补喂D-天冬氨酸对哺乳期湖羊羔羊生长及生长轴相关激素水平的影响

本研究旨在探究补喂D-天冬氨酸对湖羊哺乳羔羊生长及生长轴相关激素水平的影响,为D-天冬氨酸在哺乳期湖羊羔羊生产中的应用提供科学依据。采用单因素多水平试验设计方法,将体重(5.77±0.7)kg、8日龄的32只羔羊随机均分为4组,每组8只(4♂+4♀),分别为CON组、5 D-Asp组、10 D-Asp组、20 D-Asp组。在此基础上,D-Asp补喂水平分别为0、5、10、20 mg/kg BW只,进行为期38 d的试验。结果表明:(1)补喂D-Asp对哺乳期羔羊末重及平均日增重无显著影响(P>0.05)。(2)补喂D-Asp使哺乳期羔羊血浆中生长激素释放激素、生长激素、胰岛素样生长因子-I含量呈线性增加(P<0.01)。(3)哺乳期羔羊补喂14 d D-Asp血浆中,20 D-Asp组与10 D-Asp组相比尿素的含量降低了23.82%(P<0.05),20 D-Asp组胰岛素的含量与CON组相比显著降低了15.92%(P<0.01),10 D-Asp组甘油三酯的含量与CON组相比显著降低了56.95%(P<0.05);哺乳期羔羊补喂28 d D-Asp血浆中,5 D-Asp组与CON组相比尿素含量显著降低了26.43%(P<0.05),10 D-Asp组葡萄糖的含量与5 D-Asp组相比显著降低了13.01%(P<0.05),20 D-Asp组胰岛素的含量与CON组相比显著降低了12.62%(P<0.01)。综上所述,给湖羊哺乳期羔羊补喂D-Asp能显著提高血浆生长激素释放激素水平,进而提高生长激素、胰岛素样生长因子-I水平,且具有剂量依赖性,但对湖羊哺乳期羔羊生长总体无显著影响,其原因需要进一步研究。

反相高效液相色谱法测定小鼠中脑内D-天冬氨酸和D-谷氨酸

建立了测定生物样品中微量D-天冬氨酸、D-谷氨酸的高效液相色谱法。以邻苯二甲醛(OPA)-N-异丁酰基-L-半胱氨酸柱前衍生氨基酸对映体,醋酸钠-甲醇-乙腈混合液为流动相,在Shim-packVP-ODS柱上,采用梯度淋洗技术,2种氨基酸对映体在40min内完全分离。以荧光检测,D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)的浓度在1.0×10-8～1.0×10-6mol/L时,其浓度与峰面积呈良好的线性关系。当信噪比为3(S/N=3)时,D-Asp和D-Glu的检出限分别为2.0×10-9mol/L和1.0×10-9mol/L。将方法运用于帕金森模型小鼠中脑中D-Asp和D-Glu含量的测定,对照组与模型组中脑D-Asp含量无显著性差异,D-Glu含量呈现显著性差异。推测在脑组织里,内源性的D-Asp的合成及转运不受神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MTPT)的毒害仍保持原有的动态平衡;而D-Glu可能具备与L型对映体相似的兴奋毒性,参与帕金森疾病的发病机制。

血管性痴呆大鼠认知障碍的N-甲基D-天冬氨酸受体机制(英文)

目的观察四血管阻断(four-vesselocculusion,4VO)大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDAR)的变化规律,探讨其在血管性痴呆(vasculardementia,VD)形成中的作用机制。方法改良的Pulsinelli's4VO法建立大鼠VD模型;电脑控制的穿梭箱系统和离体海马脑片诱导的CA1区长时程增强(long-termpotentia-tion,LTP)检测大鼠学习记忆;原位杂交方法检测大鼠海马NM-DAR1mRNA的表达。结果VD组大鼠的主动回避反应(activeavoidanceresponse,AAR)在2周时较对照组显著下降(P<0.05),4周和2个月时更加明显(P<0.01),海马脑片LTP的诱导出现明显障碍;VD组2周时CA1和CA3区NMDAR1mRNA表达较对照组增高,DG区无明显改变;4周和2个月时海马各区表达均减低。结论大鼠海马区NMDAR与学习记忆有关,在脑缺血的早期表达增高介导了兴奋毒性作用;但在缺血后期,NMDARmRNA表达减低可能与学习记忆损害有关,为进一步进行NMDAR拮抗剂和激动剂治疗VD的研究提供了实验依据。

