术前超声联合血浆D-二聚体水平预测附件扭转角度≥720°

目的观察术前超声联合血浆D-二聚体水平预测附件扭转(AT)角度≥720°的价值。方法回顾性分析94例经手术证实的单侧AT患者,根据术中评估扭转角度将其分为AT角度<720°组(n=36)及AT角度≥720°组(n=58)。采用单因素及多因素logistic回归分析筛选AT角度≥720°的临床及超声相关独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估单一及多项独立危险因素联合预测AT角度≥720°的效能。结果AT角度≥720°组生育史、血浆D-二聚体水平、手术途径、手术方式、超声所示扭转附件移位及受累卵巢水肿与AT角度<720°组差异均有统计学意义(P均<0.05)。血浆D-二聚体升高、超声显示扭转附件移位及受累卵巢水肿为预测AT角度≥720°的独立危险因素,三者联合的AUC为0.842。结论术前超声联合血浆D-二聚体水平可有效预测AT角度≥720°。

IgA肾病患者肾组织、血清、尿液C_(4d)水平与病情和疗效的关系

目的探讨肾组织、血清、尿液中人补体片段4d(C_(4d))水平对IgA肾病(IgAN)患者病情、疗效及预后的评估价值。方法选取原发性IgAN患者214例,采用经皮肾穿刺活检术取肾组织,免疫组化法检测C_(4d)表达情况;采集患者血清和尿液,ELISA法检测C_(4d)水平。比较肾组织、血清及尿液C_(4d)不同表达水平患者的临床病理资料。给予ACEI/ARB药物联合免疫抑制剂治疗6~8个月后观察疗效,采用Spearman相关分析法分析肾组织、血清、尿液C_(4d)表达与治疗效果的相关性。于随访截止日对患者进行肾功能CDK分期,比较不同分期患者肾组织、血清、尿液C_(4d)表达水平差异。结果肾组织C_(4d)表达阳性76例、阴性138例,血清C_(4d)水平为(1270.27±332.99)ng/mL,尿液C_(4d)水平为(297.53±45.53)ng/mL。与肾组织C_(4d)阴性患者比较,肾组织C_(4d)阳性患者24 h尿蛋白定量更高,血白蛋白更低(P均<0.05);与血清C_(4d)低水平患者比较,血清C_(4d)高水平患者24 h尿蛋白定量更高,血白蛋白更低(P均<0.05);与尿液C_(4d)低水平患者比较,尿液C_(4d)高水平患者MAP、24 h尿蛋白定量、Scr更高,eGFR、血白蛋白更低(P均<0.05),且病理分期更为严重。治疗后214例患者完全缓解143例,部分缓解28例,无反应(无效+终末期肾病)43例。相关性分析显示,肾组织、血清、尿液C_(4d)水平升高与IgAN患者的治疗效果呈负相关(rs分别为-0.234、-0.270、-0.324,P均<0.01),其中尿液C_(4d)与治疗效果的相关性最强。截至随访日,患者肾功能CDK分期1期57例、2期43例、3期31例、4期34例、5期23例。相关性分析显示,肾组织、血清、尿液C_(4d)水平升高与IgAN患者肾脏病分期均呈正相关(rs分别为0.252、0.202、0.431,P<0.05或<0.01),其中尿液C_(4d)与肾脏病分期的相关性最强。结论IgAN患者肾组织、血清、尿液C_(4d)表达水平与病情、疗效及预后均有一定的关系,且以尿液C_(4d)关系最为密切。

含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同E.coli-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。

X射线辐照引起的线粒体D310片段突变的快速检测

采用4 Gy X射线辐照人乳腺癌细胞MCF-7,分别在照射后0,2,4,8,16,24,48,72和144 h时间点收集细胞,提取DNA并以聚合酶链式反应进行扩增,再以BsaXI限制性内切酶对扩增产物进行消化,消化产物以琼脂糖凝胶电泳进行分离。结果表明,4 Gy X射线辐照可引起D310片段突变,且该突变在经辐照之后144 h检测水平明显超过野生型。

四种靶向因子与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗免疫效果的比较

目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于股四头肌注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3、pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1,接种剂量为每次100μg/只,3周免疫1次,共3次。每次免疫后第14天内眦静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体滴度。第3次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LDLD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度;其余小鼠以5LDLD50的CVB3攻击,观察各组的生存情况。结果:除了pcDNA3对照组,其他各组的中和抗体滴度均随免疫次数的增加而提高(P<0.01),第3次免疫后,pcD-NA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组的抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组(P<0.01);pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1组CTL杀伤活性显著高于其他各组(P<0.01)。致死量病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组小鼠血中病毒滴度显著低于其他组(P<0.01);pcDNA3/MDC-VP1和pcD-NA3/VP1-C3d3组小鼠生存率显著高于其他各组(P<0.05)。结论:pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3能诱导出较强的体液免疫和细胞免疫,能有效降低血中病毒滴度,获得较高的小鼠生存率;整体效果优于其他组。

