杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1基因的克隆及序列分析

目的:克隆杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1(psbA)基因cDNA片段。方法:根据莱茵衣藻、稻以及普通小球藻等真核生物psbA基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用Trizol试剂提取杜氏盐藻细胞总RNA,通过RT-PCR获得杜氏盐藻psbA cDNA,PCR产物连接T载体转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序,测序结果进行Blast比对分析和密码子偏爱性分析。结果:获得的cDNA片段长度为999 bp,编码333个氨基酸。其氨基酸序列与其他物种进行Blast比对,同源性分别为:衣藻89%、椭圆小球藻89%、莱茵衣藻89%、普通小球藻88%和玉米87%。psbA基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量。另外,所克隆的psbA序列编码赖氨酸残基的数量为1个。结论:所克隆的序列为杜氏盐藻psbA基因cDNA片段。

P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1基因蛋白在沥青烟暴露小鼠肺组织中的表达

[目的]探讨沥青烟对小鼠肺组织形态及基因蛋白P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1表达的影响。[方法]建立沥青烟亚急性染毒小鼠模型,将120只昆明种健康小鼠随机分为3组,即1个对照组和2个染毒组,染毒组进行不同浓度(55、165mg/m^3)和不同时间(30、60d)染毒,光镜下观察肺组织形态改变,采用免疫组化S-P法,对P53、P21、Cyclin D1染色,观察P53、P21和Cyclin D1基因蛋白表达。[结果]不同浓度、不同时间染毒小鼠肺组织形态有不同程度改变,高浓度染毒组出现不典型增生。小鼠肺组织P53基因蛋白表现为低浓度染毒30d组,未见阳性表达;高浓度染毒60d组呈强阳性表达(P<0.01)。P21^(WAF/CIP1)基因蛋白表达低浓度染毒30d呈阳性表达;高浓度染毒60d组表达明显下调(P<0.01)。Cyclin D1基因蛋白表达同P53基因蛋白表达。[结论]随着染毒浓度和染毒时间的增加,肺组织增生逐渐明显,P53和Cyclin D1基因蛋白的表达呈上升趋势,P21^(WAF/CIP1)呈下降趋势。

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒。

DBP基因多态性与急性脑梗死静脉溶栓预后不良的关系

目的探讨维生素D结合蛋白(DBP)基因多态性与急性脑梗死(ACI)静脉溶栓预后不良的关系。方法选取2019年6月至2022年6月河南省直第三人民医院收治拟行静脉溶栓治疗的177例ACI患者为疾病组,另选取同期体检的健康体检者165例为对照组,均采用实时荧光定量PCR法检测两组DBP基因多态性,采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验两组基因型分布,比较两组基因型和等位基因的分布。治疗3个月后根据预后情况将疾病组分为预后良好组和预后不良组,比较两组基因型和等位基因的分布,影响ACI患者静脉溶栓预后不良的因素用多因素logistic回归分析。结果疾病组DBP-rs4588位点AA基因型和A等位基因频率高于对照组(P<0.05),CC基因型和C等位基因频率低于对照组(P<0.05);预后不良组DBP-rs4588位点AA基因型和A等位基因频率高于预后良好组(P<0.05),CC基因型和C等位基因频率低于预后良好组(P<0.05);预后不良组高血压占比及发病距治疗时间、入院时C反应蛋白水平、入院时白细胞计数、入院时中性粒细胞-淋巴细胞比值、入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分均高于预后良好组(P<0.05);DBP-rs4588位点AA基因型及A等位基因、高血压、发病距治疗时间、入院时NIHSS评分皆是影响ACI患者溶栓后预后不良的风险因素(P<0.05)。结论ACI不同预后患者DBP-rs4588位点基因型和等位基因分布存在差异,DBP-rs4588位点AA基因型和A等位基因是ACI患者静脉溶栓预后不良的影响因素。

Cyclin D_1基因蛋白在乳腺癌中的表达

目的 探讨Cyclin D_1基因在乳腺癌中的表达和意义.方法 应用ABC免疫组化法检测14例癌旁组织及49例乳腺癌中Cyclin D_1蛋白的表达.结果 Cyclin D_1在乳腺癌中有较高表达,过表达率49%(24/49);在14例癌旁乳腺组织中无过表达;乳腺癌的临床病理特征无明显相关性.结论 Cyclin

