猪圆环病毒2型灭活疫苗及其亚单位疫苗对PCV2d流行毒株攻毒保护试验

为了评价商品化猪圆环病毒2型(PCV2)全病毒灭活疫苗与PCV2-Cap亚单位疫苗对PCV2d亚型流行毒株的保护情况。选用5周龄PCV2抗原和抗体均为阴性仔猪15头,随机分成3组,每组5头,其中两组分别进行PCV2全病毒灭活疫苗和PCV2-Cap亚单位疫苗免疫,首次免疫1mL,间隔21d以相同剂量和途径重复免疫1mL。二次免疫14d采血分离血清,采用IPMA法检测抗体,PCV2全病毒灭活疫苗于免疫第2周抗体转阳,第5周抗体效价达到均不低于800倍,其中PCV2-Cap重组亚单位病毒样颗粒疫苗免疫组试验猪抗体效价为最高,可达到1:3200。以PCV2d流行毒株进行攻毒,免疫组试验猪的相对增重率显著高于对照组,病理组织学观察显示,免疫组试验猪均未见明显的病理变化,攻毒对照试验猪腹股沟淋巴结出现一定程度的病理损伤。PCV2全病毒灭活疫苗与PCV2-Cap亚单位疫苗均可获得完全保护。

拮抗长枝木霉T115D菌株发酵条件

对拮抗长枝木霉（rlongibrachiatum）T115D菌株发酵条件进行研究。结果表明，以PD作为培养液，适宜木霉菌T115D产生孢子的pH值是7．0～8．0，温度是30℃，转速为200～250r／min；适宜菌丝生长的pH值是4．0～6．0，温度是25～30℃，转速为150—250r／min。适宜木霉菌T115D发酵的碳源是甘露糖，氮源是酒石酸铵。

禽流感灭活疫苗(H5N2亚型,D7株)与同类产品对鸭和鸡免疫后血清学比较试验

为评价禽流感灭活疫苗(H5N2亚型,D7株)与同类产品对不同日龄鸭及SPF鸡的免疫效果,将该疫苗与国内两家禽流感生产企业的2批重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株)分别免疫鸭和SPF鸡,免疫后14、21、28、42d采血测定各免疫组的HI抗体效价。禽流感灭活疫苗(D7株)以0.25 mL剂量免疫鸭后14 d,所有免疫组鸭的HI抗体几何平均滴度(GMT)即能达到6log2以上,28d HI抗体GMT达到峰值9.1log2,而两批重组禽流感灭活疫苗以0.5 mL剂量免疫鸭21 d后HI抗体GMT均没有达到6 log2;两种疫苗分别免疫21日龄SPF鸡21 d后各免疫组的HI抗体GMT基本相似。试验结果表明,禽流感灭活疫苗(D7株)对鸭的免疫效果要明显优于重组禽流感灭活疫苗(Re-5株),而对鸡的免疫效果相似。

IBVD41株主要结构基因及3′端非编码区序列分析

采用反转录及聚合酶链式反应 ( RT-PCR) ,成功地扩增出鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)人工致弱毒D41株 S1基因、M基因、N基因和基因组 3′端非编码区 ( U TR)的 c DNA。序列测定结果表明 :D41株的 S1基因全长 1611bp(从 ATG到 S前体蛋白裂解位点 ) ,编码一条由 53 7个氨基酸组成的多肽 ;M基因全长 678bp,编码一条由 2 2 6个氨基酸组成的多肽 ;N基因全长 12 3 0 bp,编码一条由 410个氨基酸残基组成的多肽 ,3′端 UTR长度为52 5bp,其中高变区 ( HVR)长度为 2 2 5bp。与国内外已报道的一些 IBV标准毒株的相应基因序列进行核苷酸序列同源性分析后发现 :D41株与麻省血清型的毒株同源性最高 ,尤其与国际常用的标准疫苗株 H52和 H12 0的亲缘关系最接近。但它与国内“腺胃型”毒株

胶质芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)D_4B_1菌株生理特性研究

对胶质芽孢杆菌D4B1菌株生理特性研究表明,D4B1菌株在供试培养基A中生长良好,12h进入对数生长期,48h达到生长高峰,菌体浓度为6 0×108个/mL;对氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、硫酸链霉素没有抗性;能分泌胞外活性物质抑制植物病原真菌的生长;具有较强的解磷解钾能力,但无植酸酶活性。其结果可以作为进一步分子改造胶质芽胞杆菌的参考。

甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的适应性

目的研究甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞Walvax-2(W2)上的传代适应性,并确定其在W2细胞上培养的最适条件。方法将甲肝病毒YN5株P23代采用混合吸附的方式接种于T225细胞培养瓶,连续传至30代,检测各代次YN5D株病毒的抗原滴度及感染性滴度;将甲肝病毒YN5D株P29代以不同的MOI接种W2细胞,以最佳MOI接种细胞,确定最佳收毒时间;建立甲肝病毒YN5D株三级种子库,并进行检定。结果甲肝病毒YN5株连续传至30代,抗原滴度及感染性滴度均保持在10 240 EU/mL和7.00 lgCCID_(50)/mL以上;当接毒比例为0.5 MOI时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高;当培养至24~28 d时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高,分别为2 560 EU/mL和7.24 lgCCID_(50)/mL。三级毒种库各项检定结果均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论确定了甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的传代适应性,并优化了细胞工厂的培养条件,为人二倍体甲肝疫苗临床申报样品的制备工艺奠定了基础。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒D971毒株S1基因的序列测定与分析

采用RT PCR方法扩增了鸡传染性支气管炎病毒D971毒株预期的 163 6bp的S1全基因DNA片段 ;以Sanger’s双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列 ,推导出了氨基酸序列 ,并用有关软件构建了S1基因进化树。结果表明 ,IBV D971毒株与国内外AF14 0 3 5 2 (山东农业大学 )、AF15 4841(山东农业大学 )、AF193 43 2 (青岛动物检疫所 )、AY0 43 3 12 (中国农业大学 )、AF3 975 2 8(四川农业大学 )、AY0 43 2 2 1(浙江农业大学 )、AF3 5 2 3 12 (浙江农业大学 )、U2 95 2 2 (澳大利亚 )和M2 1883 (英国 )毒株的核苷酸同源性分别为 99%、99%、95 %、94%、87%、86%、88%、82 %和 80 % ,氨基酸序列同源性依次分别为 93 %、93 %、87%、86%、83 %、83 %、82 %和 80 %。

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定

实验提取芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA,5种限制性内切酶消化,并对EcoRⅠ酶切片段进行分子克隆.结果表明,芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株分子量为113.78 kb;实验成功克隆出10个病毒DNAEcoRⅠ酶切片段.上述结果为芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株的分子生物学分析提供了基础材料.

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971p株)的研究

从国内发病鸡群中分离到鸡传染性支气管炎 (嗜腺胃型 )病毒 (IBV_D971株 ) ,在SPF鸡胚上连续传至 12 0代 ,培育出IBV_D971p弱毒株。用该毒株制备活疫苗 ,经安全、效力等试验证明具有较高的免疫保护率和安全性 ,能有效的预防腺胃型。

新城疫病毒D_(10)毒株稳定性及最小免剂量测定

将ＮＤＶＤ１０毒株于鸭胚尿囊腔和绒毛膜两个途径接种传代至５０代，分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及免疫原性，结果表明该病毒用尿囊腔途径接种也可获得较高滴度病毒，不同代次病毒液ＨＡ和ＥＩＤ５０都分别在１∶２５６和１０８．０／０１ｍｌ以上，免疫原性良好，但鸭胚致死性随传代次数增加而减轻，１２０小时内死亡率仅说明该病毒稳定性良好。该病毒于－２０℃和－５０℃保存期分别达６和１２个月。

我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)

观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 .

