Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移

目的:探究LncRNA RP11-214F16.8(Lnc-PCIR)通过调控多腺苷酸结合蛋白质4[poly(A)-binding protein cytoplasmic 4,PABPC4]的泛素化对喉癌细胞增殖、迁移的影响。方法:利用Human Protein Atlas、GEPIA数据库分析Lnc-PCIR、PABPC4在头颈鳞状细胞癌组织中的水平及患者的总体生存期。选取我院130例喉癌患者的癌及癌旁组织标本,RT-qPCR、Western blot检测组织Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平,并分析Lnc-PCIR水平与患者临床病理参数的关系。将HEP-2、TU212细胞进行不同转染,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组、Lnc-NC组、Lnc-PCIR组、si-Lnc-PCIR+NC组、si-Lnc-PCIR+PABPC4组。CCK-8实验、EdU染色和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测细胞Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA水平;HEP-2、TU212细胞分别经放线菌酮(cycloheximide,CHX)、MG132、ML364处理后,Western blot检测细胞PABPC4蛋白水平。20只裸鼠经皮下注射已转染的HEP-2细胞悬液,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组;1个月后,测定移植瘤体积、质量和Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平。结果:数据库显示头颈鳞状细胞癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4水平高于正常组织,且Lnc-PCIR、PABPC4水平与总体生存期呈负相关(均P<0.05)。与正常组织相比,患者喉癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平升高,且Lnc-PCIR水平与患者性别、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(均P<0.05)。敲低Lnc-PCIR后,细胞Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平降低;细胞培养1 d、2 d、3 d后的OD值、EdU阳性率降低,细胞迁移数减少。而过表达PABPC4能部分逆转敲低Lnc-PCIR对细胞增殖和迁移的影响(均P<0.05);过表达Lnc-PCIR能降低细胞PABPC4泛素化水平(P<0.05)。敲低Lnc-PCIR能抑制小鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论:Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移。

电针对甲基苯丙胺戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的观察电针对甲基苯丙胺(MTHE)戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4(AQP4)及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨电针改善MTHE戒断后抑郁潜在的作用机制。方法健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组、电针组采用条件性位置偏爱实验(CPP)复制小鼠MTHE成瘾模式,自然戒断后制备戒断后小鼠抑郁模型。空白组、模型组、电针组不给予任何干预,电针组取“百会”、“大椎”穴给予电针干预,选用连续波,频率2 Hz,1次/d,15 min/次,连续治疗28 d。分别于戒断后和干预后对各组小鼠进行强迫游泳试验和开放旷场试验,Western blot法检测小鼠海马AQP4、BDNF、TrkB、CREB和p-CREB等蛋白表达情况,免疫荧光染色法检测小鼠海马AQP4表达情况,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马AQP4 mRNA表达。结果造模后,与空白组比较,模型组、电针组CPP值均升高(均P<0.01),模型组、电针组CPP值差异无统计学意义(P>0.05)。戒断后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间均增加(均P<0.01)、中央区活动持续时间均减少(均P<0.01),模型组与电针组差异无统计学意义(P>0.05);干预后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间增加(P<0.01)、中央区活动持续时间减少(P<0.01),与模型组比较,电针组水中自主不动状态持续时间减少(P<0.01),中央区活动持续时间增加(P<0.01);干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均减少(均P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均增加(均P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4阳性减少(P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4阳性表达增加(P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4 mRNA表达减少(P<0.01)。干预后,与模型组比较,电针组AQP4 mRNA表达增加(P<0.01)。结论电针可改善METH戒断后小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与调控AQP4表达,以及BDNF/TrkB/CREB信号通路活性相关。

