D-α-生育酚醋酸酯复配物对D-半乳糖致衰老小鼠的改善作用

为探究D-α-生育酚醋酸酯复配物对D-半乳糖致衰老小鼠的改善作用,通过测定天然油脂复配物+植物甾醇组(VEO组)、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇复配组(VEZ组)、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇+虾青素复配组(VEX组)的体外抗氧化能力,并采用小鼠颈背注射D-半乳糖建立衰老模型,同时用不同复配物进行干预。结果表明,三组复配物均有较强的抗氧化作用,其中VEZ组的体外抗氧化效果较佳;与衰老模型小鼠相比,经三组复配物干预后,小鼠体内谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)升高,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)生成量下降(P<0.01),血清中炎症因子白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)和肝功能指标谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平均显著下降(P<0.01);经过干预后,小鼠体内的核因子-E2-相关因子(Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶(Quinone oxidoreductase,NQO-1)、血红素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)的mRNA和蛋白表达显著增强(P<0.0001),说明不同复配物通过上调Nrf2、NQO-1、HO-1的表达,发挥其抗氧化作用,从而达到抗衰老的效果,其中VEZ组表达效果最佳。综上,D-α-生育酚醋酸酯复配物是通过增加抗氧化相关mRNA和蛋白表达量,从而增强下游抗氧化酶水平来实现抗衰老的效果,其中D-α-生育酚醋酸酯与植物甾醇复配的效果更佳。

正相高效液相色谱法检测婴幼儿乳粉中的α-生育酚、α-生育酚醋酸酯

开发了一种快速测定婴幼儿乳粉中α-生育酚以及α-生育酚醋酸酯的正相高效液相色谱法。使用乙醇、正己烷提取,40℃下等度洗脱;流动相是体积比为97.2:2.8的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂,流速为0.5 mL/min;α-生育酚和α-生育酚醋酸酯的检测波长分别为284 nm和296 nm。结果表明:α-生育酚和α-生育酚醋酸酯的回收率分别为99.41%,102.17%;多次测定相对标准偏差分别为3.45%和3.27%。检出限分别为5.5ng,6.9ng。本方法操作简单、精密度、回收率和灵敏度高,适用于快速检测婴幼儿奶粉中α-生育酚以及α-生育酚醋酸酯。

气相色谱内标法测定保健食品中α-生育酚醋酸酯及不确定度评定

[目的]建立气相色谱内标法测定保健食品中α-生育酚醋酸酯含量的方法及不确定度评定方法。[方法]以正三十二烷为内标,用 DB-1,0．25 mm×0．25μm×30 m 的毛细管柱的分离,氢火焰离子化检测器检测,并依据 JJF 1059- 1999测量不确定度评定与表示对检测结果不确定度分析与评定。[结果]该方法检测线性良好,相关系数 r=0．996,加标回收率为98．1%～99．1%,相对标准偏差为4．73%～7．48%。[结论]本方法检测结果可靠、重现性好,不确定度评定合理。

两种生育酚酯衍生物对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用

为探究两种生育酚酯衍生物(D-α-生育酚醋酸酯和DL-α-生育酚醋酸酯)的抗衰老作用,本实验测定其体外抗氧化能力,并采用D-半乳糖构建衰老小鼠模型,同时用两种生育酚酯衍生物干预42 d,分析衰老相关指标变化规律。结果表明:在0.1~0.3 mg/mL质量浓度范围内,两种生育酚酯衍生物的羟自由基清除能力、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力、Fe2+螯合能力、总还原能力均优于VC。与衰老模型组相比,经过生育酚酯衍生物干预后,小鼠血清中丙二醛含量显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001),谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001);血清中炎症因子白细胞介素-6、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001);小鼠肝脏中核因子-E2-相关因子(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase,NQO1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA及蛋白相对表达量提升,其中DL-α-生育酚醋酸酯的Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA相对表达量分别增加了514.08%、461.78%、515.32%,蛋白相对表达量分别增加了620.00%、988.89%、1200.00%(P<0.0001)。综上所述,两种生育酚酯衍生物对D-半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用,且DL-α-生育酚醋酸酯效果更好,二者抗衰老作用可能与调控Nrf2信号通路相关。

