲状腺结节的良恶性鉴别有重要的参考价值。术前用Tg水平来鉴别结节的良恶性意义不大,患者术前术后Tg值的变化是评估近期预后的良好指标,术后Tg值不下降常提示结节预后不良。

外周血CK-19mRNA检测对乳腺癌预后的影响

目的:探讨外周血CK-19mRNA对乳腺癌患者预后的影响。方法:对86例初治乳腺癌患者根治手术后的外周血用RT-PCR方法检测了CK-19mRNA的表达,并采用S-P免疫组化法检测了手术标本的c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达情况。结果:手术后患者外周血CK-19mRNA阳性率为52.3%;外周血CK-19mRNA状况与临床分期呈显著相关(P<0.05),而与肿瘤大小、腋淋巴结转移、c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达均无显著相关(P>0.05);外周血CK-19mRNA阴性病例与阳性病例相比,无病生存期和总生存期显著延长(P<0.05)。结论:乳腺癌患者术后外周血CK-19mRNA的检测有助于评估预后。

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。

胃癌患者外周血中CK-19的表达及其临床意义

目的检测胃癌患者外周血中CK-19和MUC-1的表达,确定其作为早期胃癌微转移分子标志物的可能性;讨论CK-19 mRNA对早期胃癌微转移的临床诊断意义。方法研究对象共分为三组,其中2009年3月～2012年3月期间于陕西省安康市中心医院住院的96例初治胃癌患者作为实验组,30例胃良性疾病患者和30例健康人的外周血分别作为对照组。采用RT-PCR法检测实验组及对照组的外周血中CK-19 mRNA及MUC-1mRNA的表达情况并评估目的基因的表达与临床特征的相关性,对结果进行统计学分析,选取出合适的标本进行PT-QPCR实验。RT-QPCR法检测44例早期胃癌患者外周血中CK-19 mRNA的表达量,通过绘制ROC曲线,探索诊断效果最好的临界值并计算AUC。结果①实验组和对照组中CK-19 mRNA阳性表达率分别为53.13%(51/96)、1.67%(1/60),差异有高度统计学意义(P<0.01),且胃癌组中CK-19 mRNA的阳性表达与肿瘤分期和和分化程度有关;胃癌组和对照组中MUC-1 mRNA阳性表达率分别为61.46%(59/96)、51.67%(31/60),差异无统计学意义(P>0.05)。②本实验结果统计的临界值为0.2358,灵敏度为95.45%,准确度为77.37%;AUC为0.897。结论 RT-QPCR法检测外周血中的CK-19 mRNA,适合作为诊断早期胃癌微转移的重要参考指标。

CK-19抗体在检测非小细胞肺癌淋巴结微转移中的应用

目的 了解角蛋白 19(CK 19)抗体在检测肺癌淋巴结微转移中的作用。方法 应用免疫组化的方法对5 0例肺癌患者的 10 6个常规病检阴性的淋巴结进行检测 ,分析相关影响因素 ,结合术前血浆肿瘤标志物浓度 ,计算出微转移危险因子 (MRF)计分。结果 CK 19抗体检测的阳性率为 11 3% (12 / 10 6 ) ,阳性病例的比例高达 2 4 %(12 / 5 0 )。单因素分析显示年龄、肿瘤解剖定位 (左 /右肺 )、大小与淋巴结微转移有关 ;多因素分析结果显示 ,淋巴结微转移的危险因子包括肿瘤解剖定位 (左 /右肺 )、大小 ,OR值分别为 1 75、 2 31。当MRF≥ 3时 ,6 2 5 % (5 / 8)发生微转移 ,而MRF <3时 ,仅 8 3% (1/ 12 )发生微转移 ,P <0 0 5。结论 CK 19抗体是检测肺癌淋巴结微转移的有效指标 ,当MRF≥ 3时应注意阴性淋巴结的微转移情况。