疾痢杆菌株D_(15)耐药质粒DNA在大肠杆菌中的转化表达

本文研究耐药质粒DNA在痢疾杆菌和大肠杆菌间的转移,痢疾杆菌D_(15)具有对链霉素、氯霉素和四环素抗性,接合传递试验证实为可传递性质粒。从痢疾杆菌D_(15)提取质粒DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测,并把它导入大肠杆菌E、Coil K_(12) W_(1485)。从而使后者表达对链霉素抗性。经多次反复试验,其转化效率在9个转化体左右。转化频率为23×10^(-7)。

产角蛋白酶菌株D_5培养条件的研究

为确定产角蛋白酶菌株D5的最佳培养条件,试验通过测定不同影响因素条件下角蛋白酶的酶活,确定产角蛋白酶菌株D5的最佳培养基为:新鲜鸡羽毛粉2.00%,酵母膏2.00%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸铵0.05%,蛋白胨2.00%,硫酸镁0.04%,氯化锌0.01%;最适发酵条件为:温度37℃,pH 6.5,装量80mL/250mL锥形瓶,转速150r/min,培养时间3d。

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971P株)免疫效果好

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病，在世界范围内广泛流行。根据临床与组织嗜性通常可分为呼吸型、肾病变型和腺胃病变型三种类型。自1995年以来，腺胃病变型IB在我国部分省(市)流行，造成巨大的经济损失，为了控制肾型、腺胃病变型IB的发生和流行，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制出鸡传染性支气管炎活疫苗(D971P株)，技术特点主要有以下几个方面。

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971株)免疫效果好

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病,在世界范围内广泛流行.根据临床与组织嗜性通常可分为呼吸型、肾病变型和腺胃病变型三种类型.自1995年以来,腺胃病变型IB在我国部分省(市)流行,造成巨大的经济损失,为了控制肾型、腺胃病变型IB的发生和流行,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制出鸡传染性支气管炎活疫苗(D971P株),技术特点主要有以下几个方面.

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株某些理化性质的研究

DNA of Syngrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus D-clone (Sfa-D clone) was extracted and digested by three kinds of restriction endonuclease. We calculated its molecular weight and measure its melting temperature, G+C%. virus particle and polyhedrin were purified. The structural polypeptides and polyhedrin are analysed by SDS-PAGE.

产黄青霉S-3-25的硫酸二乙酯诱变突变株3d10-01的次级代谢产物研究

目的阐明产黄青霉S-3-25的硫酸二乙酯(DES)诱变突变株3d10-01的次级代谢产物及其抗肿瘤活性。方法利用各种色谱技术分离纯化代谢产物。根据理化和波谱数据鉴定化合物结构。采用MTT法测试其抗肿瘤活性。采用HPLCUV检测方式确定所得化合物是否为突变株新产。结果从突变株发酵产物中分离鉴定了2,4-二羟基-3,5,6-三甲基苯甲酸甲酯(1),6-羟甲基-2,2-二甲基-苯并二氢吡喃-4-酮(2),regiolone(3),(3S,4S)-3,4-二氢-3,4,8-三羟基-2H-萘酮(4),脑苷脂C(5),脑苷脂D(6)和dankasterone A(7)7个化合物。化合物1、4和7对受试5种癌细胞均有较强抑制作用;2、3和6对受试HL-60细胞有一定抑制活性。HPLC-UV的检测结果表明,化合物1~4和7为原始菌不产而突变株新产的次级代谢产物。结论化合物1~7均为首次从产黄青霉发酵产物中分离得到。化合物1~4、6和7对部分受试肿瘤细胞的抑制活性为首次研究并报道。

Ad-GFP-nm23-H1体内外抑制人高转移肺巨细胞癌株95D生长和转移作用的研究

目的观察Ad-GFP-nm23-Hl抑制人高转移肺巨细胞癌株95D细胞生长和转移的作用,为后期nm23-Hl基因和腺病毒载体用于95D及其他肿瘤的基因治疗提供一定的理论和方法。方法应用MTT法及Transwell小室法分别检测95D细胞经Ad-GFP-nm23-Hl作用后的细胞体外增殖活性、黏附能力以及侵袭力的变化。同时应用人高转移肺巨细胞癌株95D裸鼠移植瘤模型,研究Ad-GFP-nm23-Hl对此移植瘤生长的抑制作用。结果108PFU/ml、109PFU/ml、1010PFU/ml处理组,可以明显抑制95D细胞的增殖、黏附和侵袭能力,其抑制作用呈剂量-效应关系。109PFU/ml的Ad-GFP-nm23-Hl对移植瘤的抑瘤率为38.23%,较对照组差异显著。结论Ad-GFP-nm23-Hl对人高转移肺巨细胞癌株95D细胞的生长和转移以及95D实体瘤具有抑制作用。