血管性痴呆大鼠N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体变化机制的研究

目的研究血管性痴呆(VD)大鼠形成过程中N-甲基D-天冬氨酸-2B受体(NR2B)的变化规律及作用机制。方法永久性结扎双侧颈总动脉制备VD大鼠模型,用Morris水迷宫衡量大鼠的学习记忆水平,用免疫组化法检测大鼠海马NR2B的表达。结果随缺血时间延长,VD大鼠的学习记忆能力下降,缺血4周后与对照有显著差异(P<0.01);NR2B的表达随缺血时间变化,呈先升后降改变,缺血2周时表达最多,与对照有显著差异(P<0.01),此后逐渐减少,并明显低于对照组(P<0.01),缺血16周时表达最少。结论VD大鼠学习记忆的改变与海马NR2B的变化相关,缺血早期NR2B过表达产生神经毒引起该能力下降;而在慢性缺血期,这种损害则是因NR2B含量不足难以完成生理功能所致。

D-天冬氨酸的制备和应用

D 天冬氨酸是一种重要的手性化合物,在医药、食品等方面具有重要作用,特别是作为手性药物合成的前体、中间体在医药行业中有着重要的应用前景。目前其制备方法主要是消旋体的拆分,其中酶法拆分最具竞争力。综述了D 天冬氨酸的应用及制备方法,为开展D 天冬氨酸的制备及应用研究提供了一定的依据。

单细胞中D-天冬氨酸和D-谷氨酸的毛细管电泳分析

建立了一种毛细管电泳-激光诱导荧光检测单个神经细胞中D-天冬氨酸和D-谷氨酸的方法.以萘二甲醛(NDA)为衍生试剂,β-环糊精(β-CD)和脱氧胆酸钠(SDC)为拆分体系,对16对氨基酸对映体的NDA衍生物进行了手性拆分研究.考察了蛋白氨基酸和一些胺对检测D-天冬氨酸和D-谷氨酸的影响,并确立了最佳分离条件,从而建立了单细胞中D-天冬氨酸和D-谷氨酸的检测方法,并对海兔的单个神经细胞中D-天冬氨酸和D-谷氨酸进行了检测.

N-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸-β-苄酯的合成

从D-天冬氨酸出发,经两步合成目标产物N-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸-β-苄酯,总收率达到55%,是文献报道的4倍,结构经ESI-MS、IR、1HNMR、13CNMR等表征.

以L-天冬氨酸为原料制备D-天冬氨酸的新方法

以L-天冬氨酸为原料经过酯化、消旋、拆分和水解制备D-天冬氨酸。使L-2，3-二苯甲酰酒石酸（L—DBTA）与DL-天冬氨酸-β-甲酯在水溶液中于65—70℃反应形成非对映体盐，冷却到室温，D-天冬氨酸·L—DBTA盐析出，过滤后再经水解得到D-天冬氨酸，收率78．2％，旋光纯度达到99％以上。

D-天冬氨酸与帕金森模型鼠的相关性研究

目的:观察帕金森模型鼠中脑D-天冬氨酸的变化情况,探讨兴奋性神经递质右旋对映体与帕金森疾病的相关性。方法:成年C57-BL雄性小鼠随机分为对照组、模型组。应用柱前衍生高效液相色谱方法检测中脑D-天冬氨酸含量。结果:对照组与模型组中脑D-天冬氨酸含量无显著性差异。结论:中脑组织中内源性D-天冬氨酸的合成及转运不受神经毒素MPTP的影响,仍保持原有的动态平衡,可能没有参与帕金森病的发病机制。

SNI模型大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体和降钙素基因相关肽的表达

【目的】观察坐骨神经分支选择结扎切断模型（Spared nerve injury model,SNI）痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体（NMDAR）、降钙素基因相关肽（CGRP）表达的变化。【方法】健康雄性SD大鼠27只,体重220-280 g。随机分为3组（n=9）。对照组（C组）;假手术组（sham组）;坐骨神经分支选择结扎切断模型组（SNI组）。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,每组均进行疼痛行为学观察。所有组别均在模型制作后d2、d7、d14天观察行为学改变后分批取材（每批3只）,用免疫组化法观察大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。【结果】与C组和sham组比较,SNI组在SNI术后均出现机械性异常疼痛痛阈降低（P〈0.01）,但热刺激后爪退缩潜伏时间无统计学意义（P〉0.05）;同时SNI组大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加（P〈0.01）。【结论】SNI模型大鼠出现典型的疼痛行为学特征时,其脊髓背角NMDAR和CGRP表达也明显增强,并且脊髓背角NMDAR和CGRP的变化趋势大体相同。