环状RNA MYO9A_043通过下调CPEB4表达发挥抑制小鼠心脏成纤维细胞纤维化表型的作用

目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-qPCR和Western blot实验检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain, Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2, Acta2)的表达。利用划痕实验检测mCFs的迁移能力。利用RNA测序分析和RT-qPCR验证circMYO9A_043对mCFs中胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)等基因的下调作用。利用腺病毒介导mCFs过表达CPEB4,检测CPEB4对纤维化相关基因表达的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测CPEB4与纤维化相关基因的结合作用。进一步通过放线菌素D处理实验,检测mCFs中CPEB4对Col1a1、Col3a1和Acta2 mRNA的稳定作用。结果:利用腺病毒可以有效介导circMYO9A_043在mCFs中过表达。circMYO9A_043可显著下调Col1a1、Col3a1和Acta2表达,抑制mCFs的迁移能力(P<0.05)。circMYO9A_043可显著降低mCFs中CPEB4的表达(P<0.01),过表达CPEB4可逆转circMYO9A_043对纤维化相关基因表达的抑制作用。RIP实验显示CPEB4与mCFs中纤维化相关基因的mRNA有显著结合作用(P<0.01),而放线菌素D处理实验结果显示CPEB4可显著增强上述基因mRNA的稳定性(P<0.05)。结论:circMYO9A_043通过下调CPEB4的表达而抑制mCFs纤维化表型。

糖尿病视网膜病变不同分期患者血清δ样蛋白4和环磷腺苷效应元件结合蛋白水平对微血管损伤的预测价值

目的分析糖尿病视网膜病变(DR)不同分期患者血清δ样蛋白4(DLL4)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)水平对微血管损伤的预测价值。方法选择2020年2月—2023年2月收治的80例糖尿病患者为研究对象,依据DR不同分期分为无DR组(n=37)、非增生型DR组(n=19)和增生型DR组(n=24);检测血中DLL4及CREB水平,采用FACS Count流式细胞仪检测患者内皮祖细胞(EPC)、循环内皮细胞(CEC)及循环祖细胞(CPC)水平。结果增生型DR组血中DLL4及CREB水平最高,无DR组DLL4及CREB水平最低,差异有统计学意义(P<0.05);不同DR分期与DLL4、CREB水平呈显著正相关(P<0.05);糖尿病患者血中高DLL4及高CREB水平是影响DR分期的独立危险因素(P<0.05)。增生型DR组血中EPC、CPC水平最低,CEC水平最高,无DR组EPC、CPC水平最高,CEC水平最低,差异均有统计学意义(P<0.05);DLL4、CREB水平与EPC、CPC水平呈显著负相关(P<0.05),DLL4、CREB水平与CEC水平呈显著正相关(P<0.05);DLL4和CREB预测DR患者微血管损伤的曲线下面积(AUC)均大于0.85。结论随着DR分期增加,患者血清DLL4和CREB水平呈显著升高趋势,且DLL4和CREB对其微血管损伤具有较高的预测价值。

慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪性肝病患者血清RBP4和SREBP-1c水平变化分析

目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)水平变化及其临床意义。方法 2019年2月~2022年2月我院收治的CHC患者94例,接受肝穿刺活检和重组人干扰素-α2a联合利巴韦林治疗24周。使用全自动生化分析仪检测血生化指标,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用ELISA法检测血清RBP4和SREBP-1c水平。结果 经组织病理学检查发现,在94例CHC患者中,合并NAFLD患者50例(53.2%),其中肝轻度脂肪变22例(44.0%)和中重度脂肪变28例(56.0%);CHC合并中重度脂肪变患者血清AST、ALT、ALP和GGT水平分别为(62.2±12.8)U/L、(87.2±11.5)U/L、(99.0±14.4)U/L和(69.4±10.3)U/L,显著高于CHC合并轻度脂肪变患者【分别为(53.6±10.1)U/L、(75.7±12.5)U/L、(83.8±12.7)U/L和(58.5±7.7)U/L,P<0.05】或CHC患者【分别为(51.7±8.5)U/L、(73.5±13.8)U/L、(81.6±10.9)U/L和(56.2±8.1)U/L,P<0.05】;CHC合并中重度脂肪变患者血清RBP4和SREBP-1c水平分别为(55.9±8.2)mg/L和(40.1±7.4)μg/L,显著高于合并轻度脂肪变患者【分别为(36.7±5.8)mg/L和(29.3±5.1)μg/L,P<0.05】或CHC患者【分别为(28.4±6.3)mg/L和(21.8±5.5)μg/L,P<0.05】;中重度脂肪变患者血清HbA1c和HOMA-IR水平分别为(5.7±0.5)%和(3.2±0.5),显著高于CHC合并轻度脂肪变患者【分别为(5.3±0.5)%和(2.5±0.4),P<0.05】或CHC患者【分别为(5.1±0.3)%和(1.9±0.3),P<0.05】;41例治疗应答组血清RBP4和SREBP-1c水平分别为(25.7±6.0)mg/L和(20.6±5.0)μg/L,显著低于53例治疗无应答组【分别为(48.5±7.4)mg/L和(35.5±6.3)μg/L,P<0.05】。结论 CHC合并NAFLD患者血清RBP4和SREBP-1c水平升高,可能影响对干扰素-α2a抗病毒治疗的应答,值得进一步研究。

胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的:检测胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL在胶质瘤组织中的表达,并探讨二者及多种临床病理因素与患者预后的关系。方法:应用免疫组化染色检测165例不同级别胶质瘤(低级别69例,高级别96例)组织中CPEB4和Bcl-xL的表达情况,采用logistic回归分析探讨影响胶质瘤预后的危险因素。结果:高级别胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的阳性表达率均高于低级别胶质瘤组织(χ2=28.971和17.601,P<0.05)。单因素分析显示,患者术前KPS评分、肿瘤直径、肿瘤切除范围、术后放疗、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达对3 a生存率有影响(P<0.05),构建的判别函数判别符合率达90.9%;多因素分析表明,术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达是影响胶质瘤患者3 a生存率的独立因素(P<0.05),判别函数Y=-0.644+1.386X3+1.052X5+1.248X6-2.679X10-1.042X11-2.659X12,判别符合率达88.3%。结论:CPEB4和Bcl-xL阳性表达与胶质瘤恶性程度有关;术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达可作为考察胶质瘤患者预后情况的重要指标。

电针对非酒精性脂肪肝大鼠血清RBP4水平的影响及其脂质调节作用机制

目的：探讨电针对高脂高胆固醇造模的非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠的脂质调节作用，阐明血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平以及肝 X受体α（LXR-α）和肝脏固醇调节元件结合蛋白-1 c （SREBP-1 c）表达的调节作用机制。方法：44只雌性 SD大鼠适应性喂养7 d，随机分为正常组、模型组、东宝肝泰组和电针组，每组11只。正常组大鼠用标准饲料喂养，其余各组大鼠用高脂高胆固醇饲料喂养。8周后电针组针刺“肝俞”、“脾俞”和“膈俞”进行治疗，电压9 V，电流强度1～3 mA，频率为1.5～2.0 Hz，疏密波，留针15 min，每天1次，连续28 d。检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血清游离脂肪酸（FFA）和肝组织匀浆甘油三酯（TC）、总胆固醇（TG）的变化，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清 RBP4水平，采用 Western blotting法检测大鼠肝组织中 LXR-α和SREBP-1 c蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组大鼠的 FBG、FFA、肝组织匀浆中 TC和 TG以及血清 RBP4水平升高（P＜0.01）， LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达水平也升高（P＜0.01）；与模型组比较，电针组和东宝肝泰组大鼠 FBG、FFA、肝组织匀浆TC和TG水平下降（P＜0.05或P＜0.01），血清 RBP4水平下降（P＜0.01）， LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：电针“肝俞”、“脾俞”、“膈俞”能降低 NAFLD大鼠血清 RBP4水平，调节脂质代谢，改善脂质沉积，对 NAFLD有明显的治疗作用，其机制可能与抑制肝组织中 LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达上调有关。

