miR-760/CPEB2轴对急性淋巴细胞白血病细胞凋亡和增殖的影响

目的探究miR-760对急性淋巴细胞白血病(ALL)凋亡和增殖的影响和机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-760和细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白2(CPEB2)相对表达。Ball-1细胞分为不同组:miR-NC组(转染miR-NC)、miR-760mimic组(转染miR-760 mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-CPEB2组(转染si-CPEB2)、oe-NC组(转染oe-NC)、oe-CPEB2组(转染oe-CPEB2)、miR-760 mimic+oe-NC组(共转染miR-760 mimic+oe-NC)和miR-760 mimic+oe-CPEB2组(共转染miR-760 mimic+oe-CPEB2)。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、c-caspase-3、t-caspase-3、Ki67、PCNA和CPEB2相对表达量。双荧光素酶报告实验验证miR-760和CPEB2靶向结合。结果与人B淋巴母细胞HMy2.CIR比较,ALL细胞系Ball-1、Reh和JurkatE6中miR-760水平表达下降,CPEB2 mRNA和蛋白水平表达上升(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-760 mimic组细胞凋亡率、Bax和c-caspase-3水平表达上升,而Ki67和PCNA水平表达下降(P<0.05)。生物信息学方法预测miR-760靶向调控CPEB2,双荧光素酶报告实验验证CPEB2是miR-760的靶标。与si-NC组比较,si-CPEB2组细胞凋亡率、Bax和c-caspase-3水平表达上升,而Ki67、PCNA水平表达下降(P<0.05)。上调CPEB2表达能逆转miR-760过表达对细胞凋亡率、Bax、ccaspase-3的促进和对Ki67、PCNA的抑制(P<0.05)。结论miR-760靶向调节CPEB2,诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,为ALL治疗提供新选择。

环状RNA MYO9A_043通过下调CPEB4表达发挥抑制小鼠心脏成纤维细胞纤维化表型的作用

目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-qPCR和Western blot实验检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain, Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2, Acta2)的表达。利用划痕实验检测mCFs的迁移能力。利用RNA测序分析和RT-qPCR验证circMYO9A_043对mCFs中胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)等基因的下调作用。利用腺病毒介导mCFs过表达CPEB4,检测CPEB4对纤维化相关基因表达的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测CPEB4与纤维化相关基因的结合作用。进一步通过放线菌素D处理实验,检测mCFs中CPEB4对Col1a1、Col3a1和Acta2 mRNA的稳定作用。结果:利用腺病毒可以有效介导circMYO9A_043在mCFs中过表达。circMYO9A_043可显著下调Col1a1、Col3a1和Acta2表达,抑制mCFs的迁移能力(P<0.05)。circMYO9A_043可显著降低mCFs中CPEB4的表达(P<0.01),过表达CPEB4可逆转circMYO9A_043对纤维化相关基因表达的抑制作用。RIP实验显示CPEB4与mCFs中纤维化相关基因的mRNA有显著结合作用(P<0.01),而放线菌素D处理实验结果显示CPEB4可显著增强上述基因mRNA的稳定性(P<0.05)。结论:circMYO9A_043通过下调CPEB4的表达而抑制mCFs纤维化表型。

CPEB3在人舌鳞状细胞癌组织中的表达及与临床病理特征相关性分析

目的:探讨人舌鳞状细胞癌(TSCC)组织中胞质多聚腺苷化元件结合蛋白3(CPEB3)的表达及其临床意义。方法:通过UALCAN在线分析CPEB3在头颈部鳞状细胞癌(HNSC)组织中的差异表达及其与临床特征的相关性,免疫组织化学法检测CPEB3在TSCC和癌旁组织中的表达,分析CPEB3表达水平与TSCC病人病理特征间的相关性。结果:生物信息学分析结果显示,CPEB3在HNSC组织中的表达量明显低于正常组织(P<0.01)。与正常组织相比,CPEB3在不同分期和分化程度的HNSC病人中表达量降低(P<0.05);CPEB3低表达的HNSC病人的3年生存率低于CPEB3高表达的病人(P<0.05)。与癌旁组织相比,CPEB3在TSCC组织中低表达(P<0.01);CPEB3的表达与TSCC病人的性别和年龄无明显相关性(P>0.05),而与TNM分期、病理分级和淋巴结转移有相关性(P<0.05~P<0.01)。结论:CPEB3在TSCC中低表达,并与TNM分期、分化程度和淋巴结转移相关,CPEB3可能为TSCC诊断和治疗的潜在生物标志物。

胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的:检测胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL在胶质瘤组织中的表达,并探讨二者及多种临床病理因素与患者预后的关系。方法:应用免疫组化染色检测165例不同级别胶质瘤(低级别69例,高级别96例)组织中CPEB4和Bcl-xL的表达情况,采用logistic回归分析探讨影响胶质瘤预后的危险因素。结果:高级别胶质瘤组织中CPEB4和Bcl-xL的阳性表达率均高于低级别胶质瘤组织(χ2=28.971和17.601,P<0.05)。单因素分析显示,患者术前KPS评分、肿瘤直径、肿瘤切除范围、术后放疗、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达对3 a生存率有影响(P<0.05),构建的判别函数判别符合率达90.9%;多因素分析表明,术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达是影响胶质瘤患者3 a生存率的独立因素(P<0.05),判别函数Y=-0.644+1.386X3+1.052X5+1.248X6-2.679X10-1.042X11-2.659X12,判别符合率达88.3%。结论:CPEB4和Bcl-xL阳性表达与胶质瘤恶性程度有关;术前KPS评分、肿瘤切除范围、术后化疗、病理级别、CPEB4和Bcl-xL的表达可作为考察胶质瘤患者预后情况的重要指标。

CPEB1与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度和预后的关系

目的探讨胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白1(CPEB1)与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度和预后的关系。方法选取2008年5月—2014年12月收集的68例人脑胶质瘤组织和68例瘤旁正常组织,回顾性分析所有标本来源患者的临床及随访资料,观察2组CPEB1与Bcl-xL蛋白的表达情况,并分析影响预后的危险因素。结果脑胶质瘤组织CPEB1与Bcl-xL蛋白阳性表达率均高于瘤旁正常组织(P <0. 05)。CPEB1与Bcl-xL蛋白阳性表达患者3年总生存率均低于阴性表达者(P <0. 05)。肿瘤分级过高、分化程度过低、出现淋巴结转移、术前KPS评分过低、术后未进行放化疗及CPEB1和Bcl-xL蛋白阳性均为影响人脑胶质瘤患者预后的独立危险因素(P <0. 05)。结论 CPEB1与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤患者其癌组织中均以高水平表达,且随着病情的加重其阳性表达率均上升,且过高表达均为影响人脑胶质瘤患者预后的独立危险因素,故临床可将其作为评估人脑胶质瘤患者病情及预后的有效指标。

CPEB-4蛋白在癫痫致痫灶中的表达及临床意义

目的:通过观察CPEB-4蛋白在难治性癫痫患者致痫灶中的表达,探讨其在癫痫发病、发展过程中及对癫痫手术治疗预后判断的作用。方法:用免疫组织化学方法检测42例难治性癫痫患者(癫痫组)致痫灶和12例行神经外科减压或清创患者(对照组)的脑组织标本中CPEB-4蛋白的表达,并与癫痫病程、发病频率、手术预后等进行相关性分析。结果:CPEB-4在正常脑组织和癫痫患者脑组织中均有表达,致痫灶内CPEB-4表达明显高于对照组(P<0.05),CPEB-4的表达与患者性别无相关性,但与癫痫病程、发作频率呈正相关,与手术预后呈负相关。结论:CPEB-4蛋白可能与难治性癫痫发生、发展有密切关系,为癫痫发病机制的研究提供新思路,为药物治疗癫痫提供了新的靶点,同时也为手术治疗癫痫的预后判断提供了依据。