CK-19和Galectin-3在甲状腺良恶性组织中的表达

目的探讨细胞角蛋白(CK)-19、半乳糖凝集素(Galectin)-3在甲状腺良恶性病变组织中的表达及在鉴别诊断中的意义。方法应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测甲状腺癌、良性病变及癌旁组织中CK-19、Galectin-3mRNA的表达情况,然后应用免疫组化S-P法对相同标本的石蜡包埋组织中2个指标的蛋白表达情况进行了检测。结果RT-PCR结果显示,CK-19和Galectin-3在甲状腺癌、良性病变和癌旁组织中的表达均有显著性差异(分别χ2=26.28,P<0.001;χ2=20.06,P<0.001),但是,两者的表达与临床病理参数无关。Galectin-3在不同类型的甲状腺癌中表达率有所不同,但无显著性差异,CK-19在乳头状癌中的表达要高于滤泡癌和髓样癌,有显著性差异。免疫组化的结果显示,在甲状腺癌组织中,2种标志物多数呈阳性,个别为弱阳性,而与癌组织相邻的癌旁组织多数为阴性,甲状腺良性病变组织中,除个别局灶性阳性外均为阴性。结论CK-19和Galectin-3在甲状腺癌中的表达上调,两者联合后对于甲状腺病变的诊断具有一定的临床实用价值。

RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA的表达

目的 探讨乳腺癌患者外周血中 CK- 19m RNA的表达 ,建立检测外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法 采取 6 5例乳腺癌和 37例乳腺良性疾病患者的外周血 ,分离其有核细胞后进行细胞总 RNA的抽提 ,运用巢式 RT- PCR技术进行 CK- 19m RNA的检测。结果 以巢式 RT- PCR终产物出现 4 6 0 bp带定为阳性。 6 5例乳腺癌患者 CK- 19m RNA有 2 4例表达 ,总阳性率为 36 .92 %。37例乳腺良性疾病者 CK- 19m RNA无一例表达。两组有统计学意义 (χ2 =7.4 1,P<0 .0 0 1)。结论 RT- PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移 。

乳腺癌外周血CK-19mRNA的表达及临床意义

目的：研究外周血CK-19 mRNA表达与乳腺癌临床生物学指标的关系,探讨其作为乳腺癌微转移标志物的可能性,并判断手术和化疗对血液微转移的影响。方法：应用RT-PCR技术检测50例乳腺癌患者（乳腺癌组）术前、术后第2天、第1次化疗结束后以及术后9～12个月外周血中CK-19 mRNA的表达情况,并以20例乳腺良性疾病（良性对照组）和20例正常健康女性（正常对照组）作为对照。结果：术前乳腺癌组外周血CK-19 mRNA阳性率为24.00%（12/50）,其中0～Ⅰ期15.38%（2/13）Ⅰ,Ⅰ期20%（6/30）Ⅰ,Ⅱ期57.14%（4/7）Ⅰ,Ⅱ期乳腺癌CK-19 mRNA阳性表达率明显高于0～Ⅱ、Ⅰ期（P〈0.05）;有淋巴结转移者42.11%（8/19）表达阳性,无淋巴结转移者12.94%（4/31）表达阳性,二者差异有统计学意义（P〈0.05）。良性疾病组CK-19 mRNA的阳性率为5.00%（1/20）,正常对照组均阴性,乳腺癌组与良性疾病组和正常对照组比较差异有统计学意义（P均〈0.01）。乳腺癌组术后第2天CK-19 mRNA阳性率为26%（13/50）,与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后首次化疗结束后CK-19 mRNA阳性率为12%（6/50）,化疗前后差异有统计学意义（P〈0.01）。综合治疗9～12个月后CK-19 mRNA阳性率为10%（5/50）,与术前比较差异有统计学意义（P〈0.01）。外周血CK-19 mRNA阳性率与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、CerbB2、p53状态无关。结论：CK-19 mRNA可作为检测乳腺癌患者外周血微转移的分子学标志物,有助于早期预测乳腺癌发生血道微转移,对指导治疗和评估预后具有重要意义。

CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断价值的Meta分析

目的：评价CK-19mRNA对乳腺癌的微转移诊断的价值。方法：计算机检索维普、CNKI和万方数据库,收集已公开发表的有关CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断的文献,按Meta分析的要求对原始文献的质量进行评估,采用RevMan5.0软件对各研究的原始数据进行统计分析。结果：共纳入7篇中文文献,样本量为777例,其中经病理学诊断为II、I期的乳腺癌患者为258例,III、Ⅳ期的有62例。乳腺癌组与乳腺良性疾病组的Meta分析结果：合并OR=7.30,95%CI=2.48~21.44,P=0.0003;I、Ⅱ期与III、Ⅳ期癌症组的Meta分析结果：合并OR=0.20,95%CI=0.11至0.38,P〈0.00001。结论：CK-19 mRNA可以作为检测乳腺癌患者外周血微转移的分子标志物,对乳腺癌的指导治疗和评估预后具有重要的意义。