25s rRNA基因部分序列比较在香菇栽培菌种鉴定上的应用

对目前中国 7个主要香菇栽培品种 :苏香、2 6、939、135、9311、申 10和 74 0 2的 2 5srRNA基因中的D1/D2片段进行了DNA序列测定 ,根据DNA序列测定结果对它们之间的同源性进行了分析。结果表明 ,所测定的 7个香菇栽培品种之间的亲缘关系非常近 ,同源性很高。通过聚类分析 ,根据香菇之间的亲缘关系 ,可以将这 7个品种分为 2类 ,即苏香、939和 9311为一类 ,2 6、申 10、135和 74 0 2为一类。

HSV-2DNA疫苗诱导小鼠免疫应答研究

目的探讨含有单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D全基因序列的重组质粒作为DNA疫苗的可能性。方法采用PCR方法获得HSV-2gD片段，构建含HSV-gD片段的重组质粒pcDNA3-gD。重组质粒作为DNA疫苗免疫小鼠，观察其对小鼠免疫效果及保护作用。结果重组质粒pcDNA3-gD免疫小鼠后可产生特异性抗体，可保护小鼠免受HSV-2的致死性攻击，存活率达75％。结论重组质粒pcDNA3-gD可诱导小鼠产生特异性免疫反应，可以作为HSV的候选DNA疫苗。

马铃薯腐烂茎线虫28S rDNA-D2/D3区序列分析

我国危害甘薯的马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS基因片段长度存在A型(900bp)和B型(1100bp)2个类型,A型腐烂茎线虫群体的ITS片段比B型群体少200bp。为了进一步研究这2种类型群体的发育关系,本文用线虫通用引物D2A和D3B对来自国内的21个马铃薯腐烂茎线虫群体和1个韩国的马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA-D2/D3区进行了PCR扩增,均产生大小一致的片段,长度约为780bp,克隆、测序后用DNAMAN5.2软件和MEGA4软件进行分析比对,结果表明我国21个马铃薯腐烂茎线虫群体28SrDNA-D2/D3区只有20余个碱基的差异,相似率达97.2%。基于UPGMA构建的系统发育树很好地区分了马铃薯腐烂茎线虫A型和B型群体,展现出了群体的来源及发育关系。

小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。

D-二聚体和ALT及AST联合检测对乙型肝炎患者的临床意义

目的探讨乙肝患者血浆D-二聚体(D-dimer,DD)、ALT及AST联合检测的临床价值。方法采集164例患者的血,其中慢性乙肝患者92例,肝硬化乙肝患者28例,对照组44例,采用全自动生化仪检测ALT及AST,采用乳胶凝集方法检测血浆D-二聚体。结果肝硬化乙肝患者组ALT、AST、DD水平均显著高于慢性乙肝患者和对照组(P<0.05),慢性乙肝患者DD与对照组差异无统计学意义。结论联合检测DD、ALT及AST有利于乙肝患者病情的监测。

机采血小板对献血者血常规指标FIB及D-二聚体的影响

目的观察捐献机采血小板对献血者血常规、纤维蛋白原(FIB)及D-二聚体等实验室检测指标的影响,以保证献血者的健康安全。方法选取2016年4月于本站捐献机采血小板的献血者30例作为研究对象,分别于捐献血小板前、献血后30 min和14 d检测献血者血常规、FIB及D-二聚体等指标。结果献血者捐献机采血小板后30 min,其Plt水平较献血前有明显降低(P<0.05),WBC、R BC、Hb和Hct与献血前比较有轻微降低,其差异(P>0.05);献血后14 d上述血常规指标与献血前比较差异(P>0.05);捐献机采血小板后30 min和14 d,献血者血浆D-二聚体、FIB水平与献血前比较均有明显降低(P<0.05)。结论捐献机采血小板后对献血者身体影响较小,短时间内血小板、血细胞可恢复至正常,并且捐献血小板可在一定程度上降低献血者的血液高凝状态。

凝血及纤溶指标与肾病综合征高凝状态的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患者血浆血管性血友病因子(vWF)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、纤维蛋白原(Fbg)、D-二聚体(D-D)水平的变化。方法用SysmexCA-7000全自动血凝仪对对80例NS患者及40例健康人进行血浆vWF、AT-Ⅲ、Fbg及D-D浓度测定,并进行比较分析。结果 NS患者vWF、Fbg、D-D均明显高于健康对照组(P<0.01),而AT-Ⅲ明显低于健康对照组(P<0.01)。结论 vWF、AT-Ⅲ、Fbg及D-D水平的变化是监测肾病综合征患者高凝状态的良好指标。

抗体介导的排斥反应病理学研究概要

抗体介导的排斥反应(AMR)是近来获得公认的导致移植物失功能的主要因素,其临床诊断需要结合移植物功能检测、受者血清供者特异性抗体检测和移植物活组织检查病理学观察及C4d免疫组织化学染色予以综合判断。其中病理学诊断是不可或缺的手段。本文简述了AMR近来的研究历程和其在主要移植器官内的基本病理学变化特征。移植肾、心脏等主要移植器官发生AMR时可见明显的毛细血管床部分C4d沉积,而移植肝往往C4d沉积不明显。鉴于临床C4d阴性AMR,近来研究较多集中于利用蛋白组学等现代分子生物学技术协助诊断AMR和寻找新的诊断标志物,移植肝AMR特殊病理学特征如中央静脉炎的意义和C3d、C4d协同染色在移植心脏AMR诊断中的作用。