磷酸二酯酶4抑制剂咯利普兰逆转慢性束缚应激诱导的大鼠抑郁和焦虑样行为

目的:探讨磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰(rolipram)对抗慢性应激诱导的抑郁和焦虑样行为的分子机制。方法:(1)将40只SD大鼠分为4组(每组10只):空白对照组、模型组、阳性对照药氯化锂(LiCl)组及rolipram组,并进行应激前旷场实验。给予慢性束缚应激21 d后,分别进行强迫游泳、高架十字迷宫及应激后旷场实验。最后一次行为学实验结束后立即处死动物并取双侧海马组织,免疫印迹法检测海马内磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化丝氨酸残基21糖原合成酶激酶3α(p-Ser21-GSK3α)、磷酸化丝氨酸残基9糖原合成酶激酶3β(p-Ser9-GSK3β)、磷酸化酪氨酸残基279糖原合成酶激酶3α(p-Tyr279-GSK3α)、磷酸化酪氨酸残基216糖原合成酶激酶3β(p-Tyr216-GSK3β)、总糖原合成酶激酶3α(total GSK3α)及总糖原合成酶激酶3β(total GSK3β)的表达。(2)30只SD大鼠平均分为6组,双侧海马CA1区手术埋管并恢复7 d后进行慢性应激处理21 d,并在每次应激前微量注射蛋白激酶A(PKA)的拮抗剂H89,并腹腔注射LiCl和rolipram。双侧海马用于检测PDE4D、p-CREB和p-Ser9-GSK3β的表达。结果:(1)应激前各组动物自主活动能力无显著差异,应激14 d及21 d后应激组与空白对照组相比体重显著下降,LiCl及rolipram均显著逆转了应激对体重的下调作用。应激显著增加了强迫游泳实验中动物的不动时间,减少了攀爬时间和高架十字迷宫实验中进入开臂的次数及时间,表现出抑郁和焦虑样行为,而LiCl及rolipram均显著逆转了慢性束缚应激诱导的上述行为障碍。免疫印迹结果显示rolipram可显著逆转应激对p-CREB、BDNF、p-Ser21-GSK3α和p-Ser9-GSK3β表达的下调作用,而LiCl仅显著上调p-Ser21-GSK3α及p-Ser9-GSK3β的表达。各组p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β、total GSK3α及total GSK3β的表达无显著差异。(2)慢性应激诱导了大鼠海马内PDE4D表达的上调,PKA、p-CREB及p-Ser9-GSK3β的下调。Rolipram显著逆转了上述效应,且H89显著阻断了Rolipram的药物效应。结论:Rolipram抗抑郁及抗焦虑作用不仅通过CREB/BDNF信号通路,而且还有GSK3抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路的参与,且CREB介导的信号转导通路对GSK3抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路发挥重要调节作用。

CPEB-4蛋白在癫痫致痫灶中的表达及临床意义

目的:通过观察CPEB-4蛋白在难治性癫痫患者致痫灶中的表达,探讨其在癫痫发病、发展过程中及对癫痫手术治疗预后判断的作用。方法:用免疫组织化学方法检测42例难治性癫痫患者(癫痫组)致痫灶和12例行神经外科减压或清创患者(对照组)的脑组织标本中CPEB-4蛋白的表达,并与癫痫病程、发病频率、手术预后等进行相关性分析。结果:CPEB-4在正常脑组织和癫痫患者脑组织中均有表达,致痫灶内CPEB-4表达明显高于对照组(P<0.05),CPEB-4的表达与患者性别无相关性,但与癫痫病程、发作频率呈正相关,与手术预后呈负相关。结论:CPEB-4蛋白可能与难治性癫痫发生、发展有密切关系,为癫痫发病机制的研究提供新思路,为药物治疗癫痫提供了新的靶点,同时也为手术治疗癫痫的预后判断提供了依据。

有氧运动及其联合饮食干预影响非酒精性脂肪肝患者血浆SREBP-1c、RBP4水平的研究

目的:探讨有氧运动、饮食控制对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清SREBP-1c、RBP4水平的影响。方法:将NAFLD患者共53例随机分为对照组(C)、运动组(E)、饮食控制组(D)和运动+饮食控制组(ED);另有12例健康自愿者组成健康对照组(N)。E组运动处方干预,D组饮食干预,ED组运动联合饮食干预。实验前后分别检测身体形态(BMI;WHR)和血液生化指标(SREBP-1c;RBP4;TNF-a等)。结果:1WHR指数实验后E组、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后DE组较C、E组显著下降(P<0.05)。2血浆TG及LDL/HDL实验后E组、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后DE组血浆TG、E组和DE组LDL/HDL较C组显著降低(P<0.05)。3血浆FINS水平及HOMA-IR实验后E、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后HOMA-IR指数E组和DE组较C组显著下降(P<0.05)。4E组RBP4、D组SREBP-1c和DE组TNF-α、RBP4、SREBP-1c血浆水平实验后较实验前显著下降(P<0.05);实验后E组SREBP-1c水平和DE组血浆RBP4、SREBP-1c水平较C组显著降低(P<0.05)。结论:116周有氧运动、饮食控制以及有氧运动联合饮食控制,NAFLD患者血浆SREBP-1c、RBP4、TNF-α水平分别呈不同程度降低,IR缓解,脂质代谢紊乱改善,有利于NAFLD转归。2有氧运动联合饮食控制对NAFLD的干预效果更佳。

