猴D型逆转录病毒和猴艾滋病

1983年在加里福利亚和新英格兰灵长类研究中心先后发现了与人艾滋病的表现相似的猴艾滋病(Smian AIDS,SAIDS)(Letvin et al.,1983;Henrickson et al.,1983)。引起SAIDS的病原体有猴艾滋病D型逆转病毒(Simian AIDS Type D)Retrovirus,SRV)和猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodefiency Virus,SIV)。

猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

目的构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法通过PCR扩增p27基因片段,与p GEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测。结果重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4 h。包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96%。结论成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。

猴D型逆转录病毒血清抗体检测方法的比较研究

本文比较了酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)、斑点酶免疫试验(DEIA)3种方法检测猕猴SRV抗体的情况。结果表明,DEIA的阳性检出率最高,IFA的阳性检出率最低。比较了3种方法的优缺点:ELISA的敏感性比DEIA低,但特异性明显高于DEIA,ELISA完成一个样品的检测所用酶结合物的量和所费时间都比DEIA少。IFA的特异性比ELISA高,但结果判断不易掌握,需经过专门训练的人员操作。因此,本中心以ELISA和IFA作为猴群的常规监测方法,先以ELISA进行初检,视结果情况作IFA复检。

猴D型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定

根据GenBank上已发表的猴D型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因。将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAD/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴D型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌T0P010中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱在天然状态下进行纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50KDa,其大小与预期相符。

中国猕猴D型逆转录病毒(SRV)感染猴体的病理学改变

1990年3月,我们用从中国猕猴分离到的猴D型逆转录病毒(SRV)感染3只幼龄恒河猴(90101、90102、90103),接种后23～60d,3只感染猴出现全身淋巴结病、脾脏肿大、中性白细胞减少症等。其中1只实验猴(901O3)在接种后354～489d,间断出现抽搐、强直及四肢痉挛等神经系统症状。经678d观察后处死,3只实验猴淋巴网状内皮组织显微镜下观察显示典型的猴艾滋病(SAIDS)病理改变;1只实验猴(90103)还显示有大脑脱髓鞘、噬神经细胞现象和神经细胞缩裂死亡等病理改变。

猕猴群D型逆转录病毒感染的控制与猕猴资源的保护和利用

猕猴群Ｄ型逆转录病毒感染的控制与猕猴资源的保护和利用贲昆龙（中国科学院昆明动物研究所）猴获得性兔疫缺陷综合征（ＳＡＩＤＳ）简称猴艾滋病，是一种严重危害猴类的疾病，它的传播可影响灵长类资源的保护和在生物医学中的合理利用。已有文献报道，一旦猴艾滋病传入易...

猴D型逆转录病毒(SRV)感染恒河猴诱导脑细胞凋亡

收集1990-03用我所首次在国内分离到的猴D型逆转录病毒(SRV)接种3只幼龄恒河猴(90101、90102、90103),经678d观察后处死的病理组织标本进行组织病理学观察。结果显示,3只实验猴网状内皮组织显微镜下呈现典型猴艾滋病(SAIDS)病理改变。其中1只实验猴(90103)的大脑组织除有片状变性坏死外,神经元周围星形胶质细胞和血管周围小胶质细胞还表现有明显的增生和凋亡,H.E形态以核浓缩的为主。

国内部分地区猴场猴D型逆转录病毒血清学调查

为了解国内不同地区猴场猴D型逆转录病毒(simian type D retrovirus,SRV)感染情况,采集广东、云南、海南、广西、河南境内主要猴场的实验猴血清752份,通过ELISA法检测SRV抗体,评估不同猴场感染情况。结果显示:受检样本总阳性率为5.19%,繁殖单元阳性率为16.15%。不同地区猴场实验猴群的感染率存在一定差异,其中云南实验猴感染率最高,样本和繁殖单元阳性率分别为13.50%和46.15%;其次是海南猴场实验猴,样本和繁殖单元阳性率分别为5.00%和17.65%;广东省两家猴场的感染率较低,样本阳性率分别为2.50%和1.00%,繁殖单元阳性率分别为12.90%和5.00%;广西与河南猴场未检出SRV阳性。不同猴种的感染率有明显差异(P<0.05),恒河猴样本和繁殖单元阳性率分别为11.64%和35.29%,而食蟹猴分别为2.31%和9.38%。结果表明,SRV在国内人工饲养猴群中感染较普遍,部分地区感染较为严重,尤其是恒河猴,应采取措施加强对猴场SRV流行的控制。

猴D型逆转录病毒p27基因的克隆表达及诊断价值评价

目的 克隆表达猴D型逆转录病毒（SRV） p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b（＋）,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta （DE3）中诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后用ELISA方法评价其诊断价值.结果 重组质粒转化宿主菌后在37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓-度为0.5 mmol/L的条件下诱导4h,可溶性p27蛋白表达量最大,且具有免疫学活性.纯化后测定融合蛋白浓度为2.043 g/L,纯度93.3％,以融合蛋白为诊断抗原包被ELISA板检测3份标准阳性血清和22份阴性血清,检出率为100％.结论 p27基因成功表达并具有良好的反应原性,可作为猴D型逆转录病毒血清学检测的候选抗原.

猴艾滋病(SAIDS)模型的建立

用猴逆转D型病毒1型(SRV-1)接种幼龄恒河猴8只,先后出现猴艾滋病的症状和体征,以及免疫学、病毒学和病理学改变.根据猴艾滋病的病程、症状、血液、免疫功能、病毒分离、抗体出现和病变,文献上将猴艾滋病模型分为3个类型,即致死型,迁延型,恢复型.本文根据中和抗体滴度和持续病毒血症增加感染型艾滋病,并将淋巴结活检病变分为五个型,可作为病程预后的观察参考指标.猴艾滋病模型将为进一步研究猴和人艾滋病提供基础.

上海地区猴免疫缺陷病毒和猴D型逆转录病毒感染的血清学调查

为了解上海地区实验用猴感染猴免疫缺陷病毒（SIV）和猴D型逆转录病毒（SRV）的情况,用间接ELISA方法对2012—2015年上海各实验用猴生产单位送检的475份猴血清进行了检测。结果显示SIV抗体阳性血清20份,阳性率4.21%;SRV抗体阳性血清1份,阳性率0.21%,阳性率与送检年份和无相关性。本研究为上海地区实验用猴SIV和SRV的预防提供参考依据。

巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。

tRNA^(val)-CTE复合核酶真核表达载体构建

目的构建tRNAval-CTE复合核酶真核表达载体,为进一步研究打下基础。方法用RT-PCR法扩增CTEcDNA;合成含tRNAval启动子和HCV5-NCR区195位的核酶以及内切酶KpnⅠ和EcoRⅤ序列,通过退火连接到pPUR质粒的BamHⅠ和EcoRⅠ的酶切位点之间,构建质粒pPHCV-Rz;用KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切后,将CTEcDNA定向插入表达载体pPHCV-Rz多克隆位点中,构建成重组表达质粒,并用酶切分析和序列测定进行了鉴定。结果酶切鉴定和测序证实tRNAval启动子和HCV5-NCR区195位的核酶基因以及CTEcDNA被正确克隆入真核表达载体pPUR。结论tRNAval-CTE复合核酶真核表达载体的成功构建,为开展利用tRNAval-CTE复合核酶切割HCVRNA的研究奠定了基础。