下调miR-183靶向肿瘤抑制因子CPEB1增强脑胶质瘤细胞的放射敏感性

目的:探讨miR-183对脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法:2020年10月至2021年6月,收集秦皇岛市第一医院40例脑胶质瘤组织标本,对T98G细胞进行梯度剂量X射线(0、2、4、6 Gy)照射。采用qPCR检测miR-183、细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白1(cytoplasmic polyadenylation element-binding protein 1,CPEB1)在脑胶质瘤组织、T98G细胞和经X射线照射的T98G细胞中的表达量。将miR-183 inhibitor转染T98G细胞后下调miR-183表达,经6 Gy X射线垂直照射,CCK-8法、流式细胞术和WB法,分别检测T98G细胞增殖能力、细胞凋亡率及BAX和Bcl2蛋白表达量。Targetscan软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR-183与CPEB1的靶向关系。下调CPEB1表达后,经6 Gy X射线照射,分别用CCK-8法、流式细胞术和WB法检测T98G细胞增殖能力、细胞凋亡率及BAX和Bcl2蛋白表达量。将pcDNA-CPEB1或CPEB1 siRNA质粒转染T98G细胞,分别下调或过表达CPEB1后,检测miR-183通过CPEB1对T98G细胞放射敏感性的影响。结果:脑胶质瘤组织和细胞中miR-183呈高表达,CPEB1 mRNA呈低表达。T98G细胞中miR-183的表达量随着X射线放射剂量增加而降低(P<0.05),CPEB1表达量随着X射线放射剂量增加而升高(P<0.05)。6 Gy X射线照射T98G细胞后,下调miR-183可降低细胞增殖能力、增加细胞凋亡率,而过表达miR-183则起到相反作用(P<0.05)。miR-183靶向CPEB1 mRNA且负调控CPEB1表达。下调CPEB1表达后,经6 Gy X射线照射可显著提高T98G细胞增殖能力(P<0.05)、降低细胞凋亡率(P<0.05),miR-183可逆转CPEB1过表达对细胞T98G放射敏感性的促进作用(P<0.05)。结论:下调miR-183的表达能够负调控CPEB1,从而增强脑胶质瘤细胞的放射敏感性。

CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)在透明细胞性肾细胞癌(ccRCC)患者ccRCC组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法收集76例ccRCC患者的ccRCC组织及其中32例患者的癌旁(距肿瘤外缘≥5 cm)正常组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色法检测不同组织中CPEB4 mRNA和蛋白的表达情况,分析ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达情况与ccRCC患者临床特征及预后的关系,以及ccRCC患者预后的影响因素。结果ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4蛋白的高表达率和CPEB4 mRNA的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。不同年龄、性别、肿瘤部位的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同TNM分期、世界卫生组织(WHO)组织学分级和淋巴结转移情况的ccRCC患者ccRCC组织中CPEB4 mRNA的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox比例风险模型分析结果显示,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。CPEB4 mRNA阴性表达患者的3年生存率明显高于CPEB4 mRNA阳性表达患者(P﹤0.01)。结论TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和CPEB4 mRNA阳性表达均是ccRCC患者预后的独立危险因素,CPEB4的表达情况对临床ccRCC治疗方案的选择及ccRCC患者预后的评估具有重要的临床指导价值。

CPEB1对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响及机制

目的探讨胞质多聚腺苷酸结合蛋白1(CPEB1)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和迁移的影响及可能机制。方法取对数生长期的HUVECs细胞,分为实验组与对照组,分别用肿瘤细胞上清液培养基和普通培养基重悬细胞,Real-time PCR法和Western blotting法分别检测CPEB1及整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)的mRNA和蛋白表达;取对数生长期HUVECs细胞,待培养至细胞达70%~80%融合时用LipofectamineTM2000进行转染,细胞分为携带基因的质粒转染组(转染组)、不带任何基因的空质粒转染细胞组(转染对照组)和不经任何处理的细胞组(空白对照组)。MTT法检测转染后HUVECs的增殖能力,Transwell小室法检测转染后HUVECs的迁移能力,RT-PCR法检测ADAM17的mRNA表达,Western blotting法检测ADAM17蛋白表达。结果实验组中CPEB1的mRNA及蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),ADAM17的mRNA及蛋白表达均高于对照组(P均<0.05);转染48、72 h后,转染组吸光度值低于转染对照组和空白对照组(P均<0.05);转染组细胞穿过小室膜数目低于转染对照组和空白对照组(P均<0.05);转染组ADAMl7的mRNA和蛋白表达低于转染对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论 CPEB1可抑制HUVECs细胞增殖和迁移,其机制可能与调控ADAM17表达有关。