cAMP/PKA/CREB信号通路及相关调控蛋白PDE-4和ERK对学习记忆的影响

近年来在动物身上进行了大量的学习记忆实验,均提示cAMP/PKA/CREB信号通路中的各蛋白均与学习记忆过程有关。环磷酸腺苷(cAMP)激活蛋白激酶A磷酸化并激活cAMP反应单元结合蛋白(CREB),后者是一种重要的核蛋白,其调节启动子中具有cAMP反应单元(CRE)的基因转录,这种核转录因子具有调节包括学习记忆在内的广泛的生物学功能。已有研究证实,PDE4和ERK为cAMP/PKA/CREB信号通路的调节蛋白。现对cAMP/PKA/CREB信号通路中的各蛋白及其调控蛋白PDE-4和ERK进行研究,阐述着三者之间的关系,并探讨其对学习记忆的影响。

行气调神针刺疗法对缺血性卒中后抑郁大鼠左前皮质及海马CREB和PDE4mRNA表达的影响

目的观察cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)在缺血性卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)发病中的作用及行气调神针刺疗法对其的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、行气调神针刺组、西药组,每组各20只。采用大脑中动脉电凝结合应激和孤养的方法复制PSD模型。针刺组取"人中"、双侧"合谷"和双侧"太冲",针刺治疗6周,西药组予以盐酸氟西汀灌胃治疗6周。采用RT-PCR检测左前皮质及海马CREB mRNA和PDE4mRNA的表达水平。结果最终各组样本量为11。与正常组比较,模型组大鼠左前皮质及海马CREB mRNA表达水平显著下调(P<0.01),PDE4mRNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,西药组及针刺组大鼠左前皮质及海马CREB mRNA表达水平显著上调(P<0.01),PDE4mRNA表达水平显著下调(P<0.01)。结论行气调神针刺疗法治疗PSD的机制与上调脑组织CREB mRNA的表达和下调PDE4mRNA的表达有关。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)在透明细胞性肾细胞癌(ccRCC)患者ccRCC组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法收集76例ccRCC患者的ccRCC组织及其中32例患者的癌旁(距肿瘤外缘≥5 cm)正常组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色法检测不同组织中CPEB4 mRNA和蛋白的表达情况,分析ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达情况与ccRCC患者临床特征及预后的关系,以及ccRCC患者预后的影响因素。结果ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4蛋白的高表达率和CPEB4 mRNA的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。不同年龄、性别、肿瘤部位的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同TNM分期、世界卫生组织(WHO)组织学分级和淋巴结转移情况的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox比例风险模型分析结果显示,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。CPEB4 mRNA阴性表达患者的3年生存率明显高于CPEB4 mRNA阳性表达患者(P﹤0.01)。结论TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素,CPEB4的表达情况对临床ccRCC治疗方案的选择及ccRCC患者预后的评估具有重要的临床指导价值。

siRNA干扰CPEB4基因表达对胶质瘤侵袭与生长的影响

目的探讨胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)在胶质瘤发生发展过程中的作用。方法免疫组化、Western blot及Real Time PCR法检测胶质瘤组织和细胞中CPEB4的表达情况,Western blot及Real Time PCR法检测CPEB4 siRNA的干扰效率,裸鼠成瘤试验测定CPEB4基因表达下调后胶质瘤细胞在体内致瘤情况。结果免疫组化、Western blot和Real Time PCR结果显示脑胶质瘤组织CPEB4的蛋白和mRNA表达明显升高,随着WHO分级的增加,CPEB4的蛋白和mRNA水平也显著增加。Western blot和Real Time PCR结果显示U87细胞系CPEB4的蛋白和mRNA水平显著高于胶质瘤细胞系U251。在体干扰CPEB4表达能显著降低肿瘤的体积和质量。结论脑胶质瘤组织和细胞高表达CPEB4基因,在体干扰CPEB4表达能显著抑制脑胶质瘤细胞的生长,CPEB4可能成为治疗胶质瘤的重要靶点。

