环状RNA MYO9A_043通过下调CPEB4表达发挥抑制小鼠心脏成纤维细胞纤维化表型的作用

目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-qPCR和Western blot实验检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain, Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2, Acta2)的表达。利用划痕实验检测mCFs的迁移能力。利用RNA测序分析和RT-qPCR验证circMYO9A_043对mCFs中胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)等基因的下调作用。利用腺病毒介导mCFs过表达CPEB4,检测CPEB4对纤维化相关基因表达的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测CPEB4与纤维化相关基因的结合作用。进一步通过放线菌素D处理实验,检测mCFs中CPEB4对Col1a1、Col3a1和Acta2 mRNA的稳定作用。结果:利用腺病毒可以有效介导circMYO9A_043在mCFs中过表达。circMYO9A_043可显著下调Col1a1、Col3a1和Acta2表达,抑制mCFs的迁移能力(P<0.05)。circMYO9A_043可显著降低mCFs中CPEB4的表达(P<0.01),过表达CPEB4可逆转circMYO9A_043对纤维化相关基因表达的抑制作用。RIP实验显示CPEB4与mCFs中纤维化相关基因的mRNA有显著结合作用(P<0.01),而放线菌素D处理实验结果显示CPEB4可显著增强上述基因mRNA的稳定性(P<0.05)。结论:circMYO9A_043通过下调CPEB4的表达而抑制mCFs纤维化表型。

胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的:检测胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL在胶质瘤组织中的表达,并探讨二者及多种临床病理因素与患者预后的关系。方法:应用免疫组化染色检测165例不同级别胶质瘤(低级别69例,高级别96例)组织中CPEB4和Bcl-xL的表达情况,采用logistic回归分析探讨影响胶质瘤预后的危险因素。结果:高级别胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的阳性表达率均高于低级别胶质瘤组织(χ2=28.971和17.601,P<0.05)。单因素分析显示,患者术前KPS评分、肿瘤直径、肿瘤切除范围、术后放疗、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达对3 a生存率有影响(P<0.05),构建的判别函数判别符合率达90.9%;多因素分析表明,术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达是影响胶质瘤患者3 a生存率的独立因素(P<0.05),判别函数Y=-0.644+1.386X3+1.052X5+1.248X6-2.679X10-1.042X11-2.659X12,判别符合率达88.3%。结论:CPEB4和Bcl-xL阳性表达与胶质瘤恶性程度有关;术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达可作为考察胶质瘤患者预后情况的重要指标。

CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)在透明细胞性肾细胞癌(ccRCC)患者ccRCC组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法收集76例ccRCC患者的ccRCC组织及其中32例患者的癌旁(距肿瘤外缘≥5 cm)正常组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色法检测不同组织中CPEB4 mRNA和蛋白的表达情况,分析ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达情况与ccRCC患者临床特征及预后的关系,以及ccRCC患者预后的影响因素。结果ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4蛋白的高表达率和CPEB4 mRNA的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。不同年龄、性别、肿瘤部位的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同TNM分期、世界卫生组织(WHO)组织学分级和淋巴结转移情况的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox比例风险模型分析结果显示,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。CPEB4 mRNA阴性表达患者的3年生存率明显高于CPEB4 mRNA阳性表达患者(P﹤0.01)。结论TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素,CPEB4的表达情况对临床ccRCC治疗方案的选择及ccRCC患者预后的评估具有重要的临床指导价值。