Galectin-3、Cytokeratin-19与桥本甲状腺炎

目的:探讨Galectin-3、Cytokeratin-19在桥本甲状腺炎中的表达情况。方法:通过对Galectin-3、Cytokeratin-19和桥本甲状腺炎国内外相关文献的检索,总结出Galectin-3、Cytokeratin-19在桥本甲状腺炎中表达情况。结果:Galectin-3、Cytokeratin-19在桥本甲状腺炎中的表达显著高于良性甲状腺肿瘤,其中,呈强阳性者在细胞核及其组织形态上均与甲状腺癌有类似之处,可作为诊断早期桥本甲状腺炎癌变的依据。结论:联合Galectin-3、Cytokeratin-19的检测,可帮助鉴别桥本甲状腺炎是否癌变,其可用FNAB和手术后标本的检测,但其在临床应用中由于免疫组化所需时间长,故应用较局限。

实时定量PCR对检测乳腺癌CK-19及CK5/6的诊断及疗效分析

目的:探究实时定量PCR对检测乳腺癌CK-19及CK5/6的诊断及疗效分析。方法:收集2018年4至2020年4月于我院就诊的70例乳腺癌患者的癌组织及20例乳腺良性病变患者的病变组织。采用RT-PCR检测CK-19及CK5/6在乳腺癌中的表达。结果:乳腺良性病变中无CK-19mRNA、CK5/6mRNA表达,在乳腺癌患者中有26例CK-19mRNA表达、21例CK5/6mRNA表达(P<0.05)。在乳腺癌Ⅰ期-Ⅲ期中,Ⅱ期CK-19mRNA、CK5/6mRNA的阳性表达率最高、Ⅰ期最低,组间比较差距较大(P<0.05)。CK-19的灵敏度、特异度与ROC曲线面积均高于CK5/6灵敏度、特异度与ROC曲线面积。结论:实时定量RT-PCR对CK-19与CK5/6的表达进行检测可判断乳腺癌的转移,且具有一定的诊断价值,值得临床推广使用。

CK-19 mRNA与肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的:评价外周血CK-19 mRNA与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)和细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)联合检测对肺癌临床诊断的价值和意义。方法:分别应用RT-PCR与放射免疫分析法、免疫放射分析法测定64例肺癌患者、40例肺部良性疾病患者和30例健康人CK-19 mRNA、CEA、NSE和CYFRA21-1的表达情况,并分析它们在不同临床病理类型和不同分期肺癌患者中的表达和联合检测的灵敏度、特异度和准确性。结果:肺癌患者CK-19 mRNA、CEA、NSE和CYFRA21-1的阳性率均高于肺部良性疾病组和健康对照组。不同病理类型的肺癌组织中CK-19 mRNA阳性率差异无统计学意义,Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌组织中CK-19mRNA的阳性率呈明显的上升趋势。肺鳞癌组织中CYFRA21-1的阳性率最高(78.5%),小细胞肺癌组织中NSE的阳性率最高(81.3%),肺腺癌组织中CEA的阳性率最高(79.2%)。4者联合检测灵敏度和准确性为90.6%和86.2%。结论:肺癌患者外周血CK-19 mRNA和肿瘤标记物CEA、NSE、CYFRA21-1联合检测可提高肺癌的诊断率,并可为肺癌病理类型的诊断提供重要的参考。

