雌激素对D-半乳糖去卵巢小鼠及其apoE基因敲除鼠认知能力的影响

目的观察雌激素对D-半乳糖去卵巢C57BL/6 J小鼠及其apoE基因敲除鼠两组动物的认知能力的影响。方法采用D-半乳糖腹腔注射和双侧卵巢切除术制备D-半乳糖去卵巢动物模型(D-gal+OVX),1 w后补充雌激素组开始每周腹腔注射EB(EB)2次,6w后应用Morris水迷宫观察各组小鼠行为学改变。对apoE基因敲除鼠进行同样的处理。结果EB对模型组小鼠有改善认知功能的作用,而对apoE基因敲除组小鼠的认知功能没有改善作用。结论EB可能通过apoE依赖机制而发挥其改善认知功能的作用。

丹皮酚、绿原酸和没食子酸复配物对D-半乳糖致小鼠衰老模型的抗氧化作用研究

目的研究丹皮酚、绿原酸和没食子酸复配物对衰老模型小鼠的抵抗作用。方法采用小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖的方法构建小鼠衰老模型;模型小鼠随机分为模型组、丹皮酚、绿原酸和没食子酸复配物高(200 mg·kg^(-1))、中(100 mg·kg^(-1))、低(50 mg·kg^(-1))剂量组,每天按规定给药剂量分别灌胃,维生素C对照组每天按100 mg·kg^(-1)的给药剂量进行灌胃。连续给药4 w后,观察并记录小鼠体重和形态方面的变化,测定小鼠胸腺和脾脏指数,检测小鼠血清及肝脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力三个指标。结果与空白组相比较,模型组小鼠的体质量和脏器指数明显下降,血清和各脏器组织中的SOD、GSH-Px活力均有所降低,MDA含量有所升高,且大部分差异显著(P<0.05),说明衰老小鼠模型构建成功。与模型组相比,复配物各剂量组小鼠体质量和脏器指数均有所升高,血清和脏器中的SOD、GSH-Px活力均有不同程度的回升,MDA含量显著下降(P<0.05)。其中复配物高剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px和MDA含量分别为(118.78±6.87)U·mL^(-1)、(111.27±10.36)U·mL^(-1)和(3.86±2.13)nmol·mL^(-1),大鼠肝脏中SOD、GSH-Px和MDA含量分别为(126.73±11.48)U·mg^(-1)、(105.56±11.57)U·mg^(-1)和(7.95±0.99)nmol·mg^(-1),与模型组相比具有显著差异(P<0.05)。结论丹皮酚、绿原酸和没食子酸复配物能有效提高衰老小鼠的抗氧化能力,高剂量组作用效果最为显著。其抗氧化机制可能与抑制氧化酶的活性,增强机体抗氧化酶的活性有关。

D-半乳糖诱导建立的小鼠多囊卵巢综合征模型

目的研究D-半乳糖诱导ICR中年雌性小鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型的卵巢形态学、性激素以及胰岛素水平变化,并探讨D-半乳糖引致小鼠PCOS的意义。方法以D-半乳糖腹腔注射20周龄ICR雌性小鼠8周,观察卵巢形态的变化,检测血糖值及动情周期排卵情况,并采用ELISA法测定血清胰岛素、雌二醇(E2)、促卵泡生长激素(FSH)、睾酮(T)水平。结果 D-半乳糖处理组小鼠的卵巢重量显著高于对照组(P<0.05),有80%(10/12)的单侧或双侧卵巢呈现多囊性扩张,卵巢闭锁增多及颗粒细胞层数减少,并表现为紊乱的动情周期,提示无排卵;与对照组比较,D-半乳糖组小鼠血清T、E2和空腹血糖水平明显升高(P<0.001),FSH水平下降(P<0.0001),空腹血胰岛素水平显著高于对照组(P<0.01),胰岛素敏感指数显著低于对照组(P<0.05)。结论使用D-半乳糖诱导小鼠PCOS模型,无论在影响血清性激素还是卵巢局部形态学改变方面都与临床表现相似,并存在胰岛素抵抗现象,符合PCOS的典型特征,可作为动物模型用于科学研究。

