D-α-生育酚醋酸酯复配物对D-半乳糖致衰老小鼠的改善作用

为探究D-α-生育酚醋酸酯复配物对D-半乳糖致衰老小鼠的改善作用,通过测定天然油脂复配物+植物甾醇组(VEO组)、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇复配组(VEZ组)、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇+虾青素复配组(VEX组)的体外抗氧化能力,并采用小鼠颈背注射D-半乳糖建立衰老模型,同时用不同复配物进行干预。结果表明,三组复配物均有较强的抗氧化作用,其中VEZ组的体外抗氧化效果较佳;与衰老模型小鼠相比,经三组复配物干预后,小鼠体内谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)升高,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)生成量下降(P<0.01),血清中炎症因子白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)和肝功能指标谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平均显著下降(P<0.01);经过干预后,小鼠体内的核因子-E2-相关因子(Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶(Quinone oxidoreductase,NQO-1)、血红素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)的mRNA和蛋白表达显著增强(P<0.0001),说明不同复配物通过上调Nrf2、NQO-1、HO-1的表达,发挥其抗氧化作用,从而达到抗衰老的效果,其中VEZ组表达效果最佳。综上,D-α-生育酚醋酸酯复配物是通过增加抗氧化相关mRNA和蛋白表达量,从而增强下游抗氧化酶水平来实现抗衰老的效果,其中D-α-生育酚醋酸酯与植物甾醇复配的效果更佳。

高D-α-生育酚抗氧化活性研究

对从实验室制备的高D α 生育酚 ,用烘箱法及Rancimat法对其抗氧化活性和其他抗氧化剂进行了比较分析。结果表明 ,高D α 生育酚对猪油有一定抗氧化性 ,高温时更明显 ;而对大豆色拉油及葵花籽色拉油有一定促氧化作用 。

d-α-生育酚对乙醇引发的肝脏氧化应激的影响

目的观察d-α-生育酚对乙醇诱发的小鼠肝脏氧化应激的影响并探讨其机制。方法昆明种小鼠每天给予2.4g.kg-1bw乙醇后,再给予3个不同剂量的d-α-生育酚(25、50、100mg·kg-1bw.d-1),同时设正常对照组和乙醇对照组(乙醇2.4g·kg-1bw.d-1),连续灌胃60d后,测定肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Na+,K+-ATP酶(Na+,K+-ATPase)、Ca2+,Mg2+-ATP酶(Ca2+,Mg2+-ATPase)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)活力及丙二醛(MDA)的含量。结果小鼠摄入乙醇60d后,肝脏氧化应激水平明显增高。除Ca2+,Mg2+-ATPase以外,其余各项指标与正常对照组相比,差异均有显著性(P<0.05)。50mg·kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预后,与乙醇对照组相比,GSH-Px、SOD、GST、Na+,K+-ATPase活力明显升高,MDA含量显著下降。其中,GSH-Px、Na+,K+-ATPase、MDA等3个指标在25mg·kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预时亦出现同样的变化。结论适宜剂量的d-α-生育酚可以通过直接抑制脂质过氧化对乙醇诱发的肝脏氧化应激起保护作用。

色谱纯d-α-生育酚中试规模的制备研究

色谱纯d-α-生育酚,不仅要求纯度达98%以上,而且对杂质峰的个数及峰面积都有规定。因分离难度大,不易获得,所以色谱纯d-α-生育酚价格较高。如何由工业原料制备色谱纯的d-α-生育酚,特别是中试规模的制备,这难题一直困扰着行业中许多研究者,新昌制药厂利用自身的技术支持,很好的解决本厂色谱纯d-α-生育酚的制备和供应问题。本研究是以粗孔硅胶为吸附剂,利用其对不同物质的吸附牢固度的差异,再配以不同的洗脱剂进行洗脱,从而得到色谱纯的d-α-生育酚。为了顺利推广色谱纯的d-α-生育酚工业化生产,所有的实验都是按中试规模来设计的。

高D-α-生育酚对油脂氧化稳定性影响

用Rancimat仪测定高D-α-生育酚对油脂氧化稳定性影响,并与其它抗氧化剂进行比较分析。结果表明:高D-α-生育酚在猪油中有较强抗氧化效果,其抗氧化效果强于DL-α-生育酚,而稍弱于天然维生素E;而在大豆色拉油及葵花籽色拉油中有不太显著抗氧化效果,同时,高D-α-生育酚浓度及作用温度也对油脂氧化稳定性产生影响。

催化甲基化法制备d-α-生育酚

维生素E是由α、β、γ、δ-生育酚及α、β、γ、δ-三烯生育酚等八种化合物组成的混合物,它们的生理活性各异。在构象上,又有d-型和l-型之分,天然的多为d-型而人工合成的则多为d,l-型,天然的d-α-生育酚具有迄今所知的最大的维生素E活性。选用V2O5为催化剂进行了反应条件的优化,得到优化条件为:反应温度250℃、时间1 75h、催化剂用量为维生素E的3 5%、氢气压力0 3mPa(表压)。实验结果为:α-生育酚含量92.31%、维生素E得率为79 83%。