miR-29c-5p负性调控CPEB4对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-29c-5p对胞质多聚腺苷酸化原件结合蛋白4(CPEB4)的负性调控作用,以及对肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖、迁移的影响。方法采用Lipofectamine TM 2000将miR-NC(miR-NC组)、miR-29c-5p mimics(miR-29c-5p mimics组)、miR-29c-5p inhibitor(miR-29c-5p inhibitor组)、miR-29c-5p inhibitor+si-CPEB4转染(si-CPEB4+miR-29c-5p inhibitor组)转染至Caki-1细胞。采用MTT法和Transwell实验检测各组细胞增殖和迁移活性的影响,采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测各组miR-29c-5p、CPEB4 mRNA和蛋白的表达水平。结果miR-29c-5p mimics组细胞的增殖和迁移活性明显低于miR-NC组(P<0.05);而miR-29c-5p inhibitor组细胞的增殖和迁移活性明显高于miR-NC组(P<0.05)。miR-29c-5p mimics组CPEB4 mRNA和蛋白的表达水平明显低于miR-NC组和miR-29c-5p inhibitor组,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-29c-5p inhibitor组CPEB4 mRNA和蛋白的表达量明显高于miR-NC组和miR-29c-5p mimics组,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默CPEB4基因表达后,miR-29c-5p inhibitor组miR-29c-5p表达水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与miR-29c-5p inhibitor组比较,si-CPEB4+miR-29c-5p inhibitor组细胞的增殖和迁移活性明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-29c-5p可负性调控CPEB4的表达,从而抑制肾透明细胞癌的增殖和迁移活性。

PD-L1、CPEB4和GRP在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系研究

目的分析程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)、胃泌素释放肽(GRP)在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性选取辽宁省健康产业集团铁煤总医院2015年2月至2018年11月收治的94例脑胶质瘤患者取手术切除的癌组织作为脑胶质瘤组(94例)同时取距离肿瘤组织5 mm处的组织作为癌旁组(94例),另取同期颅脑损伤减压术切除的脑组织作为正常对照组(87例)。采用免疫组化法检测三组PD-L1、CPEB4、GRP表达情况;分析PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤患者不同临床病理特征中的表达差异,并比较预后良好组和预后不良组临床病理特征脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP表达;通过Logistic回归分析PD-L1、CPEB4、GRP对预后的影响。结果脑胶质瘤组患者组织中PD-L1、CPEB4、GRP强阳性及阳性表达率高于癌旁组、正常对照组差异有统计学意义(P <0.05)。脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP在WHO分级Ⅲ~Ⅳ级中阳性率高于Ⅰ~Ⅱ级在KPS评分<80分患者中阳性率高于KPS评分≥80分患者差异有统计学意义(P<0.05)。患者随访1~3年,出现复发者16例(17.02%),肿瘤源性死亡4例(4.26%),预后不良共20例(21.28%)。预后不良组患者PD-L1、CPEB4、GRP阳性表达率高于预后良好组差异有统计学意义(P <0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PD-L1、CPEB4、GRP阳性是脑胶质瘤患者预后不良的危险因素(B=2.535、2.164、2.373,95%CI=1.513~105.257、1.764~42.973、1.274~90.311,均P<0.05)。结论 PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤组织中阳性表达率增高且与WHO分级、KPS评分有关,并影响患者预后,检测PD-L1、CPEB4、GRP对脑胶质瘤患者的病理分级和预后评估具有重要意义。