磷酸二酯酶4D交互蛋白基因对布加综合征隔膜形成的影响

目的探讨磷酸二酯酶4D交互蛋白（PDE4DIP）基因对布加综合征（BCS）隔膜形成的影响。方法通过小干扰RNA特异性沉默人血管内皮细胞（HUVECs）中的PDE4DIP基因，应用CCK8实验、划痕实验及血管形成实验分别检测转染后各组的增殖、迁移及血管形成能力，分析其改变情况。结果沉默该基因后，其mRNA及蛋白水平表达均下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）；各组细胞增殖的差异无统计学意义（P=0．51），迁移能力（P=0．003）及血管形成能力（P=0．001）明显降低。结论在HUVECs细胞中，PDFADIP基因沉默具有抑制HU—VECs细胞迁移及血管形成能力的作用，可能与BCS隔膜形成有关。

维生素D结合蛋白基因单核苷酸多态性与海南汉族过敏性鼻炎易感性分析

目的:探讨维生素D结合蛋白基因(GC基因)单核苷酸多态性与海南汉族过敏性鼻炎(AR)的易感性分析。方法:选取2017年—2020年海南省海口市某医院耳鼻喉头颈外科就诊的88例AR患者作为实验组(AR组)和同期在该院体检科体检的105例健康人群作为对照组(HC组),利用Snapshot技术检测GC基因三个SNP位点rs222016、rs4588、rs2282679的基因型,并通过人工、Snpstats云分析平台、SPSS25.0软件进行Hardy-weinberg平衡验证及基因型、等位基因、单倍型等进行统计学分析,对基因型有统计学差异的多态性位点进行logistic回归分析。结果:三个多态性位点rs222016、rs4588、rs2282679均可检测出三种基因型,其中rs222016基因型为GG、GA、AA,等位基因为G、A。rs4588基因型为AA、AC、CC,等位基因为A、C。rs2282679基因型为AA、AC、CC,等位基因为A、C。其中rs4588和rs2282679基因型及等位基因在组间的分布频率,差异无统计学意义(χ^(2)=0.101、0.523,P>0.05),rs222016基因型、等位基因在组间的分布频率,差异有统计学意义(χ^(2)=6.565,P<0.05),通过logsitic回归分析发现,等位基因G为保护因素。将这三个位点进行连锁分析发现它们构成的单倍型rs222016-rs4588-rs2282679-A-C-A与海南变应性鼻炎,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GC基因的多态性位点rs222016的多态性与海南汉族AR易感性有关,位点rs4588、rs2282679的多态性与海南汉族AR易感性无关,但这两个多态性位点的单倍型可协同增强位点rs222016对海南汉族AR的易感性。

突变缺失Apx毒素分泌蛋白基因apxⅢB和apxⅢD的胸膜肺炎放线杆菌血清2型的构建与鉴定

经鉴定,Apx毒素是猪胸膜肺炎的病原体—胸膜肺炎放线杆菌的重要毒力因子。在一些胸膜肺炎放线杆菌血清型中,Apx毒素是由apxⅢB和apxⅢD编码后经细胞膜分泌的。为了构建1株抗胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗株,笔者将胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株-1536的apxⅢB和apxⅢD基因进行灭活,从而构建DeltaapxⅢB/DapxⅢD突变株(1536DeltaBDeltaD)。用活的1536DeltaBDeltaD胸膜肺炎放线杆菌对猪进行免疫后,能保护猪免于同源的野生型胸膜肺炎放线杆菌1536的攻击。因此,被损坏的Apx毒素分泌物可使胸膜肺炎放线杆菌的毒力减弱,并可作为开发胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的有效策略。

中国北方汉族人群APOD基因多态性与精神分裂症的关系

目的:探讨中国北方汉族人群载脂蛋白D(APOD)基因多态性与精神分裂症的关系。方法:应用PCR-RFLP方法检测291个核心家系(精神分裂症患者及其健康父母)APOD基因上rs2280250位点基因型,应用SPSS 12.0统计学软件处理数据,并进行统计学分析。结果:①rs2280250位点基因型A/A、A/G和G/G在患者组和父母组中频数分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=0.178,df=1,P=0.673;2χ=0.597,df=1,P=0.440);②传递不平衡检验(TDT)显示,杂合子父母传递给受累子女的等位基因未偏离50%(χ2=0.030,P=0.862);③单倍体相对风险分析(HHRR)表明,rs2280250位点等位基因在患者组和父母组的频数分布差异无显著性(2χ=0.055,P=0.815)。结论:APOD基因上rs2280250位点与中国北方汉族人群精神分裂症无关联。