基于数据库分析CK-19基因在乳腺癌中的表达及与患者预后相关性

目的探讨肿瘤芯片数据库(Oncomine),生存分析数据库(Kaplan-Meier Plotter)和蛋白-蛋白相互作用数据库(String)平台中CK-19基因在乳腺癌中的表达及临床意义.方法分别对Oncomine、Kaplan-Meier Plotter和String进行乳腺癌CK-19基因表达情况数据挖掘.比较乳腺癌组织和对应正常组织中CK-19 mRNA表达是否存在差异.根据CK-19高低表达情况绘制生存曲线进行CK-19与乳腺癌患者预后关系分析.同时分析CK-19蛋白共表达网路,推测CK-19可能的相互作用蛋白及其生物学功能.结果检索Oncomine数据库发现,在乳腺癌中有9个数据集均显示乳腺癌中CK-19高表达.CK-19 mRNA聚类分析显示,CK-19 mRNA与KRT18,ERBB3,PRR5等基因mRNA存在共表达;在String蛋白互作数据库中对CK-19蛋白共表达进行了分析,结果显示CK-19与KRT8,KRT18等蛋白具有共表达关系.Oncomine数据库中,有3项基因表达芯片数据关于CK-19 mRNA在乳腺癌与正常组织中的差异表达分数数据,结果显示乳腺癌组织中CK-19 mR-NA表达水平高于正常乳腺组织(P<0.05).生存分析显示CK-19 mRNA高低表达组总生存期分别为90.0月和115.0月,差异比较无统计学意义(HR=1.14,95%CI:0.92~1.41,P=0.23),高低表达组无疾病进展生存期分别为48.16月和48.0个月,差异比较无统计学意义(HR=1.09,95%CI:0.98~1.22,P=0.11).应用String数据富集CK-19相互作用的可能相关蛋白,与CK-19相互作用的蛋白有10个,分别为作用评分均大于0.9,10个关联蛋白均属于细胞角蛋白家族,参与上皮细胞结构的稳定性.结论CK-19 mRNA在乳腺癌组织中高表达,其蛋白与KRT18等角蛋白家族可能共同参与了上皮细胞结构的稳定性.但CK-19 mRNA高低表达与乳腺癌患者的预后无关.

实时荧光定量RT-PCR检测肝卵圆细胞Alb和CK-19 mRNA的表达

目的建立Alb和CK-19 mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)系统,检测Lewis大鼠肝卵圆细胞(HOC)及其分化细胞中Alb和CK-19 mRNA表达量并分析其意义。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测分别检测HOC、分化细胞、胆道及肝脏标本中Alb和CK-19 mRNA的表达情况,以上标本各20例。结果Alb mRNA在HOC(-1.820±0.614)中的表达水平明显低于其在肝脏(-1.139±0.588)中的表达水平(P<0.05);CK-19 mRNA在HOC(-3.852±0.974)中的表达水平明显低于在胆道(-1.739±0.704)、肝脏(-1.926±0.653)、分化细胞(-1.492±0.634)中的表达水平(P<0.05);HOC Alb mRNA表达水平高于CK-19mRNA表达水平(P<0.05),分化细胞Alb mRNA(-1.758±0.543)表达水平同ck-19 mRNA表达水平差异不明显(P>0.05)。结论使用实时荧光定量RT-PCR检测HOC Alb和CK-19 mRNA的表达克服了传统PCR只能定性不能定量的缺点,为研究Alb和CK-19 mRNA在HOC中的表达提供了相对定量的方法,成功地进行该项实验需要掌控好几个关键环节;HOC中Alb mRNA和CK-19 mRNA表达量低,经过诱导分化后两者表达量明显升高,证实HOC具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双向分化特性,在本研究的诱导分化条件下HOC主要向胆管上皮细胞分化。

乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA检测的临床意义

目的探讨外周血CK-19mRNA表达与乳腺癌的关系,评价其在乳腺癌诊断上的价值。方法应用RT-PCR技术检测200例乳腺癌患者外周血中CK-19mRNA表达情况,并以66例乳腺良性疾病和60例正常健康女性作为对照。结果200例乳腺癌患者48例外周血CK-19为阳性,66例乳腺良性疾病患者中3例阳性,而同时检查的60位健康者,他们的外周血CK-19均为阴性;不同年龄病人的CK-19检测阳性率对比,彼此之间差异无统计学意义;肿瘤不同分期CK-19阳性率对比差异有统计学意义。结论RT-PCR法检测CK-19mRNA可作为乳腺癌诊断的指标。

外周血CK-19评价乳腺癌术后化疗及监控血液微转移

目的以外周血CK-19为指标评价术后化疗作用及其监控血液微转移意义。方法以120例乳腺癌术后患者为研究对象,巢式RT-PCR检测外周血CK-19 mRNA,比较化疗前后表达差异及CK-19表达与乳腺癌远处转移关系。结果化疗前血液微转移阳性率为23.33%,化疗后为3.33%,差异有统计学意义(P<0.01);CK-19阳性组肿瘤转移率为76.9%,阴性组肿瘤转移率为8.6%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论术后辅助化疗能降低乳腺癌血液微转移;外周血CK-19能监控乳腺癌血液微转移。