Burkholderia pickettii中D-乙内酰脲酶基因(dha)的克隆、测序及表达

对一株能转化D ,L 对羟基苯乙内酰脲为D 对羟基苯甘氨酸的菌株MMR0 0 3进行了细菌分类学鉴定 ,该菌为皮氏伯克霍尔德氏菌 (Burkholderiapickettii)。实验通过Southern杂交 ,部分文库构建和筛选 ,并经一系列亚克隆测序分析 ,获得一长度为 1374bp的完整开放阅读框 ,编码 45 8个氨基酸的D 乙内酰脲酶基因。用该基因序列构建的高表达质粒pXZPH2转化E .coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后 ,检测到D 乙内酰脲酶活性。该基因编码的氨基酸序列经Blast同源比较分析与放射形土壤杆菌NRRLB112 91所产相应酶有 85 %的同源性。以D ,L 对羟基苯乙内酰脲为底物测得的表达酶的活力为 0 6 6u mL ,比相同条件下所测出发菌株MMR0 0 3的酶活提高了