PD-L1、CPEB4和GRP在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系研究

目的分析程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)、胃泌素释放肽(GRP)在脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性选取辽宁省健康产业集团铁煤总医院2015年2月至2018年11月收治的94例脑胶质瘤患者取手术切除的癌组织作为脑胶质瘤组(94例)同时取距离肿瘤组织5 mm处的组织作为癌旁组(94例),另取同期颅脑损伤减压术切除的脑组织作为正常对照组(87例)。采用免疫组化法检测三组PD-L1、CPEB4、GRP表达情况;分析PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤患者不同临床病理特征中的表达差异,并比较预后良好组和预后不良组临床病理特征脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP表达;通过Logistic回归分析PD-L1、CPEB4、GRP对预后的影响。结果脑胶质瘤组患者组织中PD-L1、CPEB4、GRP强阳性及阳性表达率高于癌旁组、正常对照组差异有统计学意义(P <0.05)。脑胶质瘤组织中PD-L1、CPEB4、GRP在WHO分级Ⅲ~Ⅳ级中阳性率高于Ⅰ~Ⅱ级在KPS评分<80分患者中阳性率高于KPS评分≥80分患者差异有统计学意义(P<0.05)。患者随访1~3年,出现复发者16例(17.02%),肿瘤源性死亡4例(4.26%),预后不良共20例(21.28%)。预后不良组患者PD-L1、CPEB4、GRP阳性表达率高于预后良好组差异有统计学意义(P <0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PD-L1、CPEB4、GRP阳性是脑胶质瘤患者预后不良的危险因素(B=2.535、2.164、2.373,95%CI=1.513~105.257、1.764~42.973、1.274~90.311,均P<0.05)。结论 PD-L1、CPEB4、GRP在脑胶质瘤组织中阳性表达率增高且与WHO分级、KPS评分有关,并影响患者预后,检测PD-L1、CPEB4、GRP对脑胶质瘤患者的病理分级和预后评估具有重要意义。

CPEB4基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制

目的 探讨干扰胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)基因缓解脓毒症诱导的心肌损伤及作用机制。方法 将48只8~12周龄SD大鼠随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS)诱导脓毒症大鼠]、shRNA-NC组(LPS诱导脓毒症+shRNA-NC)和shRNA-CPEB4组(LPS诱导脓毒症心肌损伤+shRNA-CPEB4)。建模完成后,通过彩色多普勒超声测定心率、左心室射血分数(LVEF)及左心室壁厚度(LVWT);苏木精-伊红(HE)和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察大鼠心肌组织病理变化;观察4组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠心肌组织CPEB4表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测大鼠心肌组织CPEB4、p38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果 模型组CPEB4蛋白及mRNA表达高于正常组(P<0.05),shRNA-CPEB4组CPEB4蛋白及mRNA表达低于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心率、LVEF和LVWT水平低于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组心率、LVEF和LVWT水平高于shRNA-NC组(P<0.05)。模型组心肌组织遭到严重破坏,细胞凋亡增多,而shRNA-CPEB4组心肌组织损伤有所改善,细胞凋亡减少。模型组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较正常组明显增加(P<0.05);shRNA-CPEB4组心肌组织CK-MB、Mb和cTnI水平较shRNA-NC组明显降低(P<0.05)。模型组、p-ERK1/2/ERK1/2磷酸化p38(p-p38)/p38蛋白水平高于正常组(P<0.05);shRNA-CPEB4组p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38蛋白水平低于shRNA-NC组(P<0.05)。结论 脓毒症可破坏大鼠心功能,改变心肌组织结构;干扰CPEB4基因后,可通过ERK/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路和p38 MAPK通路抑制脓毒症诱导大鼠心肌细胞凋亡。