胶质瘤患者CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的分析胶质瘤患者多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL蛋白的表达及预后影响因素。方法选取2014年1月-2018年1月200例胶质瘤患者的瘤体组织作为肿瘤组,另取其正常癌旁组织作为癌旁组。检测2组的CPEB4和Bcl-xL的表达水平、并通过多因素Logistic回归分析研究胶质瘤患者的预后影响因素。结果肿瘤组的CPEB4和Bcl-xL阳性率高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤直径越大、CPEB4和Bcl-xL表达水平越高的胶质瘤患者预后越差(P<0.05),卡氏行为状态(KPS)评分越高、术后进行放疗、切除范围大的胶质瘤患者预后越好(P<0.05)。结论CPEB4和Bcl-xL的表达在胶质瘤患者的发生和发展过程中发挥着重要的作用,CPEB4和Bcl-xL的表达水平、肿瘤直径、KPS评分、术后放疗、切除范围等均可作为胶质瘤患者预后的评估指标。

CPEB4基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制

目的 探讨干扰胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制。方法 将48只8~12周龄SD大鼠随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS)诱导脓毒症大鼠]、shRNA-NC组(LPS诱导脓毒症+shRNA-NC)和shRNA-CPEB4组(LPS诱导脓毒症心肌损伤+shRNA-CPEB4)。建模完成后,通过彩色多普勒超声测定心率、左心室射血分数(LVEF)及左心室壁厚度(LVWT);苏木精-伊红(HE)和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察大鼠心肌组织病理变化;观察4组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠心肌组织CPEB4表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测大鼠心肌组织CPEB4、p38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果 模型组CPEB4蛋白及mRNA表达高于正常组(P<0.05),shRNA-CPEB4组CPEB4蛋白及mRNA表达低于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心率、LVEF和LVWT水平低于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组心率、LVEF和LVWT水平高于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心肌组织遭到严重破坏,细胞凋亡增多,而shRNA-CPEB4组心肌组织损伤有所改善,细胞凋亡减少。模型组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较正常组明显增加(P<0.05);shRNA-CPEB4组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较shRNA-NC组明显降低(P<0.05)。模型组、p-ERK1/2/ERK1/2磷酸化p38(p-p38)/p38蛋白水平高于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38蛋白水平低于shRNA-NC组(P<0.05)。结论 脓毒症可破坏大鼠心功能,改变心肌组织结构;干扰CPEB4基因后,可通过ERK/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路和p38 MAPK通路抑制脓毒症诱导大鼠心肌细胞凋亡。

非小细胞肺癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平及临床意义

目的分析非小细胞肺癌组织中微小RNA-454-3p(miR-454-3p)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白1(CPEB1)信使RNA(mRNA)表达水平与临床病理特征及预后的相关性。方法选取2014年4月—2016年3月在中国科学院合肥肿瘤医院确诊为非小细胞肺癌患者96例,术中取其癌组织设为肺癌组,癌旁正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测2组miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平;以二者表达水平均值为界,再分为miR-454-3p低表达亚组、高表达亚组和CPEB1 mRNA低表达亚组、高表达亚组,分析癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与患者临床病理特征及预后的关系;Logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者预后的因素。结果肺癌组miR-454-3p表达水平高于对照组,CPEB1 mRNA表达水平低于对照组(t/P=14.130/0.000、12.541/0.000)。患者癌组织miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与性别、年龄、吸烟史、分化程度无关(P>0.05),与肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期有关(miR-454-3p:χ^(2)/P=7.102/0.008、13.577/0.000、9.687/0.002、14.291/0.000;CPEB1 mRNA:χ^(2)/P=10.816/0.001、18.288/0.000、14.122/0.000、16.239/0.000);癌组织miR-454-3p与CPEB1 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.524/0.000)。miR-454-3p高表达患者5年生存率低于miR-454-3p低表达患者(χ^(2)/P=7.012/0.008),CPEB1 mRNA高表达患者5年生存率高于CPEB1 mRNA低表达患者(χ^(2)/P=4.112/0.043);miR-454-3p高表达、淋巴结远处转移是影响非小细胞肺癌患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=2.255(1.725~2.948)、1.987(1.428~2.765)],CPEB1 mRNA高表达是影响患者死亡的保护因素[OR(95%CI)=0.677(0.518~0.886)]。结论非小细胞肺癌组织中miR-454-3p呈高表达,CPEB1 mRNA呈低表达,且二者均与患者肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期及预后有关。