PD-L1、CPEB4和GRP在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系研究

目的分析程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)、胃泌素释放肽(GRP)在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性选取辽宁省健康产业集团铁煤总医院2015年2月至2018年11月收治的94例脑胶质瘤患者取手术切除的癌组织作为脑胶质瘤组(94例)同时取距离肿瘤组织5 mm处的组织作为癌旁组(94例),另取同期颅脑损伤减压术切除的脑组织作为正常对照组(87例)。采用免疫组化法检测三组PD-L1、CPEB4、GRP表达情况;分析PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤患者不同临床病理特征中的表达差异,并比较预后良好组和预后不良组临床病理特征脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP表达;通过Logistic回归分析PD-L1、CPEB4、GRP对预后的影响。结果脑胶质瘤组患者组织中PD-L1、CPEB4、GRP强阳性及阳性表达率高于癌旁组、正常对照组差异有统计学意义(P <0.05)。脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP在WHO分级Ⅲ~Ⅳ级中阳性率高于Ⅰ~Ⅱ级在KPS评分<80分患者中阳性率高于KPS评分≥80分患者差异有统计学意义(P<0.05)。患者随访1~3年,出现复发者16例(17.02%),肿瘤源性死亡4例(4.26%),预后不良共20例(21.28%)。预后不良组患者PD-L1、CPEB4、GRP阳性表达率高于预后良好组差异有统计学意义(P <0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PD-L1、CPEB4、GRP阳性是脑胶质瘤患者预后不良的危险因素(B=2.535、2.164、2.373,95%CI=1.513~105.257、1.764~42.973、1.274~90.311,均P<0.05)。结论 PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤组织中阳性表达率增高且与WHO分级、KPS评分有关,并影响患者预后,检测PD-L1、CPEB4、GRP对脑胶质瘤患者的病理分级和预后评估具有重要意义。

CPEB4基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制

目的 探讨干扰胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制。方法 将48只8~12周龄SD大鼠随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS)诱导脓毒症大鼠]、shRNA-NC组(LPS诱导脓毒症+shRNA-NC)和shRNA-CPEB4组(LPS诱导脓毒症心肌损伤+shRNA-CPEB4)。建模完成后,通过彩色多普勒超声测定心率、左心室射血分数(LVEF)及左心室壁厚度(LVWT);苏木精-伊红(HE)和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察大鼠心肌组织病理变化;观察4组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠心肌组织CPEB4表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测大鼠心肌组织CPEB4、p38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果 模型组CPEB4蛋白及mRNA表达高于正常组(P<0.05),shRNA-CPEB4组CPEB4蛋白及mRNA表达低于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心率、LVEF和LVWT水平低于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组心率、LVEF和LVWT水平高于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心肌组织遭到严重破坏,细胞凋亡增多,而shRNA-CPEB4组心肌组织损伤有所改善,细胞凋亡减少。模型组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较正常组明显增加(P<0.05);shRNA-CPEB4组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较shRNA-NC组明显降低(P<0.05)。模型组、p-ERK1/2/ERK1/2磷酸化p38(p-p38)/p38蛋白水平高于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38蛋白水平低于shRNA-NC组(P<0.05)。结论 脓毒症可破坏大鼠心功能,改变心肌组织结构;干扰CPEB4基因后,可通过ERK/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路和p38 MAPK通路抑制脓毒症诱导大鼠心肌细胞凋亡。

胶质瘤患者CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的分析胶质瘤患者多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL蛋白的表达及预后影响因素。方法选取2014年1月-2018年1月200例胶质瘤患者的瘤体组织作为肿瘤组,另取其正常癌旁组织作为癌旁组。检测2组的CPEB4和Bcl-xL的表达水平、并通过多因素Logistic回归分析研究胶质瘤患者的预后影响因素。结果肿瘤组的CPEB4和Bcl-xL阳性率高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤直径越大、CPEB4和Bcl-xL表达水平越高的胶质瘤患者预后越差(P<0.05),卡氏行为状态(KPS)评分越高、术后进行放疗、切除范围大的胶质瘤患者预后越好(P<0.05)。结论CPEB4和Bcl-xL的表达在胶质瘤患者的发生和发展过程中发挥着重要的作用,CPEB4和Bcl-xL的表达水平、肿瘤直径、KPS评分、术后放疗、切除范围等均可作为胶质瘤患者预后的评估指标。

CPEB4沉默对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨胞质聚腺苷酸化物结合蛋白4(CPEB4)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌Siha细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法采集本院2017年5月—2018年5月42例宫颈癌患者手术切除的癌变组织及其正常癌旁组织,采用实时定量PCR和Western blot方法检测宫颈癌及其癌旁组织中CPEB4的表达;采用siRNA转染沉默宫颈癌Siha细胞中CPEB4的表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测P53、Twist1的蛋白表达.结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中CPEB4 mRNA和蛋白表达均显著上调;转染CPEB4 siRNA的Siha细胞增殖活性减弱,迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05),且细胞中P53蛋白表达上调、Twist1蛋白表达显著下调(P<0.05).结论 CPEB4在宫颈癌中高表达,可能通过调控P53和Twist1的表达影响宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭,有望成为宫颈癌诊断标志物及潜在的治疗靶点.