α-生育酚醋酸酯的制备

以95%α-生育酚和醋酸酐为原料,对甲苯磺酸为催化剂制备α-生育酚醋酸酯。通过实验确定的最佳工艺条件为:反应原料比n(α-生育酚)∶n(对甲苯磺酸)∶n(醋酸酐)=1∶0.007∶2,反应时间为1h,反应温度为100℃,α-生育酚醋酸酯收率为95%。

HPLC法测定特殊医学用途婴配食品中的α-生育酚醋酸酯和α-生育酚的研究

采用正相液相色谱法测定特殊医学用途婴配食品中α-生育酚醋酸酯和α-生育酚的含量。样品酶解后采用异辛烷提取,氨基柱(150×4.6 mm,5.0μm)分离,使用正己烷和25%叔丁基甲醚正己烷进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温:30℃,进样量:50μL,荧光检测器的激发波长为280 nm,发射波长为310 nm。结果表明α-生育酚醋酸酯与α-生育酚在0.5~40.0μg/mL范围内呈线性相关(R^2=0.999 9和R^2=0.999 5),检出限分别为5.6μg/100 g和6.9μg/100 g。特殊医学用途婴儿配方食品中α-生育酚醋酸酯含量为0.37~69.0 mg/100 g,精密度为0.6~9.9%,α-生育酚含量为0.16~8.4μg/100 g,精密度在1.3%~7.2%之间,不同添加浓度回收率为80.2%~91.1%之间。该方法简单、快速、准确、精密度高,分离度好。

正相高效液相色谱法同时测定奶粉中维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E醋酸酯及α-生育酚

使用正相液相色谱紫外、荧光双检测器系统,建立了奶粉中维生素A、维生素E类4种化合物的分析方法。采用SI60色谱柱（15cm×3.0mm,3μm）,以1%二氯甲烷和0.06%异丙醇的异辛烷溶液为流动相,DAD检测波长：313nm（维生素A）,280nm（维生素E醋酸酯）,FLD检测波长：Ex295nm,Em330nm（α-生育酚）,外标法定量。结果表明各组分线性关系良好,方法精密度较高,相对标准偏差在2.0%~5.6%之间,样品回收率在90.4%~107%之间。与GB5413.9-2010相比,该法简单、快速、准确,适用于奶粉中维生素A和维生素E异构体的定量分析。

d-α-生育酚对乙醇引发的肝脏氧化应激的影响

目的观察d-α-生育酚对乙醇诱发的小鼠肝脏氧化应激的影响并探讨其机制。方法昆明种小鼠每天给予2.4g.kg-1bw乙醇后,再给予3个不同剂量的d-α-生育酚(25、50、100mg·kg-1bw.d-1),同时设正常对照组和乙醇对照组(乙醇2.4g·kg-1bw.d-1),连续灌胃60d后,测定肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Na+,K+-ATP酶(Na+,K+-ATPase)、Ca2+,Mg2+-ATP酶(Ca2+,Mg2+-ATPase)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)活力及丙二醛(MDA)的含量。结果小鼠摄入乙醇60d后,肝脏氧化应激水平明显增高。除Ca2+,Mg2+-ATPase以外,其余各项指标与正常对照组相比,差异均有显著性(P<0.05)。50mg·kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预后,与乙醇对照组相比,GSH-Px、SOD、GST、Na+,K+-ATPase活力明显升高,MDA含量显著下降。其中,GSH-Px、Na+,K+-ATPase、MDA等3个指标在25mg·kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预时亦出现同样的变化。结论适宜剂量的d-α-生育酚可以通过直接抑制脂质过氧化对乙醇诱发的肝脏氧化应激起保护作用。

高D-α-生育酚抗氧化活性研究

对从实验室制备的高D α 生育酚 ,用烘箱法及Rancimat法对其抗氧化活性和其他抗氧化剂进行了比较分析。结果表明 ,高D α 生育酚对猪油有一定抗氧化性 ,高温时更明显 ;而对大豆色拉油及葵花籽色拉油有一定促氧化作用 。

