基于CCD的胶体金免疫层析检测设备的设计

研制开发了一套用于细胞毒素相关基因A定量检测的胶体金免疫层析试纸条检测设备。该设备由硬件部分和软件系统两部分组成。硬件系统主要用于胶体金免疫层析试纸条图像的采集,而软件系统则实现了人机的交互。检测设备利用CCD(电荷耦合器件)图像传感器件采集试纸条图像,并传输至PC模块。然后,软件系统利用算法对其进行数据分析和结果诊断。软件系统主要采用了基于HSI色彩空间的移动k-均值图像分割算法,该算法实现了胶体金免疫层析试纸条图像的有效分割,完成了定量检测。本研究用10个不同浓度的胶体金免疫层析试纸条进行检测,绘制出定量曲线。还分别检测了50个阴性和50个阳性的细胞毒素相关基因A实验样品,检测结果显示特异性和灵敏度均为100%,证明了该设备的可靠性。

多重PCR检测蜡样芽孢杆菌毒力基因方法学建立与初步应用

目的 建立且优化一种能同时检测蜡样芽孢杆菌三种毒力基因的多重聚合酶链式反应(PCR)体系,初步应用于医院内环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因检测。方法 以蜡样芽孢杆菌的细胞毒素K(cytK)、肠毒素FM(entFM)、非溶血性肠毒素(nhe)三种毒力基因为靶基因,进行多重PCR,优化体系的引物浓度、退火温度、电泳时间和电压,验证该多重PCR体系灵敏度、特异性以及稳定性,并检测医院环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因携带情况。结果 成功建立多重PCR体系,nhe、cytK和entFM最佳引物浓度分别为8、20和6μm,退火温度为56℃,电泳条件为80V、30min。该体系灵敏度可达10^(-1)ng/μl,重复性好,特异性良好,可在-20℃稳定保存1个月。医院环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因携带情况为:cytK基因携带率为75.00%,entFM基因携带率为66.67%,nhe基因携带率为16.67%。结论 多重PCR可同时检测蜡样芽孢杆菌三种毒力基因,操作简便,重复性好,具有灵敏、特异、稳定的优点;医院环境中蜡样芽孢杆菌的毒力基因携带率高,提示应加强医院环境的清洁与消毒。此文为蜡样芽孢杆菌毒力基因的快速检测和芽孢感染的预防提供依据。

幽门螺杆菌及其培养上清液粗提蛋白对兔离体胃壁细胞酸分泌的影响

目的通过研究幽门螺杆菌（Hp）及其培养上清液粗提蛋白（BCF-P）对兔离体胃壁细胞酸分泌的影响，探讨Hp感染引起宿主胃酸分泌状态改变的可能机制。方法兔胃体黏膜经Ⅰ型胶原酶消化、离心淘洗后获得新鲜分离的壁细胞，并进行短期培养。提取Hp培养上清液粗提蛋白（BCF-P）并进行真空干燥浓缩，HeLa细胞以中性红摄取试验鉴定其细胞空泡活性。兔离体壁细胞与Hp及BCF-P（100μg／ml）分别共孵育2、16h和1、12h，应用^14C-氨基比林（^14C-AP）摄取法测定Hp和BCF-P对组胺（1．0×10^-4mol／L）刺激的壁细胞酸分泌的影响；同时应用RT-PCR方法分析Hp和BCF-P对壁细胞H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA表达的影响。结果（1）BCF-P中含有细胞空泡毒素（VacA），对HeLa细胞表现出细胞空泡活性。（2）与Hp共孵育2h和16h均能抑制组胺刺激的壁细胞酸分泌（P〈0．05），抑制作用随孵育时间延长而增强，2h抑制率为81％，16h为94％；BCF-P作用1h和12h，均能抑制壁细胞酸分泌（P〈0．05），抑制作用也随孵育时间延长而增强，1h抑制率为24％，12h为58％。（3）尽管与Hp孵育2h能上调壁细胞H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA表达（P〈0．05），但孵育16h则表现为下调其表达（P〈0．05）；BCF-P作用1h和12h，均抑制H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA的表达（P〈0．05）。结论Hp及其分泌的VacA可能通过下调壁细胞H^＋-K^＋ATP酶表达水平来抑制组胺刺激的壁细胞酸分泌。