胶质瘤患者CPEB4和Bcl-xL的表达及预后影响因素分析

目的分析胶质瘤患者多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(CPEB4)和Bcl-xL蛋白的表达及预后影响因素。方法选取2014年1月-2018年1月200例胶质瘤患者的瘤体组织作为肿瘤组,另取其正常癌旁组织作为癌旁组。检测2组的CPEB4和Bcl-xL的表达水平、并通过多因素Logistic回归分析研究胶质瘤患者的预后影响因素。结果肿瘤组的CPEB4和Bcl-xL阳性率高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤直径越大、CPEB4和Bcl-xL表达水平越高的胶质瘤患者预后越差(P<0.05),卡氏行为状态(KPS)评分越高、术后进行放疗、切除范围大的胶质瘤患者预后越好(P<0.05)。结论CPEB4和Bcl-xL的表达在胶质瘤患者的发生和发展过程中发挥着重要的作用,CPEB4和Bcl-xL的表达水平、肿瘤直径、KPS评分、术后放疗、切除范围等均可作为胶质瘤患者预后的评估指标。

非小细胞肺癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平及临床意义

目的分析非小细胞肺癌组织中微小RNA-454-3p(miR-454-3p)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白1(CPEB1)信使RNA(mRNA)表达水平与临床病理特征及预后的相关性。方法选取2014年4月—2016年3月在中国科学院合肥肿瘤医院确诊为非小细胞肺癌患者96例,术中取其癌组织设为肺癌组,癌旁正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测2组miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平;以二者表达水平均值为界,再分为miR-454-3p低表达亚组、高表达亚组和CPEB1 mRNA低表达亚组、高表达亚组,分析癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与患者临床病理特征及预后的关系;Logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者预后的因素。结果肺癌组miR-454-3p表达水平高于对照组,CPEB1 mRNA表达水平低于对照组(t/P=14.130/0.000、12.541/0.000)。患者癌组织miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与性别、年龄、吸烟史、分化程度无关(P>0.05),与肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期有关(miR-454-3p:χ^(2)/P=7.102/0.008、13.577/0.000、9.687/0.002、14.291/0.000;CPEB1 mRNA:χ^(2)/P=10.816/0.001、18.288/0.000、14.122/0.000、16.239/0.000);癌组织miR-454-3p与CPEB1 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.524/0.000)。miR-454-3p高表达患者5年生存率低于miR-454-3p低表达患者(χ^(2)/P=7.012/0.008),CPEB1 mRNA高表达患者5年生存率高于CPEB1 mRNA低表达患者(χ^(2)/P=4.112/0.043);miR-454-3p高表达、淋巴结远处转移是影响非小细胞肺癌患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=2.255(1.725~2.948)、1.987(1.428~2.765)],CPEB1 mRNA高表达是影响患者死亡的保护因素[OR(95%CI)=0.677(0.518~0.886)]。结论非小细胞肺癌组织中miR-454-3p呈高表达,CPEB1 mRNA呈低表达,且二者均与患者肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期及预后有关。

CPEB4沉默对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨胞质聚腺苷酸化物结合蛋白4(CPEB4)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌Siha细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法采集本院2017年5月—2018年5月42例宫颈癌患者手术切除的癌变组织及其正常癌旁组织,采用实时定量PCR和Western blot方法检测宫颈癌及其癌旁组织中CPEB4的表达;采用siRNA转染沉默宫颈癌Siha细胞中CPEB4的表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测P53、Twist1的蛋白表达.结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中CPEB4 mRNA和蛋白表达均显著上调;转染CPEB4 siRNA的Siha细胞增殖活性减弱,迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05),且细胞中P53蛋白表达上调、Twist1蛋白表达显著下调(P<0.05).结论 CPEB4在宫颈癌中高表达,可能通过调控P53和Twist1的表达影响宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭,有望成为宫颈癌诊断标志物及潜在的治疗靶点.