D-δ-三烯生育酚抗乳腺癌细胞的活性

目的探讨D-δ-三烯生育酚抗人乳腺癌MCF-7细胞的生物学活性。方法将细胞分为对照组(无药物培养)和实验组,实验组设低、中、高剂量组,分别加入终浓度为30,40,50μmol·L-1的D-δ-三烯生育酚,药物干预MCF-7细胞24 h后,显微镜下观察各组细胞生长状态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪分析细胞增殖、周期与凋亡。结果 D-δ-三烯生育酚抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率分别为(9.33±1.68)%,(32.47±3.18)%和(76.63±1.00)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);低、中、高剂量组G1期细胞所占比例分别为(54.34±1.50)%,(58.24±0.81)%和(62.11±1.12)%,与对照组[(43.34±2.51)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量组贴壁细胞明显减少,漂浮死亡细胞明显增多,细胞早期凋亡率Q4分别为(10.87±0.50)%,(17.87±2.40)%和(25.83±3.76)%,与对照组[(1.93±0.25)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 D-δ-三烯生育酚能抑制MCF-7细胞增殖,阻滞细胞于G1期,诱导细胞凋亡,具有抗乳腺癌MCF-7细胞的生物学活性。

色谱纯d-α-生育酚中试规模的制备研究

色谱纯d-α-生育酚,不仅要求纯度达98%以上,而且对杂质峰的个数及峰面积都有规定。因分离难度大,不易获得,所以色谱纯d-α-生育酚价格较高。如何由工业原料制备色谱纯的d-α-生育酚,特别是中试规模的制备,这难题一直困扰着行业中许多研究者,新昌制药厂利用自身的技术支持,很好的解决本厂色谱纯d-α-生育酚的制备和供应问题。本研究是以粗孔硅胶为吸附剂,利用其对不同物质的吸附牢固度的差异,再配以不同的洗脱剂进行洗脱,从而得到色谱纯的d-α-生育酚。为了顺利推广色谱纯的d-α-生育酚工业化生产,所有的实验都是按中试规模来设计的。

d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌5-8F细胞的作用与机制

目的:探讨d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌5-8F细胞的增殖和凋亡作用及作用机制,为鼻咽癌的防治提供新思路。方法:d-δ-三烯生育酚(0,40,50,60μmol/L)干预鼻咽癌5-8F细胞48h后,显微镜下观察细胞的形态;MTT实验、流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡;Western blotting检测基因表达。结果:d-δ-三烯生育酚三组药物浓度对5-8F细胞的抑制率分别为(49.13±1.85)%、(76.13±2.6)%和(92.97±3.5)%,与对照组相比,差异具有显著意义(P<0.01);5-8F细胞的凋亡率分别为(2.80±0.72)%、(11.88±1.08)%和(22.30±0.66)%,与对照组(0.74±0.15)%比较,差异具有显著意义(P<0.01);随d-δ-三烯生育酚浓度增加,Bax表达增强,Bcl-2表达降低。结论:d-δ-三烯生育酚具有抗鼻咽癌5-8F细胞的生物学活性,其机制可能与其诱导Bax表达、抑制Bcl-2表达有关。

高D-α-生育酚对油脂氧化稳定性影响

用Rancimat仪测定高D-α-生育酚对油脂氧化稳定性影响,并与其它抗氧化剂进行比较分析。结果表明:高D-α-生育酚在猪油中有较强抗氧化效果,其抗氧化效果强于DL-α-生育酚,而稍弱于天然维生素E;而在大豆色拉油及葵花籽色拉油中有不太显著抗氧化效果,同时,高D-α-生育酚浓度及作用温度也对油脂氧化稳定性产生影响。