二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合Aβ1-40致肾阴虚AD大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)致肾阴虚阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响。方法在采用D-半乳糖+去卵巢法建立肾阴虚大鼠模型的基础上,联合海马注射Aβ1-40建立肾阴虚AD学习记忆障碍大鼠模型。雌性SD大鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、二精丸高剂量组(9.0 g·kg^-1)、二精丸中剂量组(4.5 g·kg^-1)、二精丸低剂量组(2.25 g·kg^-1)、阳性药组(多奈哌齐,1.0 mg·kg^-1)。每日1次,连续灌胃给药30 d。通过Morris水迷宫试验、新物体识别试验检测大鼠学习记忆能力;采用HE染色、尼氏染色观察大鼠海马神经元细胞形态;免疫组化法测定大鼠海马雌激素β受体(ERβ)、Aβ及p-tau404蛋白表达水平;ELISA法测定大鼠血清的雌激素水平。结果与模型组比较,二精丸中、高剂量组从第3天开始逃避潜伏期显著缩短(P<0.05,P<0.01),高剂量组的穿越平台次数明显增加(P<0.05),新物体识别指数明显升高(P<0.05);二精丸组大鼠海马区神经元、尼氏小体数量增多,形态较完整,排列较整齐,无破损,核仁清晰;二精丸中、高剂量组大鼠海马区阳性Aβ细胞数显著减少(P<0.01),血清雌激素水平显著升高(P<0.05,P<0.01);二精丸高剂量组大鼠海马区p-tau404阳性细胞数量明显减少(P<0.01);二精丸高、中、低剂量组大鼠海马区ERβ阳性细胞数量增多(P<0.01)。结论二精丸可能通过上调大鼠脑内ERβ表达和雌激素水平,减少脑内Aβ淀粉样蛋白的沉积,抑制tau蛋白的过度磷酸化,从而改善肾阴虚AD大鼠的学习记忆能力。

二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠海马多巴胺神经功能的影响

目的探讨二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白_(1-40)(Aβ_(_(1-40)))致肾阴虚阿尔茨海默病(AD)大鼠海马多巴胺神经功能的影响。方法将56只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二精丸高剂量组(9.0 g·kg^(-1))、二精丸中剂量组(4.5 g·kg^(-1))、二精丸低剂量组(2.25 g·kg^(-1))。造模大鼠在卵巢摘除手术1周后,腹腔注射D-半乳糖(100 mg·kg^(-1)),每日1次,持续7周;卵巢摘除手术4周后,双侧海马注射Aβ_(1-40)建立肾阴虚AD大鼠模型。卵巢摘除手术5周后,各组按照相应剂量开始灌胃给药,模型组与假手术组灌胃等量生理盐水,给药容量为10 mL·kg^(-1),每日1次,连续30d。末次给药1h后断头取海马组织,采用ELISA法检测大鼠海马组织多巴胺(DA)水平,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区多巴胺D1受体、酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠的海马组织DA水平显著降低(P<0.01),海马CA1区多巴胺D1受体及TH表达明显下调(P<0.01)。与模型组比较,二精丸高剂量组大鼠的海马组织DA水平明显升高(P<0.01);二精丸各剂量组大鼠海马CA1区的D1受体表达明显上调(P<0.05,P<0.01);二精丸高、中剂量组大鼠海马CA1区的TH表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论二精丸能够提高海马组织的DA水平,上调海马组织的多巴胺D1受体及TH表达,促进去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠的海马多巴胺神经功能。

蒲公英红枣汁对D-半乳糖致衰老模型雌性大鼠抗氧化抗炎作用的研究

目的研究蒲公英红枣汁对D-半乳糖致衰老模型雌性大鼠体内抗氧化、抗炎作用的影响。方法50只雌性大鼠随机分为对照组、模型组、蒲公英红枣汁低(5 mL/kg)、中(10 mL/kg)、高(20 mL/kg)剂量组。对照组以外的大鼠腹腔注射D-半乳糖500 mg/(kg·d),连续6周建立衰老模型。然后蒲公英红枣汁灌胃干预30 d,对照组与模型组以同样方法给予等体积蒸馏水。检测各组大鼠血清和卵巢组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、血清谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化物酶(catalase,CAT)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量等抗氧化相关指标;测定大鼠血清中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)含量及外周血T淋巴细胞亚群水平。评价蒲公英红枣汁体外抗氧化能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)。结果蒲公英红枣汁各组均能显著降低血清和卵巢组织MDA含量(P<0.05),提高血清GSH含量、GSH-Px活性(P<0.01),降低血清IL-1β水平(P<0.05),降低CD4+/CD8+比值(P<0.05);低、中剂量组降低了血清蛋白质羰基含量(P<0.05);低、高剂量组提高了SOD活性(P<0.05);高剂量组降低了TNF-α水平(P<0.01)。低、中、高剂量3组未显示出剂量依赖关系。结论蒲公英红枣汁可以提高D-半乳糖衰老模型雌性大鼠的抗氧化和抗炎能力,可能通过抑制体内氧化应激及提高机体抗炎因子水平发挥延缓衰老的作用。