生物拆分法制备D-天冬氨酸

[目的]利用L-天冬氨酸-β-脱羧酶生物转化拆分DL-天冬氨酸得到D-天冬氨酸的工艺过程。[方法]研究了碳源、有机氮源、转化过程pH值和转化温度对发酵液L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活力的影响,探讨了L-天冬氨酸-β-脱羧酶的热稳定性及L-丙氨酸对L-天冬氨酸-β-脱羧酶热稳定性的影响,并测定了拆分产物的主要指标。[结果]糖类对该酶的生物合成有明显的阻遏作用,而富马酸和苹果酸是很好的碳源物质。有机氮源中蛋白胨浓度对发酵液酶活力的影响较大,当牛肉膏浓度为0.2%,玉米浆为1.0%,蛋白胨为1.0%时发酵液酶活力可以达到最高。转化过程最适pH值为6～7。转化过程最适温度50℃。温度超过60℃酶失活比较严重。浓度6.0%以上的丙氨酸能显著提高转化过程中酶的热稳定性。[结论]利用D-天冬氨酸和L-丙氨酸的等电点的差异来分离提取D-天冬氨酸的制备工艺,其工艺简单,原料价格适宜,提取方便,工艺路线要比其他方法更便捷,更容易产业化。

D-天冬氨酸(DAA)和锌镁合剂(ZMA)对大鼠合成代谢类激素的影响

为评定D-天冬氨酸(DAA)和锌镁合剂(ZMA)的功效,并比较两者的合并效果,将4组SD大鼠连续4周每日分别摄入DAA/ZMA/两者合剂/安慰剂,随后主动脉取血测血清锌(Zn)、镁(Mg)、DAA、总睾固酮(TT)、游离睾酮(FT)、黄体生成素(LH)、雌性激素(ES)、促性腺激素释放激素(GnRH)、D-天冬氨酸氧化酶(DDO)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、生长激素(GH)以及皮质醇(CORT)浓度;取样睾丸、肾上腺、甲状腺、脑垂体和松果体测DAA浓度。发现连续4周摄入DAA显著增加了大鼠睾丸DAA含量并可能刺激了TT、FT和GH的合成分泌;ZMA对于血清合成类激素无显著影响;同时摄入两者却会抑制DAA对大鼠合成类激素的刺激作用。

离子交换法分离D-天冬氨酸和L-丙氨酸

对离子交换法分离D-天冬氨酸和L-丙氨酸的工艺条件进行了研究。综合考虑树脂对D-天冬氨酸和L-丙氨酸的吸附容量及相对选择系数,选择了一种适合该体系分离的树脂—XH-1,并对吸附条件及洗脱条件进行了研究,确定了最佳工艺条件,为今后工业应用提供一定的依据。

简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因的克隆和表达

目的克隆简单异尖线虫Ⅲ期幼虫(L3)的D-天冬氨酸蛋白酶基因(AsAP)全长,研究其表达蛋白的特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因表达序列标签的部分信息,设计特异引物并用cDNA末端快速扩增技术得到AsAP全长序列,分析推导的蛋白序列特征,并预测其三级结构。用RT-PCR扩增简单异尖线虫L3的AsAP基因编码序列,产物用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,连入表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果简单异尖线虫L3的AsAP基因全长1 753 bp,编码453个氨基酸,与锡兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)的D-天冬氨酸蛋白酶相似性达65%。该蛋白具有两个保守的催化域,1个活性中心翼环,S2和S3亚位点各1个;具有由20个氨基酸组成的N端信号肽,构成疏水性强的跨膜域。不同浓度的IPTG(0.2～1.6 mmol/L)诱导对AsAP表达的影响较小,1.0 mmol/LIPTG诱导2 h后表达量达到最高水平。结论克隆并表达了简单异尖线虫的D-天冬氨酸蛋白酶。

N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂预防瑞芬太尼诱发痛觉过敏的Meta分析

目的系统评价围术期应用N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂预防瑞芬太尼诱发痛觉过敏的作用。方法检索Cochrane图书馆、Pub Med、Embase、Web of Science、OVID数据库,收集围术期应用N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂预防瑞芬太尼的随机对照试验。由两位研究者根据纳入与排除标准筛选文献并进行质量评价后,提取文献中的相关资料,包括术后疼痛评分、首次术后镇痛药物需求时间、镇痛药物需求量,以及术后不良反应,利用Rev Man5.2软件进行Meta分析。结果最终筛选出12篇符合条件的文献,共纳入577例患者,其中对照组292例,N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂组285例。Meta分析结果显示N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂组的术后疼痛评分、首次术后镇痛药物需求时间以及镇痛药物需求量均低于对照组,两组术后恶心呕吐及出现精神症状的几率无显著性差异,但N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂组出现视力障碍的几率明显高于对照组。结论 N-甲基D-天冬氨酸受体拮抗剂能够对抗瑞芬太尼诱发的痛觉过敏,但要注意使用后出现视力障碍。