植物油中d-α-生育酚对乙醇诱发脑氧化应激的影响

目的:观察植物油中提取的d-α-生育酚对乙醇诱发的小鼠脑氧化应激的影响并探讨其机制。方法:昆明种小鼠(VE组)27只,每天给予2.4 g.kg-1bw乙醇30 min后,再给予25、50、100 mg.kg-1bw.d-13个不同剂量的d-α-生育酚,同时设正常组(NC组)9只和乙醇组(EC组)9只,乙醇2.4 g.kg-1bw.d-1灌胃。60 d后测定各组血清、脑超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)的含量。结果:与NC组比较,EC组MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著下降(P<0.05)。VE组小鼠摄入乙醇60 d后,脑组织氧化应激水平明显增高,与EC组比较,25 mg.kg-1bw.d-1dα--生育酚干预后,脑GSH-Px、SOD活力明显升高,MDA含量显著下降;50 mg.kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预后,脑GSH-Px明显升高,MDA含量显著下降;而SOD活力在数值上虽然增高,但差异无统计学意义;100 mg.kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预未见上述改善作用。结论:适宜剂量的d-α-生育酚可以通过直接抑制脂质过氧化对乙醇诱发的脑组织氧化应激起保护作用。

d-α-生育酚预防仔猪肝脏急性炎症损伤的效果

为研究d-α-生育酚缓解仔猪断奶应激和LPS(脂多糖)急性应激导致的肝脏氧化损伤的效果,试验选择72头健康的长大二元杂种断奶仔猪,按体重相近原则随机分为2个处理组,每个处理6个重复,每个重复6头,对照组饲喂基础饲粮(简称C组),试验组饲喂基础饲粮+75 mg/kg d-α-生育酚(简称TP组),试验期21 d。在试验第22天上午,分别从两个处理组(C组和TP组)中随机挑选6头仔猪腹腔注射LPS溶液(100 mg/kg体重),建立氧化应激模型,分别简称为CL组和TPL组;两个处理组(C组和TP组)中各再挑6头仔猪注射相同剂量灭菌生理盐水作为对照,分别简称为CC组和TPC组。注射LPS溶液4 h以后,24头仔猪全部屠宰,采血样,取肝脏组织用于观察d-α-生育酚对仔猪断奶应激和LPS造成的急性肝损伤的预防效果。结果表明,CC组肝脏组织未见明显的炎症细胞浸润,说明应激对肝脏组织病理学形态没有显著影响。在饲粮中加入75 mg/kg d-α-生育酚后,TPC组肝细胞结构完整清晰,无明显炎症细胞浸润,肝细胞排列有序,细胞核位于中心;TPC组的血清总抗氧化能力和过氧化氢酶活性高于CC组,丙二醛含量低于CC组,均存在显著差异(P<0.05);TPC组的谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性和碱性磷酸酶活性均低于CC组,但差异不显著(P>0.05)。LPS处理后引起仔猪急性肝脏损伤。CL组肝窦内白细胞增多,间质里有较多炎症细胞浸润,过氧化氢酶活性和总抗氧化能力显著低于CC组(P<0.05),丙二醛含量显著高于CC组(P<0.05),CL组的谷草转氨酶活性、碱性磷酸酶活性是4个组中最高的,且与CC组、TPC组存在显著差异(P<0.05)。TPL组肝细胞形态完整,少量炎症细胞浸润,血清总抗氧化能力和过氧化氢酶活性显著高于C L组(P<0.05),丙二醛含量显著低于C L组(P<0.05);TPL组谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性和碱性磷酸酶活性均低于CL组,表明d-α-生育酚在一定程度上减缓了LPS导致的仔猪急性肝脏损伤。结论:断奶仔猪饲粮中添加75 mg/kg的d-α-生育酚可以缓解断奶应激导致的仔猪肝脏损伤,同时预防LPS诱导的仔猪急性肝损伤,d-α-生育酚可以用于缓解仔猪断奶应激和预防仔猪注射疫苗等导致的急性炎症应激。

毛细管气相色谱法测定油脂中d-α-生育酚和1-α-生育酚

采用毛细管气相色谱法对食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚含量进行测定,样品平均回收率分别为90.55%、86.84%,相对标准偏差分别为4.92%、5.93%;检测结果表明:采用该方法具有操作简便、快速、准确等优点,适用于食品中天然维生素E和合成维生素E的分析测定。

D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯对抗P-糖蛋白介导的多药耐药研究进展

查阅国、内外近期相关文献,对D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯对抗P-糖蛋白介导的多药耐药研究的进展进行综述。