串叶松香草超氧化物歧化酶提取工艺优化及对D-半乳糖致衰老模型小鼠的保护作用研究

目的优化串叶松香草超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)的提取工艺,并研究串叶松香草SOD对D-半乳糖致衰老模型小鼠的保护作用。方法采用高压脉冲电场法提取SOD,以串叶松香草为原料,进行最佳提取工艺的研究,以SOD酶活力为指标,在单因素实验基础上,进一步通过响应面实验对提取工艺进行优化。同时采用随机法把小鼠分为空白对照组、模型组、串叶松香草SOD低、中、高剂量组、维生素C(vitaminC,VC)阳性对照组。除空白对照组外,其余5组均皮下连续注射D-半乳糖,采用注射D-半乳糖构建衰老小鼠模型。通过观察和测定各组小鼠的行为和体质量,研究其衰老的变化情况;采用分光光度计法测定小鼠血清中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果最佳提取工艺条件为:电场强度20 kV/cm、脉冲数10个、提取时间32 min,在此条件下,提取的串叶松香草SOD酶活力为3878.67 U/g。串叶松香草SOD对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用表明:串叶松香草SOD能改善衰老小鼠的体征,提高衰老小鼠的体质量,具有较好的抗肝萎缩和脑萎缩作用,同时还能提高衰老小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT的活力,降低其MDA含量,达到延缓衰老的作用。结论该研究获得了串叶松香草SOD的最佳提取工艺,得到的串叶松香草SOD能够延缓小鼠衰老。

当归芍药散对制动应激复合半乳糖诱导的卵巢储备功能下降模型小鼠的干预作用

目的探讨当归芍药散对制动应激复合半乳糖诱导的卵巢储备功能下降(DOR)模型小鼠的干预作用。方法选取60只正常动情周期的昆明小鼠,随机挑选10只小鼠为空白组,其余50只小鼠通过制动应激复合注射半乳糖建立DOR模型。造模结束后将模型小鼠随机分成模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组,各10只。中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组分别给予24.44 g/(kg·d)、12.22 g/(kg·d)、6.11 g/(kg·d)的当归芍药散灌胃,西药组给予0.13 mg/(kg·d)戊酸雌二醇灌胃,空白组、模型组小鼠给予等体积蒸馏水灌胃,连续干预4周。记录干预前后各组小鼠的一般情况。干预结束后,观察各组小鼠卵巢组织的形态学变化,并计算卵巢指数,检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素、抗米勒氏管激素(AMH)、抑制素B水平。结果与空白组相比,模型组小鼠动情周期紊乱、卵巢指数下降、闭锁卵泡增多、生长卵泡减少,血清FSH、LH水平升高,而血清雌激素、抑制素B和AMH水平降低。与模型组相比,各药物干预组小鼠动情周期恢复正常、闭锁卵泡减少、生长卵泡增多,且中药低剂量组小鼠卵巢指数上升、血清雌激素和抑制素B水平升高,中药中剂量组小鼠血清FSH水平降低、血清雌激素水平升高,中药高剂量组小鼠血清FSH水平降低、AMH水平升高,西药组小鼠血清FSH水平降低(均P<0.05)。结论当归芍药散可能通过调节DOR模型小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴功能,来减少闭锁卵泡数目、增加生长卵泡数目,以及降低血清FSH水平,升高血清雌激素、AMH、抑制素B水平,从而改善卵巢储备功能。

