tRNA^(val)-CTE复合核酶真核表达载体构建

目的构建tRNAval-CTE复合核酶真核表达载体,为进一步研究打下基础。方法用RT-PCR法扩增CTEcDNA;合成含tRNAval启动子和HCV5-NCR区195位的核酶以及内切酶KpnⅠ和EcoRⅤ序列,通过退火连接到pPUR质粒的BamHⅠ和EcoRⅠ的酶切位点之间,构建质粒pPHCV-Rz;用KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切后,将CTEcDNA定向插入表达载体pPHCV-Rz多克隆位点中,构建成重组表达质粒,并用酶切分析和序列测定进行了鉴定。结果酶切鉴定和测序证实tRNAval启动子和HCV5-NCR区195位的核酶基因以及CTEcDNA被正确克隆入真核表达载体pPUR。结论tRNAval-CTE复合核酶真核表达载体的成功构建,为开展利用tRNAval-CTE复合核酶切割HCVRNA的研究奠定了基础。