细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4、缺氧诱导因子-1在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用

目的探讨细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用。方法收集149例脑胶质瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。比较肿瘤组织及癌旁正常组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,术后对患者随访1年,记录复发情况,比较复发与未复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,并分析脑胶质瘤患者术后复发的影响因素。结果脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。术后复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均高于未复发患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析显示,肿瘤直径≥5 cm、CPEB4阳性表达、HIF-1阳性表达均为脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素(P﹤0.05)。结论CPEB4、HIF-1在脑胶质瘤组织中阳性表达率均明显增高,是脑胶质瘤患者术后复发的危险因素,临床可通过检测两种指标为脑胶质瘤患者的预后评估提供参考。

吲哚胺2,3-双加氧酶和胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4在胃癌组织的表达及临床意义

目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)在胃癌及癌旁组织的差异表达及临床意义。方法收集92例胃癌肿瘤标本,应用免疫组织化学方法检测IDO和CPEB4在胃癌组织和癌旁组织的表达水平。结果IDO在胃癌组织的阳性表达率为65.22%(60/92),明显高于胃癌癌旁组织阳性表达率[38.04%(35/92),t=13.60,P<0.01],IDO表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(分别为t=7.64、5.37,P<0.05);CPEB4在胃癌组织的阳性表达率为57.61%(53/92),明显高于胃癌癌旁组织阳性表达率[32.61%(30/92),t= 11.61,P<0.01],CPEB4表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(分别为t= 5.58、6.85、7.35,P<0.05)。结论IDO和CPEB4的表达水平与胃癌的发生、发展明显相关。

脑胶质瘤中胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4的表达情况及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的观察脑胶质瘤中胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)的表达情况,以及CPEB4对胶质瘤细胞U87生长的影响。方法测定脑胶质瘤和脑组织中CPEB4蛋白含量。测定细胞中CPEB4蛋白表达、细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期及CPEB4、PIK3CA、IGF2、SMAD3、IDH1和AKT1 mRNA的表达。结果低级别脑胶质瘤组织和高级别脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白阳性表达率高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白阳性表达率高于低级别脑胶质瘤组织(P<0.05)。低级别脑胶质瘤组织和高级别脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白水平高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白水平高于低级别脑胶质瘤组织(P<0.05)。转染后24 h,CPEB4-shRNA组U87细胞中CPEB4蛋白水平低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。培养第3天和第7天,CPEB4-shRNA组细胞的A490值低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。CPEB4-shRNA组早期细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。CPEB4-shRNA组G1期细胞明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),S期细胞明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。CPEB4-shRNA组CPEB4 mRNA、PIK3CA mRNA、IGF2 mRNA和SMAD3 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 CPEB4在脑胶质瘤中高表达,CPEB4参与脑胶质瘤细胞的生长,CPEB4对脑胶质瘤细胞的影响可能和CPEB4、PIK3CA、IGF2和SMAD3水平有一定关系。

miR-25-3p调控CPEB4基因对人肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-25-3p和CPEB4基因在人肺癌A549细胞中的表达,阐明miR-25-3p对CPEB4基因的靶向作用及其对A549细胞侵袭和迁移的影响。方法采用免疫荧光化学技术检测CPEB4在A549细胞中的表达;运用生物信息学方法对miR-25-3p和CPEB4基因的靶向配对关系进行预测;脂质体2000转染miR-25-3p模拟物以及干扰CPEB4基因的siRNA后,采用Real-time PCR检测miR-25-3p和CPEB4基因mRNA在癌细胞中的表达;Western blot法检测CPEB4蛋白在癌细胞中的表达;Transwell小室试验检测癌细胞体外的侵袭性;细胞划痕试验检测癌细胞的迁移情况。结果 A549细胞胞质内CPEB4蛋白高表达,呈绿色荧光;miR-25-3p和CPEB4基因二者靶向配对良好;过表达miR-25-3p能降低A549细胞中CPEB4基因mRNA和蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭和迁移。结论 miR-25-3p通过下调人肺癌A549细胞中CPEB4基因的表达,进而抑制癌细胞的侵袭和迁移。

胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4对胶质瘤细胞生长的影响

目的探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation-element-binding protein,CPEB4)在脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响。方法测定脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白表达、脑胶质瘤组织和细胞中CPEB4 m RNA水平、细胞中CPEB4蛋白、PIK3CA蛋白、SMAD3蛋白的表达、细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖和细胞的侵袭能力。结果低级别脑组织和高级别脑组织中CPEB4蛋白阳性率高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑组织中CPEB4蛋白阳性率高于低级别脑组织(P<0.05);低级别脑组织和高级别脑组织中CPEB4蛋白水平高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑组织中CPEB4蛋白水平高于低级别脑组织(P<0.05);SiRNA-CPEB4组细胞CPEB4蛋白表达量低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNA-CPEB4组早期细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNA-CPEB4组G1期细胞比例高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05),SiRNA-CPEB4组S期细胞比例低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNACPEB4组第3天、第7天细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);SiRNA-CPEB4组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白对照组;SiRNA-CPEB4组细胞PIK3CA蛋白、SMAD3蛋白表达量均低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中CPEB4水平升高,CPEB4影响脑胶质瘤细胞的凋亡、细胞周期、增殖和侵袭,其机制可能和PIK3CA、SMAD3有关。

miR-203负性调控CPEB4基因对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响

目的探讨mi R-203对胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein4,CPEB4)基因的靶向作用及对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响。方法采用免疫组化法检测CPEB4在人脑胶质瘤U87细胞中的表达,生物信息学方法预测mi R-203与CPEB4基因的靶向配对关系,并应用Dual-Luciferase誖报告系统鉴定;将mi R-203 mimics及si RNA转染U87细胞,Real-time PCR法检测mi R-203和CPEB4 m RNA水平,Western blot法检测CPEB4蛋白的表达,平板克隆形成试验检测癌细胞的增殖情况。结果光镜下可见U87细胞均匀分布,但细胞形态多样性明显,胞质内有CPEB4蛋白高表达,呈棕褐色;mi R-203与CPEB4基因靶向配对良好,mi R-203能够抑制CPEB4 m RNA水平。过表达mi R-203能够降低CPEB4 m RNA和蛋白的表达,抑制U87细胞的增殖。结论mi R-203通过负性调控人脑胶质瘤U87细胞中CPEB4基因的表达,进而抑制癌细胞的增殖。

miR-130a-3p通过下调CPEB4增加胶质母细胞瘤替莫唑胺的敏感性

目的探索miR-130a-3p对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化疗敏感性的影响与机制。方法采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测胶质瘤细胞T98G细胞和TMZ耐药T98G-R细胞中miR-130a-3p以及胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)的相对表达水平。四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胶质瘤细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光素酶报告实验检测miR-130a-3p与CPEB4的结合。结果T98G-R耐药细胞中miR-130a-3p表达水平较T98G细胞降低(0.25±0.08 vs.1.00±0.05,P<0.01),CPEB4表达水平较T98G细胞升高(1.37±0.17 vs.1.00±0.05,P<0.01)。MTT实验及流式细胞术结果表明,miR-130a-3p过表达可抑制胶质瘤细胞的增殖,促进TMZ诱导的细胞凋亡,但其可以被CPEB4过表达所逆转。荧光素酶报告实验显示,miR-130a-3p可以与CPEB4的3′-非翻译区结合,过表达miR-130a-3p抑制CPEB4的表达。结论miR-130a-3p通过靶向抑制CPEB4表达,促进胶质瘤细胞凋亡,增加GBM对TMZ的敏感性。