基于ERK/CREB信号通路探讨艾灸肾俞穴改善去卵巢合D-半乳糖阿尔茨海默病样大鼠神经元丢失的机制研究

目的研究艾灸肾俞穴通过激活海马区ERK/CREB信号通路改善去卵巢合D-半乳糖腹腔注射诱导阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样大鼠学习记忆能力及神经元丢失的机制研究。方法选用3月龄SD雌性未孕大鼠40只,随机分为正常组、模型组、肾俞组、抑制剂组,每组10只。除正常组外,其他3组均摘除双侧卵巢,术后3 d,每日按照150 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射D-gal(D-半乳糖)90 d建立阿尔茨海默病样大鼠模型。肾俞组自卵巢切除术后第3天起,采用直径约6 mm定制艾条,分别于双侧"肾俞"上方2~3 cm处悬灸,使局部温度维持在(41±0.5)℃,每穴10 min,每日9:00 am开始治疗,1次/d,5 d为1个疗程,疗程间休息2 d,共治疗12个疗程。抑制剂组是在肾俞组基础上每周皮下注射选择性ERα受体拮抗剂甲基哌啶吡唑methyl-piperidino-pyrazole(MPP),1次/周,共12次。正常组不进行干预,但以相同的方式束缚处理。免疫组化法检测各组大鼠海马区Aβ1-42和雌激素受体α表达;尼氏染色分析各组大鼠海马区神经元数目及形态变化;免疫印迹法检测各组大鼠海马区p-CREB、p-ERK、ERK、CREB的蛋白表达。结果干预3个月后,各组海马组织中ERK和CREB总量没有明显差异,各组逃避潜伏期均呈现随时间推移而下降。与正常组相比,从定位航行实验Day2起,模型组逃避潜伏期明显延长(P<0.001),穿越平台次数明显下降(P<0.01),海马区Aβ1-42表达明显增多(P<0.001),海马CA1、CA3区神经元数目明显下降(P<0.001),P-ERK/T-ERK、P-CREB/T-CREB水平明显下降(P<0.001),海马区ERα表达明显减少(P<0.01);经治疗后,与模型组相比,从定位航行实验Day3起,肾俞组逃避潜伏期明显缩短(P<0.001),穿越平台次数明显增加(P<0.01),海马内Aβ1-42表达明显减少(P<0.001),CA1、CA3区神经元数目明显增加(P<0.01),P-ERK/T-ERK、P-CREB/T-CREB水平明显增加(P<0.001),海马区ERα表达明显升高(P<0.05);与肾俞组比较,抑制剂组逃避潜伏期明显延长(P<0.001),穿越平台次数明显下降(P<0.01),Aβ1-42表达明显升高(P<0.001),CA1、CA3区神经元数目组明显减少(P<0.05,P<0.01),P-ERK/T-ERK、P-CREB/T-CREB水平明显增加(P<0.01,P<0.05),且ERα表达明显降低(P<0.01)。结论激活海马区ERα依赖的ERK/CREB信号通路是艾灸肾俞穴改善去卵巢合D-半乳糖腹腔注射诱导的AD样大鼠学习记忆能力及神经元丢失现象的机制之一。

含辅酶Q_(10)的红曲胶囊对去卵巢合并D-半乳糖大鼠股骨的影响

目的采用大鼠去卵巢合并D-半乳糖诱导老年性骨质疏松的动物模型来评价含辅酶Q_(10)的红曲胶囊对其股骨的骨药理学作用,并与雌激素己烯雌酚比较。方法 3 mon龄SPF级♀SD大鼠,随机分为假手术对照组(CON),去卵巢组(OVX)、模型组(MOD),己烯雌酚组(DES)和红曲胶囊组(RYR),连续给药60 d。实验结束时,取左侧股骨检测钙、磷和羟脯氨酸含量;取右侧股骨进行三点弯曲实验,然后用Micro CT进行骨量分析。结果与CON组相比,MOD组的大鼠体重明显增加;股骨的最大载荷、刚度、最大强度、断裂强度、弹性模量均明显降低;股骨的Ca、P、Hyp含量均明显降低;Micro CT指标BV/TV、Tb.N、BMD、Conn-Dens均明显降低,Tb.Sp、SMI均明显增加。与MOD组相比,RYR组体重明显降低;各力学指标均有增加的趋势;Ca和P的含量均明显增加;BV/TV、Tb.N、Tb.Th、BMD、Conn-Dens均明显增加,Tb.Sp明显降低。与MOD组相比,DES组股骨的各项指标趋势与RYR组相一致。但与DES组相比,RYR组体重明显降低,Ca和P含量明显增加,BV/TV、Tb.N、Tb.Th、ConnDens明显升高,Tb.Sp、SMI明显降低。结论去卵巢合并D-半乳糖可诱导大鼠股骨出现老年性骨质疏松的表现,含辅酶Q_(10)的红曲胶囊可使去卵巢合并D-半乳糖大鼠的体重明显减轻,股骨矿物质含量丢失得到恢复;股骨的骨丢失明显减轻,骨微观结构得到明显改善。且0.5颗·kg^(-1)的红曲胶囊在增加松质骨骨小梁数量上比30μg·kg^(-1)己烯雌酚效果要好。