催化甲基化法制备d-α-生育酚

维生素E是由α、β、γ、δ-生育酚及α、β、γ、δ-三烯生育酚等八种化合物组成的混合物,它们的生理活性各异。在构象上,又有d-型和l-型之分,天然的多为d-型而人工合成的则多为d,l-型,天然的d-α-生育酚具有迄今所知的最大的维生素E活性。选用V2O5为催化剂进行了反应条件的优化,得到优化条件为:反应温度250℃、时间1 75h、催化剂用量为维生素E的3 5%、氢气压力0 3mPa(表压)。实验结果为:α-生育酚含量92.31%、维生素E得率为79 83%。

d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的探讨d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌的生物学活性。方法将低分化5-8F鼻咽癌细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别予40、50、60μmol/L d-δ-三烯生育酚干预48 h,对照组不予干预。采用MTT实验、流式细胞仪检测细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞周期;荧光染色和显微镜观察细胞形态学变化。结果观察组干预48 h后,随浓度增加,镜下观察活细胞减少,漂浮的死亡细胞增多,细胞核强荧光染色细胞比例增多,细胞出现明显的抑制和凋亡现象。观察组不同浓度细胞抑制率及凋亡率明显升高,且明显高于对照组(P均<0.01);对照组S期的细胞百分率明显低于观察组,P均<0.01。结论 d-δ-三烯生育酚能抑制5-8F细胞增殖,诱导其凋亡,具有潜在的抗鼻咽癌生物学活性。

d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响

目的研究d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法将人晶状体上皮SRA细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设3个药物浓度,分别为30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚,药物干预人晶状体上皮SRA细胞24 h和48 h后,采用MTT法、Hoechst33258荧光染色和流式细胞仪分析人晶状体上皮SRA细胞的增殖和凋亡情况。结果 d-δ-三烯生育酚呈浓度-时间依赖性抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,诱导其凋亡。30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚干预48 h对SRA细胞的增殖抑制率分别为(32.23±5.25)%、(54.17±1.63)%和(86.80±0.85)%,与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05);干预24 h增殖抑制率分别为(12.70±1.20)%、(19.53±0.95)%和(51.83±6.11)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。干预24 h后,各实验组细胞晚期凋亡率Q2分别为(5.87±0.15)%、(11.37±0.85)%、(22.77±2.41)%,与对照组的(1.10±0.17)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各实验组细胞早期凋亡率Q4分别为(3.57±0.32)%、(4.20±0.40)%、(8.00±0.50)%,与对照组的(2.53±0.15)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 d-δ-三烯生育酚抑制人晶状体上皮SRA细胞增殖,诱导其凋亡,具有抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用,为治疗后发性白内障提供一种新思路。

植物油中d-α-生育酚对乙醇诱发脑氧化应激的影响

目的:观察植物油中提取的d-α-生育酚对乙醇诱发的小鼠脑氧化应激的影响并探讨其机制。方法:昆明种小鼠(VE组)27只,每天给予2.4 g.kg-1bw乙醇30 min后,再给予25、50、100 mg.kg-1bw.d-13个不同剂量的d-α-生育酚,同时设正常组(NC组)9只和乙醇组(EC组)9只,乙醇2.4 g.kg-1bw.d-1灌胃。60 d后测定各组血清、脑超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)的含量。结果:与NC组比较,EC组MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著下降(P<0.05)。VE组小鼠摄入乙醇60 d后,脑组织氧化应激水平明显增高,与EC组比较,25 mg.kg-1bw.d-1dα--生育酚干预后,脑GSH-Px、SOD活力明显升高,MDA含量显著下降;50 mg.kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预后,脑GSH-Px明显升高,MDA含量显著下降;而SOD活力在数值上虽然增高,但差异无统计学意义;100 mg.kg-1bw.d-1d-α-生育酚干预未见上述改善作用。结论:适宜剂量的d-α-生育酚可以通过直接抑制脂质过氧化对乙醇诱发的脑组织氧化应激起保护作用。