D-α-生育酚调节蛋白激酶C活性对糖尿病视网膜病变的影响

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)在糖尿病视网膜病变 (DR)中的作用和D α 生育酚对糖尿病视网膜毛细血管组织病理的影响。方法 实验大鼠分为 4组 :正常对照组 (C组 )、D α 生育酚处理的正常对照组 (T组 )、糖尿病组 (D组 )、D α 生育酚处理病鼠组 (DT组 )。血糖、HbA1c和D α 生育酚含量以及原位PKC、ATPase活性在处理后 6个月被检测 ,毛细血管床形态立体定量评估DR。结果病程 6个月时 ,D组大鼠深、浅层毛细血管呈现周细胞减少、基底膜增厚的特征性改变 ,成模 6个月后糖尿病大鼠视网膜PKC活性显著增高 >10 0 % ,D α 生育酚可阻止此升高。同一大鼠视网膜 ,D α 生育酚也可阻止糖尿病诱导的Na+ K+ ATPase和Ca2 + ATPase活力下降。D α 生育酚可显著改善糖尿病视网膜微血管周、内皮细胞截面积和深浅层毛细血管基底膜厚度 ,而对血糖、HbA1c无影响。结论糖尿病诱导的组织病理异常可能大部分由PKC介导 ,D α

D-α-生育酚-聚(2-乙基-2-唑啉)琥珀酸酯修饰siRNA脂质复合物的构建及初步评价

目的制备D-α-生育酚-聚(2-乙基-2-唑啉)琥珀酸酯[D-α-tocopheryl poly(2-ethyl-2-oxazoline)succinate,TPOS]修饰小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)脂质复合物(TPOS-L/siRNA)。方法以普通siRNA脂质复合物(CLs/siRNA)和PEG修饰CLs/siRNA(PEG-L/siRNA)为对照,对TPOS-L/siRNA的包封率、形态、稳定性、体外释放、细胞摄取等进行评价。结果根据正负电荷的静电吸引作用通过直接混合方法等体积混合空白CLs和siRNA,得到CLs/siRNA。CLs/siRNA具有脂质双分子层结构,包封率为(86.68±1.41)%,粒径小于200 nm。TPOS或PEG-DSPE修饰后,对CLs/siRNA包封率和粒径基本无影响,而且均能赋予脂质复合物良好的稳定性;同时TPOS-L/siRNA具有较好的p H敏感性,能够响应微酸环境,细胞摄取明显增强。结论 TPOS能够构建良好的siRNA载体,并能增加该纳米载体的稳定性和p H敏感性。

高活性α-生育酚的制备及结构鉴定

高活性α生育酚(dα生育酚)具有迄今所知的最大的维生素E活性。采用直接甲基化法进行了实验,得到高活性α生育酚产品。制备后的α生育酚含量为98.91%,浓度为0.34mg/mL。比旋光度为31.52°。甲基化反应前后维生素E的生理活性大多数得以保留。经用核磁共振碳谱作进一步确认,并与标准谱图进行比较。结果十分吻合,特别是三个手性碳的位移值均未发生变化,因此进一步确认甲基化过程中构型未受到破坏。

天然维生素E生产技术现状

介绍了天然维生素E的性状、国内外天然维生素E生产技术现状及发展趋势,分析了国内外非D α 生育酚的甲基化技术的现状及技术进展。

蛋白激酶C在高葡萄糖诱导肾小球系膜细胞核转位信号中的作用

目的 探讨肾小球系膜细胞中高葡萄糖对c fos、c Jun核转位及丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性的影响是否为蛋白激酶C(PKC)活化所介导。方法 原代培养大鼠肾小球系膜细胞 ,分为正常对照组 (5 .5mmol/LD 葡萄糖 ) ,高葡萄糖组 (2 5mmol/LD 葡萄糖 )和d α 生育酚预处理的高葡萄糖组。观察干预后 2 4、4 8、72h原位PKC活性、c fos、c Jun核蛋白水平及细胞核MAPK活性。结果 高葡萄糖负荷肾小球系膜细胞 2 4h ,原位PKC活性、细胞核c fos、c Jun蛋白水平及MAPK活性均与正常对照组无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 4 8h后 ,原位PKC活性、细胞核MAPK活性及c Jun核蛋白水平均较正常对照组显著升高 ,但c fos核蛋白含量在 72h后降至正常水平。d α 生育酚预处理可阻止高葡萄糖诱导的PKC激活 ,细胞核c fos、c Jun核蛋白高表达及胞核MAPK活化。结论 高葡萄糖可诱导肾小球细膜c fos、c Jun核转位和细胞核MAPK活化 ,此可能为PKC活化所介导 ,d α 生育酚可通过抑制PKC激活而阻止高葡萄糖对PKC下游核转位信号的影响。