D-半乳糖联合脱氢表雄酮诱导小鼠多囊卵巢综合征模型

目的研究D-半乳糖联合脱氢表雄酮(DHEA)诱导小鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型的建立方法。方法 20周龄雌性ICR小鼠随机分为正常对照组、DHEA组、D-半乳糖组和D-半乳糖联合脱氢表雄酮组(D+D联合组),分别给予溶剂注射、70mg/kg DHEA颈背部皮下注射、200mg/kg D-半乳糖腹腔注射,以及D-半乳糖联合DHEA分别腹腔注射及颈背部皮下注射,每天1次,连续21d。监测小鼠饮食和体重变化;取血测定小鼠空腹血糖值;观察小鼠动情周期排卵情况以及取卵巢组织并做HE染色,观察小鼠卵巢组织结构及形态变化。结果 D+D联合组、DHEA组、D-半乳糖组与对照组相比进食量均有所降低,且D+D联合组、DHEA组显著低于对照组(P<0.05)。D+D联合组、DHEA组与对照组相比体重稍有增高,而D-半乳糖组与对照组相比体重稍有降低,但均无统计学差异(P>0.05)。各造模组动情周期紊乱,表现为持续动情间期或动情后期,D+D联合组的变化更为明显。D+D联合组能够明显诱发卵巢卵泡发生闭锁及囊状扩张,91.7%(11/12)小鼠可见此变化,与PCOS患者卵巢病理改变非常相似,而单纯应用D-半乳糖或DHEA所致小鼠单侧或双侧卵巢囊肿及多囊性变化不甚明显,均只有50.0%(6/12)小鼠可见此变化。结论 D-半乳糖联合DHEA可诱导小鼠PCOS模型,其效果优于非联合组。

D-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生化改变

建立类似自然衰老的“早衰老”动物模型是老年医学悬而未决的研究课题之一。国内外学者曾进行多种尝试,如低剂量放射诱导、抑制蛋白质合成以及去除胸腺等方法。近几年徐黻本等在D—半乳糖亚急性中毒动物观察了临床上常用的20项指征(内部资料),与衰老指征相似。

D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞拟衰老作用的实验研究

目的探讨D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)衰老后的形态学及生物学变化情况。方法取3只2月龄SD大鼠MSCs分离培养至第3代,一部分置于含8g/LD-gal的培养液中继续培养至第6代作为诱导组;另一部分在原培养液中继续培养至第6代作为对照组,并作表型鉴定。采用流式细胞仪检测对照组加入8g/LD-gal后4d内细胞周期的分布变化。两组MSCs培养7d并绘制生长曲线,在光镜和透射电镜下观察其形态和结构变化,β-半乳糖苷酶染色、单细胞凝胶电泳检测DNA损伤方法检测其衰老后的生物学行为变化。结果诱导组MSCs镜下呈典型的衰老细胞形态;对照组MSCs形态均匀,长势良好。流式细胞仪检测表明加入D-gal诱导后90%MSCs停留在G0/G1期,而S期和G2/M期MSCs趋于消失,并随诱导时间延长趋势越明显;对照组MSCs各期比例正常。MSCs生长曲线示诱导组生长速度较对照组明显减慢。诱导组约85%呈β-半乳糖苷酶阳性染色,对照组染色为阴性。单细胞凝胶电泳示诱导组MSCsDNA有拖尾现象,对照组MSCs无DNA损伤。结论D-gal对SD大鼠MSCs的老化具有诱导作用,初步推断8g/L为最适浓度,为研究MSCs衰老提供了较好的模型。