VDUP1基因表达水平与不稳定型心绞痛有关联

目的:探讨维生素D3上调蛋白1(VDUP1)表达水平与不稳定型心绞痛的关系。方法:分别抽取120例不稳定型心绞痛患者和130例正常对照个体的外周静脉血,采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,检测不稳定型心绞痛组和对照组外周血白细胞中VDUP1基因mRNA的表达水平;使用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测不稳定型心绞痛组和对照组VDUP1蛋白水平。结果:实验结果显示不稳定型心绞痛组VDUP1基因mRNA的水平显著低于对照组(P<0.05);Western blot结果显示不稳定型心绞痛组VDUP1蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:患者外周血白细胞中VDUP1基因的表达水平与不稳定型心绞痛有关联。

靶向序列捕获联合高通量测序鉴定成人型多囊肾PKD1基因新突变

目的探讨一个成人型多囊肾蛋白激酶D1(PKD1)基因新剪切位点突变及临床表型。方法收集一个成人型多囊肾病家系临床资料,对家系内成员采用靶向序列捕获对PKD1基因行高通量测序,并结合文献加以分析。结果该家系中先证者存在成人型多囊肾PKD1基因的c.12138+1G>A(IVS44)突变,而在家系内父亲因多囊肾引发尿毒症去世,先证者母亲一代测序结果正常。结论PKD1基因剪切位点突变是中国人群中成人型多囊肾原因之一,丰富了成人型多囊肾PKD1基因突变谱。

STAT3、cyclinD1、cyclinB1在卵巢上皮性癌的表达及意义

目的:研究STAT3及其下游基因cyclinD1、cyclinB1在卵巢上皮性癌的表达及意义。方法:用Westernblot和RT-PCR方法检测32例卵巢上皮性癌组织和12例正常卵巢组织中STAT3及其下游基因cyclinD1、cyclinB1的表达。结果:STAT3在卵巢癌和正常卵巢组织的蛋白表达阳性率分别为90.6%(29/32)和16.7%(2/12)。卵巢癌组STAT3表达明显高于正常卵巢组,差异有统计学意义(P<0.01);STAT3及其下游基因cyclinD1、cyclinB1mRNA在卵巢癌组织的阳性表达率分别为93.75%、87.5%、71.88%,与正常卵巢组阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卵巢上皮性癌中STAT3表达升高及活化可能促进了抗凋亡基因cyclinD1、cyclinB1表达,刺激细胞持续异常增殖,导致肿瘤发生。

CCND1表达沉默促进胶质母细胞瘤细胞株对替莫唑胺的敏感性

目的利用已构建的CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44,筛选能够与CCND1协同抑制胶质母细胞瘤细胞增殖的化学治疗药物。方法用蛋白质印迹法检测CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44中多药耐药基因MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp)及凋亡因子Bcl-2、Caspase-3的表达。使用卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、替莫唑胺(TMZ)3种化学治疗药物分别处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞,筛选能够与CCND1表达沉默协同抑制肿瘤细胞生长的化学治疗药物,并在人源性胶质母细胞瘤细胞株系U251中进一步验证。结果蛋白质印迹结果示CCND1表达沉默能够下调P-gp、Bcl-2的表达,上调Caspase-3的表达(P均<0.01)。BCNU(0.05、0.25μg/mL)、CCNU(20、80μg/mL)处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞的第2、3、4、5天时,细胞生长曲线的差异均无统计学意义;而在药物处理后细胞培养的第4、5天,CCND1表达沉默SHG-44细胞的生长受到TMZ(9.1μg/mL)的抑制作用较亲代SHG-44细胞强(P<0.05)。U251细胞实验证实CCND1表达沉默促进TMZ的化学治疗敏感性。结论 CCND1表达沉默联合TMZ较两者单独作用能更有效地抑制人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44的增殖,提示CCND1可能参与TMZ化学治疗耐药机制。

CCND1和myc的mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的临床研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）法检测细胞周期蛋白D1（CCND1）基因和核内原癌（myc）基因表达水平，探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ—PCR法，并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和151例乳腺癌患者外周血中CCND1和myc的表达量。结果CCND1和myc表达水平在健康女性体检者、良性乳腺疾病扣乳腺癌患者中分别为（1．45±0．12）×10^-3，（1．45±0．11）×10^-3，（4．15±1．02）×10^-3；（1．15±0．07）×10^-3，（1．15±0．08）×10^-3，（2．86±1．51）×10^-3，它们在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学显著性意义（P〉0．05），乳腺癌组均高于前两组（P〈0．05），β2-微球蛋白在三组间差异无统计学显著性意义（P〉O．05）。CCND1和myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ—PCR技术是高灵敏度、高特异度的快速定量检测CCND1和myc的方法，两者联合检测可有效提高乳腺癌的诊断灵敏度。