细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4、缺氧诱导因子-1在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用

目的探讨细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用。方法收集149例脑胶质瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。比较肿瘤组织及癌旁正常组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,术后对患者随访1年,记录复发情况,比较复发与未复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,并分析脑胶质瘤患者术后复发的影响因素。结果脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。术后复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均高于未复发患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析显示,肿瘤直径≥5 cm、CPEB4阳性表达、HIF-1阳性表达均为脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素(P﹤0.05)。结论CPEB4、HIF-1在脑胶质瘤组织中阳性表达率均明显增高,是脑胶质瘤患者术后复发的危险因素,临床可通过检测两种指标为脑胶质瘤患者的预后评估提供参考。

CircPTK2调节miR-761/CPEB2轴对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨环状RNA蛋白酪氨酸激酶2(circPTK2)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法收集56例CRC样本(CRC组)及癌旁正常组织样本(对照组),体外培养人CRC细胞系(LoVo、HT-29、HCT116、SW480和SW620)和人正常结直肠粘膜细胞系(FHC),并建立DDP耐药的HCT116细胞(HCT116/DDP)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织/细胞中circPTK2、miR-761和细胞质多聚腺苷酸结合蛋白2(CPEB2)mRNA表达。取HCT116/DDP细胞分为对照(Control)组、si-NC组、si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组、si-circPTK2+miR-761 inhibitor组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测量各组细胞活力和DDP的半数抑制浓度(IC_(50))和增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移或侵袭数;Western blot检测细胞中CPEB2蛋白表达;qRT-PCR检测circPTK2水平;starBase数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/)预测miR-761与circPTK2或CPEB2的互补位点;将含有miR-761结合位点的circPTK2或CPEB23’UTR的野生型(WT)序列克隆到psiCHECK-2载体中以形成相应的荧光素酶报告载体(WT-circPTK2和WT-CPEB2),双荧光素酶报告基因分析系统检测荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circPTK2、miR-761和CPEB2的富集水平。结果与对照组比较,CRC组患者癌组织中circPTK2、CPEB2 mRNA表达水平升高[(2.03±0.36)vs.(1.02±0.13)、(2.55±0.44)vs.(1.01±0.12)],而miR-761表达水平降低[(0.41±0.07)vs.(1.00±0.10)],差异均有统计学意义(P均<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,CRC患者癌组织中circPTK2表达水平与miR-761水平成负相关(r=-0.766,P<0.001);miR-761表达水平与CPEB2 mRNA表达成负相关(r=-0.866,P<0.001),circPTK2的表达与CPEB2 mRNA表达成正相关(r=0.653,P<0.001)。DDP耐药患者癌组织中circPTK2、CPEB2 mRNA表达水平高于DDP敏感患者,而miR-761表达水平低于DDP敏感患者,差异均有统计学意义(t=12.983、10.352、12.459,P均<0.001)。与FHC细胞比较,CRC细胞系(LoVo、HT-29、HCT116、SW480和SW620)中circPTK2和CPEB2 mRNA的表达水平显著升高,miR-761的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.001);且HCT116细胞中circPTK2和CPEB2 mRNA的表达水平高于其他CRC细胞系,miR-761的表达水平低于其他CRC细胞系,因此,选择HCT116细胞进行后续实验。与Control组和siNC组比较,si-circPTK2组circPTK2、CPEB2 mRNA和蛋白水平显著降低,miR-761水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组CPEB2 mRNA和蛋白水平显著升高,miR-761水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与Control组和si-NC组比较,sicircPTK2组HCT116/DDP细胞中DDP的IC_(50)、细胞增殖活力(48、72 h)、迁移细胞数和侵袭细胞数降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组HCT116/DDP细胞中DDP的IC_(50)、细胞增殖活力(48、72 h)、迁移细胞数和侵袭细胞数升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与Control组和si-NC组比较,si-circPTK2组HCT116/DDP细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组HCT116/DDP细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。生物信息学分析显示,circPTK2和miR-761存在靶向结合序列;双荧光素酶检测结果显示,与转染miR-NC比较,转染miR-761 mimic后,含有WT-circPTK2质粒细胞的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);RIP检测结果显示,相对于lgG,circPTK2和miR-761在Ago2免疫沉淀中富集(P<0.05)。生物信息学分析显示,CPEB2的3’-UTR序列包含miR-761的结合位点;双荧光素酶检测结果显示,与转染miR-NC比较,转染miR-761 mimic后,含有WT-CPEB2质粒细胞的荧光素酶活性降低(P<0.05);RIP检测结果显示,相对于lgG,miR-761和CPEB2在Ago2免疫沉淀中富集(P<0.05)。结论circPTK2敲低可增强耐药CRC细胞对DDP的敏感性,其作用机制可能与调节miR-761/CPEB2轴有关。