D-半乳糖合并半高脂饲料致认知功能障碍大鼠模型的建立及评价

目的建立复合因素所致认知功能障碍大鼠模型,并从行为学、病理形态学、细胞凋亡、氧化损伤和炎症因子等角度进行评价。方法选用雌性正常SD大鼠,采用皮下注射D-半乳糖及饲喂半高脂饲料,制备6w及8w不同时程的认知功能障碍动物模型。采用Morris水迷宫实验及物体识别实验检测各组大鼠学习记忆能力;采用HE染色及电镜观察海马组织病理形态;测定脑中丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的含量;比较不同时程认知功能障碍模型大鼠之间及与正常大鼠的差异。结果6w末时,认知功能障碍模型大鼠在物体识别实验中,分辨指数较空白组明显下降(P<0.05),但水迷宫实验成绩与空白组比较无明显差异;而8w末时,模型动物在分辨指数下降(P<0.01)的同时,水迷宫成绩亦明显下降,逃避潜伏期明显延长(P<0.01),穿台次数明显减少(P<0.05);8w末与6w末相比,水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P<0.01);造模后,能引起海马神经细胞的退行性改变及早期凋亡现象,且存在着进行性加重的病理变化;6、8w模型组大鼠脑组织的TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05,P<0.01),同时8w大鼠IL-6水平高于6w模型组(P<0.05);6、8w模型组ox-LDL、MDA水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论以该方法复制的认知功能障碍大鼠模型,在一定程度上模拟了认知功能障碍发生、发展的多环节病理变化,可为认知功能障碍的治疗,特别是其早期干预打下基础。

D-半乳糖亚急性衰老大鼠模型的建立及评价

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,每周记录体重变化情况,第7周末测试大鼠空间学习能力,第8周末测试大鼠空间记忆能力,计算大鼠胸腺、脾脏、睾丸和卵巢的脏器系数,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果半乳糖注射4 w后,雄性大鼠的体重比对照组显著性降低(P<0.05),注射6 w后,体重差异非常显著性降低(P<0.01);半乳糖组雌雄大鼠的空间学习能力和记忆能力较对照组显著性降低(P<0.05),听力阈值显著增加(P<0.05),胸腺指数非常显著性降低(P<0.01),雄性大鼠睾丸系数显著性降低(P<0.05),血清SOD活性显著性降低(P<0.05),MDA含量显著性增高(P<0.05);其余实验结果组间比较差异没有显著性(P>0.05)。结论 D-半乳糖皮下注射8 w可以复制出与24月龄老年大鼠自然衰老程度相似的亚急性衰老模型,雄性大鼠优于雌性大鼠。

人参皂苷Rg1延缓D-半乳糖大鼠脑衰老作用及机制的初步研究

目的:探讨人参皂苷Rg1延缓D-半乳糖所致大鼠脑衰老后的学习记忆能力、SOD活性、MDA含量及衰老相关基因P16INK4a、P21Waf1 mRNA及蛋白的表达水平。方法:将15只3月龄SD大鼠随机分为对照组、脑衰老组[120 mg/(kg.d)D-半乳糖颈背部皮下注射6周]、Rg1抗脑衰老组[同衰老模型组处理,并于第3周起腹腔注射人参皂苷Rg1 20 mg/(kg.d)共注射4周]。Morris水迷宫评估各组大鼠的空间学习记忆能力;比色法测定脑皮质内的SOD活性及MDA含量;实时荧光定量RT-PCR检测海马组织内P16INK4a、P21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平;Western blot检测衰老相关基因P16INK4a、P21Cip1/Waf1蛋白的表达。结果:与脑衰老组相比,Rg1抗脑衰老组大鼠学习记忆能力显著提高,脑组织内SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,P16INK4a、P21 Cip1/Waf1mRNA及蛋白的表达水平也显著降低。结论:Rg1具有延缓D-半乳糖大鼠脑衰老的作用。其机制可能与增强脑组织的抗氧化能力,下调脑组织内P16INK4a、P21Waf1 mRNA及蛋白的表达水平有关。

二至丸对D-半乳糖诱导大鼠肾细胞衰老的保护作用

目的探讨二至丸对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的大鼠肾(NRK)细胞衰老的保护作用。方法使用不同浓度D-gal(1、5、10、20、40g/L)作用不同时间(24、48、72h)诱导NRK细胞衰老,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)染色法鉴定细胞衰老;荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷(Fluorescein di-β-D-galactopyranoside,FDG)法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶活性;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力;以GSH-PX、SOD活力与MDA含量检测细胞氧化应激水平;构建体外NRK细胞衰老模型。根据FDG的结果来评估不同浓度二至丸(0.01、0.1、1g/L)处理对衰老NRK细胞的影响,检测GSH-PX、SOD活力与MDA含量的变化来探讨二至丸对衰老NRK细胞的保护作用。结果与对照组相比,模型组(20g/L D-gal处理48h)β-半乳糖苷酶染色阳性率明显增加,β-半乳糖苷酶活性明显增加;GSH-PX、SOD活力下降,MDA含量增加(P<0.05~0.01),细胞活性无明显变化。与模型组相比,给药组β-半乳糖苷酶含量明显降低,阳性染色率显著下降,GSH-PX、SOD活力升高,MDA含量明显降低(P<0.05~0.01)。结论建立D-gal诱导的NRK细胞衰老模型;二至丸能够减轻D-gal诱导的NRK细胞衰老的程度,其保护效应的产生可能与二至丸抗氧化应激效应相关。