基于TPGS的紫杉醇自微乳的制备及其评价

目的:制备基于P-糖蛋白抑制剂D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)的紫杉醇自微乳(PTX-T-SMEDDS),以增强耐药肿瘤细胞对PTX的敏感性。方法:采用伪三元相图法筛选TPGS自微乳(T-SME)的制备处方;以粒径、多分散指数(PDI)和PTX包封率为指标筛选PTX-T-SMEDDS的制备条件;利用马尔文粒径仪和透射电镜表征PTX-T-SMEDDS乳化后的粒径、Zeta电位、PDI和形态,并利用高效液相色谱(HPLC)测定药物包封率,考察PTX-T-SMEDDS的体外释药行为和稳定性;以非小细胞肺癌紫杉醇耐药株A549/Taxol为模型,采用MTT法评价细胞毒性。结果:T-SME的最终处方为维生素E 20%,TPGS 40%,异丁醇40%。在PTX与维生素E/TPGS/异丁醇的质量比为1∶120时制得PTX-T-SMEDDS,其乳化后的粒径为(20.64±0.23) nm,乳滴形态为类圆形,PTX包封率为(85.10±3.05)%。相较于游离PTX,PTX-T-SMEDDS呈缓慢释药行为。PTX-T-SMEDDS具有较好的贮存稳定性、稀释稳定性和离心稳定性。PTX-T-SMEDDS对A549/Taxol的IC_(50)为7.33μg·mL^(-1),约为游离PTX的1/4。结论:成功制备了PTX-T-SMEDDS,该自微乳可缓慢释放PTX,且具有一定的稳定性,可提高耐药细胞A549/Taxol对PTX的敏感性。

辅酶Q_(10)天然维生素E软胶囊的稳定性研究

目的研究以辅酶Q10天然维生素E为主要原料的软胶囊产品的稳定性。方法不同配方的样品,经过加速试验后,用高效液相色谱法和气相色谱方法分别测定辅酶Q10和天然维生素E的含量,并检测辅酶Q10的存在形态。结果辅酶Q10单独使用或者与维生素E(d-α-醋酸生育酚)配伍使用时,辅酶Q10存在形态为氧化型,其含量经加速试验前后无明显差别。辅酶Q10与维生素E(d-α-生育酚)配伍使用时,氧化型和还原型辅酶Q10共同存在,氧化型含量逐渐降低,还原型含量逐渐升高,两者的含量之和在加速试验前后无明显差别,d-α-生育酚的含量略有降低。结论辅酶Q10单独使用或者与维生素E(d-α-醋酸生育酚)配伍使用时,配方稳定。辅酶Q10与维生素E(d-α-生育酚)配伍使用时,辅酶Q10会逐渐转化为还原型辅酶Q10,d-α-生育酚的含量降低。

载紫杉醇的大黄酸偶联物纳米胶束的制备及初步评价

目的制备载紫杉醇的D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)修饰的羧甲基壳聚糖-大黄酸偶联物(PTX/TPGS-CR)纳米胶束,并对其进行初步评价。方法采用透析法,以载药量、包封率及粒径为指标,通过单因素考察优化PTX/TPGS-CR纳米胶束的制备工艺并进行验证。以溶血实验及血管刺激性实验初步考察PTX/TPGS-CR纳米胶束的安全性。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法考察PTX/TPGS-CR纳米胶束对Hela细胞的毒性。通过激光扫描共聚焦显微镜定性和流式细胞仪定量考察Hela细胞对PTX/TPGS-CR纳米胶束的摄取情况。结果制备工艺优化后制得的PTX/TPGS-CR纳米胶束粒径为(197.3±4.4)nm,PDI为(0.131±0.021),电位为(-31.8±0.5)mV,载药量为(48.20±3.03)%,包封率为(87.26±4.91)%。溶血实验结果表明,其溶血率低于1.71%;血管静脉注射无明显刺激性。其对Hela细胞的杀伤作用具有浓度和时间依赖性,能被Hela细胞高效摄取。结论PTX/TPGS-CR纳米胶束载药量和包封率高,安全性好,其体外抗肿瘤活性稍优于Taxol?。

依托泊苷胶束的制备与表征

目的制备并表征装载依托泊苷(VP-16)的D-?-生育酚-聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)胶束(VP-16/TPGS)。方法采用薄膜水化法制备VP-16/TPGS,测定其粒径、Zeta电位,研究其体外药物释放行为,考察其细胞摄取和细胞毒性,评价其血液相容性。结果所制得的VP-16/TPGS胶束具有较小的粒径;具有较高的载药量和包封率;体外呈现良好的缓控释效果;可增强H446细胞对其的摄取,进而提高抗肿瘤活性;具有较高的血液相容性。结论 VP-16/TPGS胶束是一种安全、有效的VP-16递送系统。