d-α-生育酚预防仔猪肝脏急性炎症损伤的效果

为研究d-α-生育酚缓解仔猪断奶应激和LPS(脂多糖)急性应激导致的肝脏氧化损伤的效果,试验选择72头健康的长大二元杂种断奶仔猪,按体重相近原则随机分为2个处理组,每个处理6个重复,每个重复6头,对照组饲喂基础饲粮(简称C组),试验组饲喂基础饲粮+75 mg/kg d-α-生育酚(简称TP组),试验期21 d。在试验第22天上午,分别从两个处理组(C组和TP组)中随机挑选6头仔猪腹腔注射LPS溶液(100 mg/kg体重),建立氧化应激模型,分别简称为CL组和TPL组;两个处理组(C组和TP组)中各再挑6头仔猪注射相同剂量灭菌生理盐水作为对照,分别简称为CC组和TPC组。注射LPS溶液4 h以后,24头仔猪全部屠宰,采血样,取肝脏组织用于观察d-α-生育酚对仔猪断奶应激和LPS造成的急性肝损伤的预防效果。结果表明,CC组肝脏组织未见明显的炎症细胞浸润,说明应激对肝脏组织病理学形态没有显著影响。在饲粮中加入75 mg/kg d-α-生育酚后,TPC组肝细胞结构完整清晰,无明显炎症细胞浸润,肝细胞排列有序,细胞核位于中心;TPC组的血清总抗氧化能力和过氧化氢酶活性高于CC组,丙二醛含量低于CC组,均存在显著差异(P<0.05);TPC组的谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性和碱性磷酸酶活性均低于CC组,但差异不显著(P>0.05)。LPS处理后引起仔猪急性肝脏损伤。CL组肝窦内白细胞增多,间质里有较多炎症细胞浸润,过氧化氢酶活性和总抗氧化能力显著低于CC组(P<0.05),丙二醛含量显著高于CC组(P<0.05),CL组的谷草转氨酶活性、碱性磷酸酶活性是4个组中最高的,且与CC组、TPC组存在显著差异(P<0.05)。TPL组肝细胞形态完整,少量炎症细胞浸润,血清总抗氧化能力和过氧化氢酶活性显著高于C L组(P<0.05),丙二醛含量显著低于C L组(P<0.05);TPL组谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性和碱性磷酸酶活性均低于CL组,表明d-α-生育酚在一定程度上减缓了LPS导致的仔猪急性肝脏损伤。结论:断奶仔猪饲粮中添加75 mg/kg的d-α-生育酚可以缓解断奶应激导致的仔猪肝脏损伤,同时预防LPS诱导的仔猪急性肝损伤,d-α-生育酚可以用于缓解仔猪断奶应激和预防仔猪注射疫苗等导致的急性炎症应激。

毛细管气相色谱法测定油脂中d-α-生育酚和1-α-生育酚

采用毛细管气相色谱法对食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚含量进行测定,样品平均回收率分别为90.55%、86.84%,相对标准偏差分别为4.92%、5.93%;检测结果表明:采用该方法具有操作简便、快速、准确等优点,适用于食品中天然维生素E和合成维生素E的分析测定。

d-δ-生育酚抑制人晶状体上皮SRA细胞生长及相关机制

目的:探究d-δ-生育酚对人晶状体上皮SRA细胞生长的影响以及相关分子机制,为d-δ-生育酚用于治疗与预防后发性白内障提供实验依据。方法:实验分为6组,即空白对照组及实验组,即5个不同浓度的d-δ-生育酚(40、60、80、100、120μmol/L),噻唑兰(MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率。在倒置显微镜下观察人晶状体上皮SRA细胞形态。流式细胞仪检测细胞周期,蛋白印迹法(Western blot)检测bcl-2、bax、Cyclin D1、P21蛋白表达。结果:随着d-δ-生育酚的浓度逐渐增加,SRA细胞较对照组细胞明显减少;作用时间的延长,SRA细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05);S期细胞所占比例与对照组比较逐渐增高,细胞被阻滞于S期(P<0.05);d-δ-生育酚干预人晶状体上皮SRA细胞48h后,人晶状体上皮SRA细胞P21、Cyclin D1和bcl-2表达量逐渐降低,bax表达量逐渐增高(P<0.01)。结论:d-δ-生育酚能明显抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,阻滞细胞周期于S期。其机制可能是通过抑制bcl-2、P21、Cyclin D1的表达,诱导bax的表达实现的。