当归多糖对D-半乳糖致衰老小鼠睾丸的保护作用

目的探讨当归多糖(ASP)对D-半乳糖(D-Gal)所致衰老小鼠睾丸的保护作用与机制。方法C57BL/6 J雄性小鼠40只,随机分为对照组、ASP对照组、衰老模型组ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组:小鼠颈背部皮下注射D-Gal(120 mg/kg,qd×42);对照组小鼠皮下注射等时与等量生理盐水;ASP对照组小鼠皮下注射等量生理盐水15 d,第16天开始腹腔注射ASP(140 mg/kg,qd×27);ASP衰老模型组小鼠建立方法同衰老模型组小鼠,第16天开始腹腔注射ASP(同ASP对照组)。模型复制完成第2天,采集各组小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取睾丸测定脏器指数;石蜡切片,HE染色观察睾丸组织学形态;做冷冻睾丸组织切片,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察睾丸组织细胞衰老情况;制备睾丸组织匀浆上清液,酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法检测总抗氧化能力(T-AOC),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测衰老相关蛋白P53、P21表达水平。结果各组间睾丸湿重及睾丸器官指数无明显差异,但衰老模型组小鼠睾丸组织结构损伤明显,生精小管的细胞层数减少,生精细胞出现退变,睾丸间质细胞明显减少;血清睾酮水平显著降低;SA-β-Gal染色阳性细胞密度显著增加;睾丸组织匀浆中SOD活性及T-AOC显著降低,MDA含量显著升高;P53、P21蛋白表达显著升高。与衰老模型组比较,注射ASP干预衰老过程,睾丸组织学结构损伤明显减轻,生精细胞退变与睾丸间质细胞减少均不明显;血清睾酮水平降低不明显;SA-β-Gal染色阳性细胞密度减少;SOD活性和T-AOC增高,MDA含量降低;P53、P21蛋白表达显著降低。结论 ASP具有拮抗致衰剂Dgal对睾丸的损伤作用,其机制可能与ASP抑制氧化应激损伤及抑制衰老相关基因表达有关。

石榴籽油在D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的抗氧化作用

研究了石榴籽油(PGSO)在D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的抗氧化作用。将60只昆明小鼠随机分为6组:健康组、模型组、维生素E(V_E)阳性对照组以及PGSO低、中、高剂量组,持续给药45 d后,测定各组小鼠的体重,分析PGSO对小鼠肝、肾、脑与血清中抗氧化系统的作用;检测各组小鼠肝、肾中G6PD的活性和NADPH含量。结果表明:与模型组比较,PGSO可拮抗小鼠体重的减轻,降低肝、肾、脑及血清中MDA含量,增加GSH含量,提高T-AOC活性以及抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性;且PGSO各剂量组小鼠肝和肾中G6PD的活性均增强,NADPH含量均增加。研究表明PGSO对D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的氧化应激具有明显的拮抗作用。

耳针、艾灸对D-半乳糖致衰老大鼠血清褪黑素含量及其昼夜节律性的影响

目的 :探讨耳针、艾灸延缓衰老的可能作用机理。方法 :通过皮下注射D 半乳糖建立衰老模型大鼠 ,在造模过程中 ,各治疗组分别给予耳针、艾灸、耳针 +艾灸治疗 ,治疗 6周后 ,测定各组血清褪黑素 (MT)昼夜含量、血清MT昼夜节律性振幅变化、松果体细胞数。结果 :(1)与模型组相比 ,各治疗组夜间血清MT含量增加、MT昼夜节律性振幅变大、松果体细胞数增多 ,其中以耳针 +艾灸组最为显著。 (2 )各组日间血清MT含量比较 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,各组血清MT含量呈现昼低夜高的特点。结论 :耳针、艾灸通过对MT及松果体的调节而起到延缓衰老的作用。