维生素D与心血管疾病

维生素D(vitamin D,VD)是一种脂溶性甾体激素的前体,传统意义上,其主要功能是维持钙和磷酸盐的动态平衡,促进骨钙沉积。近年来,随着研究发现,VD及其相关代谢产物与心血管疾病、代谢性疾病、感染、恶性肿瘤等多种疾病的发病有关。本文将主要对于VD及其相关代谢产物与心血管疾病的关系进行论述[1-3]。

髓母细胞瘤周期蛋白基因D1、p16的表达及其与临床病理特点的关系

目的 通过检测髓母细胞瘤周期蛋白基因 (cyclin)D1和 p16的表达 ,探讨它们与传统临床病理特点之间以及cyclinD1和 p16之间的相互关系。 方法 应用免疫组织化学方法并用图像分析系统测定染色的积分吸光度 (IOD)检测cyclinD1和p16在髓母细胞瘤和正常小脑组织中的表达情况 ;应用统计学方法分析它们与临床病理特点的相互关系 ,以及cyclinD1和 p16之间的相互关系。结果 (1)正常小脑组织cyclinD1表达较低 ,髓母细胞瘤表达较高 (IOD值分别为 0 .2 93 1、1.0 712 ) ;p16在正常小脑组织中则呈现高表达 ,而髓母细胞瘤出现降低 (IOD值分别为 1.6815、1.0 10 9) ;(2 )髓母细胞瘤cyclinD1和 p16表达情况与肿瘤年龄、部位、病理类型、是否伴坏死、分化程度及分化方向有关 ;(3 )在纤维增生型髓母细胞瘤中cyclinD1和p16呈正相关关系 (r =0 .5 3 4,P <0 .0 5 ) ,而在经典型髓母细胞瘤中呈负相关关系 (r =-0 .40 7,P <0 .0 1)。结论 髓母细胞瘤临床病理特点的不同更深层次的原因之一是肿瘤细胞cyclinD1和

上海汉族人群维生素D结合蛋白基因多态性与2型糖尿病的相关分析

采用PCR-RFLP技术研究维生素D结合蛋白(DBP)基因Asp416Glu和Thr420Lys多态性与2型糖尿病的关系。经传递不平衡检验和同胞传递不平衡检验,结果不支持连锁。但此基因多态性对胰岛B细胞功能有一定作用。

慢性阻塞性肺疾病患者血维生素D水平及其维生素D结合蛋白基因多态性的相关性研究

目的 探讨湖北地区慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者维生素D水平及其维生素D结合蛋白（GC）基因多态性.方法 对250例受检者（116例吸烟COPD患者和134例健康吸烟者）进行问卷调查,收集相关资料（吸烟史、维生素D摄入、并发症等）;ELISA法检测受试者血清25-羟基维生素D（25-OHD）水平,通过Taqman探针实时荧光定量PCR对GC基因（rs4588位点和rs7041位点）进行分型;并进行肺功能检测.结果 吸烟COPD者25-OHD水平较健康吸烟者低（36.58 nmol/L比43.80 nmol/L,P＜0.001）.25-OHD水平吸烟COPD者第1秒用力呼气容积（FEV1）占预计值百分比≥80％者为39.43 nmol/L,FEV1占预计值百分比＞50％～80％者为35.32 nmol/L,FEV1占预计值百分比＞30％～50％者为32.21 nmol/L,FEV1占预计值百分比＜30％者为26.25 nmol/L（P＜ 0.01）.25-OHD水平与肺功能呈正相关（r2 =1.911,P＜0.000 1）.GC基因rs7041位点的TT型与25-OHD水平和COPD易感性存在关联（P＜0.01;OR =2.140,95％ CI1.157～3.959,P=0.015）.结论 吸烟COPD者易患维生素D缺乏,且COPD气流受限程度与维生素D水平呈负相关.GC基因rs7041位点的TT型与25-OHD水平和COPD易感性密切相关,可能成为COPD易感性筛查的候选突变位点.

细胞周期蛋白D_1基因表达与喉癌生物学行为的关系

为探讨cyclinD1基因扩增的临床意义，采用免疫荧光技术检测了25例喉鳞癌的新鲜标本。发现细胞周期蛋白D1基因（cyclinD1基因）在喉癌中有9例扩增（占37％），而且与肿瘤分级和TNM分期差别无显著性意义（P＞0．05）；而与肿瘤组织相邻的正常组织表达阴性，或仅见极个别散在表达，推测cyclinD1基因在喉癌的发生发展中可能是非早期现象。通过跟踪的调查发现，在cyclinD1基因表达阳性的肿瘤9例中，有4例复发；而cyclinD1基因表达阴性的肿瘤16例中，仅1例复发，二者差别有显著意义（P＜0．05）。所以cyclinD1基因的扩增可望作为一种新的预后标志。