吲哚胺2,3-双加氧酶和胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4在胃癌组织的表达及临床意义

目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)在胃癌及癌旁组织的差异表达及临床意义。方法收集92例胃癌肿瘤标本,应用免疫组织化学方法检测IDO和CPEB4在胃癌组织和癌旁组织的表达水平。结果IDO在胃癌组织的阳性表达率为65.22%(60/92),明显高于胃癌癌旁组织阳性表达率[38.04%(35/92),t=13.60,P<0.01],IDO表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(分别为t=7.64、5.37,P<0.05);CPEB4在胃癌组织的阳性表达率为57.61%(53/92),明显高于胃癌癌旁组织阳性表达率[32.61%(30/92),t= 11.61,P<0.01],CPEB4表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(分别为t= 5.58、6.85、7.35,P<0.05)。结论IDO和CPEB4的表达水平与胃癌的发生、发展明显相关。

胶质瘤组织中CPEB4蛋白的表达及临床意义

目的探讨人脑胶质瘤中胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白家族(CPEBs)中CPEB4表达水平与肿瘤级别之间的相关性及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测65例胶质瘤组织和10例正常脑组织中CPEB4的表达情况,统计分析其蛋白的表达差异性与病理级别之间的关系。结果正常脑组织和胶质瘤组织中CPEB4蛋白阳性表达率分别为0%和63.10%(41/65)(P<0.05),Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为25.0%、36.8%、71.4%、100%,在不同级别胶质瘤中CPEB4蛋白的表达强度亦有统计学差异(P<0.05)。结论 CPEB4表达与胶质瘤病理分级相关,并与胶质瘤恶性进展及预后差密切相关,这为CPEB4作为脑胶质瘤诊断及分级的指标应用于临床的可行性提供了依据,并有助于评估胶质瘤侵袭、增殖能力及预后,为胶质瘤的靶向治疗提供新思路。

胞质型多聚腺苷酸化原件结合蛋白的结构及其功能研究进展

胞质型多聚腺苷酸化原件结合蛋白(cytoplasmic polyadenylation element binding protein,CPEB)是一种mRNA结合蛋白,在无脊椎动物和脊椎动物中发挥着重要生物功能。文章就其结构及相关生物学功能进行了综述,总结了它在mRNA翻译抑制与激活、卵子发生、细胞衰老、发育、神经细胞突触可塑性等方面的研究成果,并对相关生物学事件的分子机制进行了探讨。最后对CPEB蛋白的研究前景进行了展望。

CPEB4在肿瘤中的研究进展

二十多年前,Hake.等在卵母细胞成熟的过程中首次发现胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白（cytoplasmic polyadenylation element binding proteins,CPEBs）,指出其mRNA及蛋白在卵母细胞中表达异常丰富;CPEB4在一些已确定的mRNA的翻译过程中起着重要的调控作用,在CPEB蛋白发生磷酸化的同时会诱导聚腺苷酸化,而细胞质内聚腺苷酸化导致的Poly（A）尾延长可以激活一些母系mRNA的翻译[1]。