蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡与胞浆内[Ca^(2+)]变化的关系

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(Bortezomib)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对其胞浆内[Ca2+]([Ca2+]i)的影响。方法以浓度梯度的PS-341干预U266细胞4h后收集,荧光显微镜观察细胞凋亡,AnnexinV-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光素标记FCM检测[Ca2+]i。结果(1)PS-341作用U266细胞4h后荧光显微镜观察到凋亡细胞数随浓度增加而增多;(2)FCM检测凋亡细胞的比例分别为0.56%、7.71%、19.84%、31.10%、40.72%,与PS-341浓度成正比;(3)PS-341作用后U266细胞[Ca2+]i均值分别为403.65nmol/L、418.20nmol/L、378.65nmol/L、356.36nmol/L、349.21nmol/L;(4)PS-341诱导U266细胞凋亡时伴随[Ca2+]i的改变,浓度>50nmol/L时诱导的细胞凋亡伴随[Ca2+]i下降。结论蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡呈浓度依赖性;PS-341浓度>50nmol/L时下调[Ca2+]i,并由此发挥抗骨髓瘤细胞作用。

脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2表达的影响。方法:将乳腺癌MCF-7细胞系培养呈对数生长期,分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后,RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERTmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞bcl-2的表达情况。结果:在1、10、100μmol/L的NDGA作用下,3组hTERTmRNA和bcl-2的表达均显著低于对照组(P〈0.001)。结论:NDGA能够下调MCF-7细胞端粒酶hTERTmRNA及bcl-2的表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况。方法以RT-PCR法检测人原发性肝癌细胞系HEPG-2中凋亡抑制蛋白Livin基因mRNA的表达。结果HEPG-2细胞只表达Livin基因的β亚型,即Livinβ。结论人原发性肝癌细胞系HEPG-2细胞阳性表达Livinβ基因。本实验研究结果为原发性肝癌的诊断和治疗提供了新思路、新方法。

5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响

目的探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xaf1表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用。方法(1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K56248h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异。(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况。结果(1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最强;INFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达。(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-xl)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强。结论(1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性。(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应。

组织因子途径抑制物-2和γ-神经突触核蛋白在食管癌中的表达及其与肿瘤细胞浸润、转移和凋亡之间的关系

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织及20例相应癌旁不典型增生组织和54例相应癌旁正常食管组织中TFPI-2、SNCG和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)的表达,应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:TFPI-2和SNCG在食管癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管组织中的阳性表达率分别为30.4%、60.0%、87.0%和63.4%、30.0%、3.7%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TFPI-2和SNCG的表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、TNM分期和分化程度密切相关(P<0.01),但与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和肿瘤大体分型无关(P>0.05)。食管癌组织中TFPI-2与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.636,P=0.000),而SNCG与MMP-9的表达呈正相关(r=0.393,P=0.000)。TFPI-2和SNCG的表达与AI有关(P<0.05)。结论:TFPI-2可能通过抑制MMP-9的表达诱导细胞凋亡,抑制食管癌细胞的生长和转移,而SNCG可能在此过程中起着相反的作用,TFPI-2和SNCG有望成为有效的肿瘤标志物和肿瘤基因治疗的新靶点。

柞蚕核型多角体病毒IAP2亚细胞定位分析及其基因缺失对病毒复制的影响

柞蚕核型多角体病毒(AnpeNPV) IAP2属杆状病毒IAP-2类型蛋白,在病毒复制中的作用尚不清楚。本研究用RLM-RACE法分析Anpe-iap2基因的转录起始位点和终止位点,结果显示其转录起始位点位于ATG上游-4 nt,处于晚期基因启动子基序TAAG中;基因转录终止于TGA下游219 nt处,推算Anpe-iap2基因cDNA序列全长为952 bp。基因表达分析证实Anpe-iap2为病毒晚期表达基因。利用同源重组方法构建了Anpe-IAP2和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的AnpeNPV重组病毒,共聚焦显微镜确定Anpe-IAP2在细胞质和细胞核中均有分布,以细胞核分布较多。利用λ-Red重组技术构建Anpe-iap2基因缺失型重组AnpeNPV,定量PCR检测结果表明缺失Anpe-iap2基因的重组AnpeNPV在Tn-Hi5细胞中的复制能力明显受到抑制,在柞蚕蛹中产生出芽型病毒粒子(BV)的数量显著减少。研究结果显示Anpe-iap2基因对AnpeNPV的复制和感染有重要作用,为深入了解AnpeNPV基因的功能和特性提供了新的依据。

细胞凋亡途径及其机制

细胞凋亡存在于多细胞生物的整个生命过程当中,可及时清除机体内多余和受损伤的细胞,维持组织器官的稳定性。真核细胞主要通过死亡受体介导的外部凋亡途径、内部线粒体途径、B粒酶介导的细胞凋亡途径以及近几年开始关注的内质网应激途径介导细胞凋亡的发生。而参与这些细胞凋亡过程的主要有4类蛋白分子,即凋亡蛋白酶(caspases)、衔接蛋白(adapter proteins)、Bcl-2和凋亡抑制蛋白(IAPs)。细胞凋亡对卵巢储备及一些妇科疾病如子宫内膜异位症、卵巢癌等的发生发展产生影响。

Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 取髓母细胞瘤Daoy细胞,随机分为对照组和10、50、100μmol/LGANT61组,对照组加入0.1%DMSO,10、50、100μmol/LGANT61组分别加入10、50、100μmol/LGANT61和0.1%DMSO。采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡指数和细胞周期,qRT-PCR法检测细胞中Gli1、Bcl-2mRNA表达,Westernblotting法检测细胞中Gli1、Bcl-2蛋白表达。结果 各浓度GANT61组细胞增殖抑制率、细胞凋亡指数均高于对照组,且50、100μmol/LGANT61组高于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组高于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组G1期细胞比例均高于对照组、S期细胞比例均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于10μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于50μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组Gli1、Bcl-2mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。结论 GANT61能够抑制髓母细胞瘤细胞的Gli1、Bcl-2mRNA及蛋白表达,从而抑制细胞增殖,增加G1期细胞比例,促进细胞凋亡。

Caspase介导的BAG3剪切在MG132诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)在蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:根据对蛋白酶体抑制剂敏感程度高低,选取2种人甲状腺未分化癌细胞系FRO和ARO,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组、Pancaspase抑制剂Z-VAD-FMK处理组及MG132+Z-VAD-FMK联合组,按不同时段处理细胞;利用实时定量RT-PCR法检测各组细胞BAG3 mRNA表达及MG132诱导其表达时效性,蛋白质印迹法检测各组细胞BAG3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,在MG132诱导作用下,2种细胞中BAG3 mRNA表达呈相似程度的增加,具有浓度依赖效应(ARO:F=278.93,P=0.000;FRO:F=410.56,P=0.000),并随作用时间呈现时效性(ARO:F=198.67,P=0.000;FRO:F=174.43,P=0.000);在ARO细胞中,BAG3蛋白表达也呈剂量依赖诱导效应,但各浓度组间细胞凋亡率差异无统计学意义,P>0.05;而在FRO细胞中,随MG132浓度增加,发现大量40×103BAG3剪切片断,其细胞凋亡率亦随之增加,呈剂量依赖效应,在MG132+Z-VAD-FMK联合组中BAG3蛋白显著增加,40×103BAG3剪切片断消失。结论:蛋白酶体抑制剂MG132可诱导上调2种甲状腺癌细胞中BAG3基因表达,在蛋白酶体抑制剂敏感细胞中,随着细胞凋亡增加出现BAG3蛋白的剪切,这一效应可能依赖Caspase介导完成。

Bcl-2相关抗凋亡基因3对蛋白酶体抑制剂抗肿瘤作用影响的观察

目的:探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(Bcl-2-associated athanogene3,BAG3)在蛋白酶体抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法:选取不同组织来源的人肿瘤细胞系,分别设空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组、衣霉素处理组及特异性siBAG3、随机序列核酸si RNA和错位型siBAG3组;利用实时定量RT-PCR法检测各组细胞BAG3及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)mRNA表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,MG132能显著增加有关细胞BAG3基因表达水平(P<0.01);而衣霉素处理组细胞BAG3表达变化差异无统计学意义,P>0.05,但明显增加GRP78表达(P<0.01);siBAG3组细胞BAG3表达水平显著低于随机序列核酸si RNA和si mut-BAG3组(P<0.01),siBAG3组细胞凋亡率差异有统计学意义,P<0.01。结论:BAG3是影响蛋白酶体抑制剂凋亡效应的一类破坏因子,下调其表达有望增加蛋白酶体抑制剂抗肿瘤活性。

凋亡相关基因c-IAP2和caspase-4在头颈部低分化鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 :探讨凋亡相关基因c IAP2和caspase 4在头颈部低分化鳞状细胞癌发生、发展中的作用和机制。方法 :选取石蜡包埋临床已确诊的头颈部低分化鳞状细胞癌组织标本 6 6例 ,5例正常鼻黏膜标本作为对照 ,以免疫组化法检测c IAP2和caspase 4在头颈部低分化鳞状细胞癌中的表达 ,光学显微镜高倍镜下计数阳性细胞。结果 :①实验组c IAP2的表达明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,两组caspase 4的表达缺失差异具有显著性意义(P <0 .0 5 ) ;②c IAP2的表达与临床预后呈正相关 ,caspase 4的表达与临床预后呈负相关 ,而两者的表达与临床分期均无关 ;③c IAP2的表达与caspase 4的表达呈负相关。 结论 :在头颈部低分化鳞状细胞癌组织中 ,c IAP2被激活而caspase 4被抑制 ,与头颈部低分化鳞状细胞癌的发生发展有密切关系 ,并且可能与部分肿瘤的放化疗失败有关。

B细胞淋巴瘤-2抑制剂治疗血液系统恶性肿瘤的研究新进展

B细胞淋巴瘤(BCL)-2是参与细胞凋亡信号通路的重要蛋白,可在体内发挥抑制细胞凋亡的重要作用,与肿瘤的发生、发展及耐药性的产生密切相关。高选择性的口服抗凋亡蛋白BCL-2抑制剂,venetoclax可以通过重启肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。目前,venetoclax单药或者联合其他药物治疗血液系统恶性肿瘤已经取得了重要进展。笔者现就venetoclax在慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓细胞白血病(AML)等多种血液系统恶性肿瘤治疗中的临床研究新进展进行阐述。

以炎症性肠病为临床表型的2型X连锁淋巴组织细胞异常增生症一例报道并文献复习

目的总结2型X连锁淋巴组织细胞异常增生症(XLP-2),特别是以炎症性肠病(IBD)为临床表型的病例的临床特征。方法回顾性分析2021年5月广州医科大学附属第三医院消化内科收治的1例以IBD为首发表型的XLP-2患者的临床特征及诊治过程,并以"X-linked lymphoproliferative syndrome type 2"、"X-linked inhibitor of apoptosis protein deficiency"、"hemophagocytic syndrome"、"X连锁淋巴组织细胞异常增生症"、"X连锁凋亡抑制因子缺陷"、"噬血细胞综合征"为检索词,分别在PubMed、中国知网、万方数据库检索2006年1月至2021年10月的文献,纳入诊断为XLP-2的病例进行复习总结。结果纳入90篇文献共215例患者。男性207例,女性8例;诊断年龄0~14岁的患者占85.1%(183/215)。临床表型主要包括噬血细胞综合征119例(55.3%)、脾大58例(27.0%)、IBD56例(26.0%)。以IBD为临床表型的患者共56例。男性52例,女性4例;发病年龄(范围)6.4(0~31.0)岁,IBD诊断年龄(范围)9.1(0~31.0)岁,XLP-2诊断年龄(范围)10.8(0~41.0)岁。克罗恩病49例,溃疡性结肠炎1例,未确定分型6例。X连锁凋亡抑制因子(XIAP)基因突变类型中,无义突变26例,错义突变22例,缺失突变8例。治疗方面,采用造血干细胞移植25例(44.6%),糖皮质激素8例(14.3%),免疫抑制剂11例(19.6%),生物制剂27例(48.2%),使用2种及以上生物制剂共18例(32.1%)。随访35例,时间(范围)8.46(0.11~34.00)年,存活32例,死亡3例。结论XLP-2是一种X染色体隐性遗传病,多见于男性和儿童,IBD为常见的表型之一。以IBD为表型的XLP-2患者大多接受多种药物治疗,具有难治性特点且易发生诊断延迟,早期基因检测对XIAP基因缺陷疾病的鉴别诊断及早期治疗具有重要意义。

Nimesulide诱导胃癌细胞凋亡的作用机制研究

目的 非甾体抗炎药诱导胃癌细胞凋亡的机制不清楚。通过研究选择性COX 2抑制剂Nimesulide对人胃癌细胞系SGC 790 1的COX 2mRNA表达和c myc、Bcl 2、caspase 3凋亡基因蛋白表达的影响 ,探索其诱导胃癌细胞凋亡的机制。方法 胃癌细胞的凋亡用电子显微镜、AnnexinV FITC染色、流式细胞仪技术测定。COX 2基因表达用RT PCR法测定。c myc、Bcl 2和caspase 3蛋白表达用免疫细胞化学技术测定。结果 Nimesulide在浓度为 50 μmol/L时作用 48、72h和浓度为 1 0 0和2 0 0 μmol/L 时作用 2 4、48、72h均可诱导胃癌细胞凋亡 ,凋亡率分别为 7.51 % ,9.86 % ;1 1 .58% ,1 2 .45 % ,1 6 .66 %和 1 2 .2 1 % ,1 5 .38% ,2 0 .2 8% ,呈浓度和时间依赖性。Nimesulide可降低COX 2mRNA表达和Bcl 2蛋白表达 ,增加c myc和caspase 3蛋白表达。 2 0 0 μmol/LNimesulide作用 72h ,Bcl 2 ,c myc和caspase 3蛋白表达阳性率分别为 (2 0 .2± 7.6) % ,(49.2± 1 5 .1 ) %和 (34 .6± 1 2 .9) % ,对照组为(44.6± 1 2 .1 ) % ,(2 4 .7± 9.5) %和 (1 4 .8± 6 .4) % ,三者对照比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1。)结论 Nimesulide可诱导胃癌细胞SGC 790 1凋亡 ,其机制涉及Bcl 2表达下调、c myc表达上调及caspase 3激活。