大鼠肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化

目的:观察肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化。方法:实验于2005-04在河北医科大学解剖系中心实验室完成。选用10～12周龄健康雄性SD大鼠66只,随机数字表法分为3组:正常组(n=6)、假手术模型组、缺血-再灌注组,后2组又分为6,12,24,48及72h5个时间点,每个时间点6只。制备大鼠肢体缺血-再灌注模型,夹闭双侧股动脉根部4h,去夹再分别开放6,12,24,48,72h,假手术模型组同样手术处理,但不夹闭股动脉,不环扎橡皮筋。将正常组、不同时间点(6,12,24,48及72h)的缺血-再灌注组以及假手术模型组大鼠,常规灌注取材及制备石蜡切片,免疫组织化学染色并利用图像分析系统分析。结果:在实验过程中,实验动物无脱失值,全部进入结果分析。①肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1区锥体层神经元表达灰度值分别为(14.64±2.71),(18.90±1.40),(24.71±2.89),(22.10±2.62)和(21.62±1.98),与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6h未见显著变化,再灌注12,24,48,72h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义(P<0.01/0.05)。其中再灌注24h前后达到峰值,灰度值是正常组的172%。②肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA3区锥体层神经元表达灰度值分别为(10.47±2.13),(14.26±1.54),(26.32±2.83),(16.18±2.43)和(15.60±2.70),与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6h组未见显著变化,再灌注12,24,48,72h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义(P<0.01/0.05);其中再灌注24h前后达到峰值,灰度值是正常组的261%。③假手术模型组与正常组比较,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1、CA3区锥体层神经元表达灰度值未见显著性变化。结论:N-甲基-D-天冬氨酸1/2B型受体介入了肢体缺血-再灌注致海马损伤的病理过程。

D-天冬氨酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和营养物质表观消化率的影响

本试验旨在研究D-天冬氨酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、血清游离氨基酸含量和营养物质表观消化率的影响。选取45日龄体重为(10.74±0.25)kg的三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪44头,随机分为4组,每组11个重复,每个重复1头猪,其中对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂在基础饲粮中添加50、500和5000 mg/kg D-天冬氨酸的试验饲粮。正试期为28 d。结果表明:1)与对照组相比,试验第14天,试验Ⅰ组断奶仔猪体重显著提高(P<0.05);添加50 mg/kg D-天冬氨酸显著提高断奶仔猪平均日增重和平均日采食量,且显著降低料重比(P<0.05)。2)与对照组相比,添加D-天冬氨酸对断奶仔猪脏器指数无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,试验Ⅱ和Ⅲ组的血清总蛋白(TP)含量显著提高(P<0.05),3个试验组血清白蛋白(ALB)含量和碱性磷酸酶(ALP)活性亦显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,试验组的血清异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和缬氨酸(Val)含量显著降低(P<0.05),但是赖氨酸(Lys)含量显著升高(P<0.05)。试验Ⅲ组血清天冬氨酸(Asp)含量显著高于其他3组(P<0.05),试验Ⅱ组的血清甘氨酸(Gly)和半胱氨酸(Cys)含量显著高于其他3组(P<0.05)。5)与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组粗脂肪表观消化率显著提高(P<0.05);试验Ⅰ组的粗蛋白质、总能和粗纤维表观消化率最低。综上所述,在低蛋白质平衡饲粮中添加50 mg/kg的D-天冬氨酸可改善仔猪生长性能,促进营养物质吸收利用。

D-天冬氨酸生理功能及其在畜禽生产中的应用

D-天冬氨酸(D-Asp)主要为一种具有多种生理功能的神经递质,同时也参与动物体内的激素调节、保护神经、调控生殖,还具有一定的营养潜力,可以应用到医药、食品及畜禽生产等行业中。本文综述了D-Asp的生理功能及其在实际畜禽生产中的应用。

D-天冬氨酸对葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠抗氧化和炎症反应的影响

本试验旨在探讨D-天冬氨酸(D-Asp)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道损伤的恢复效果。试验选取40只体重相近的C57BL/6J雄性小鼠,随机分为5组,即对照组、0 mmol/L D-Asp组、0.15 mmol/L D-Asp组、2.30 mmol/L D-Asp组和7.70 mmol/L D-Asp组,每组8个重复,每个重复1只,单笼饲养。试验第1~7天,对照组小鼠正常饮用蒸馏水,其他各组小鼠均饮用含3.5%DSS的蒸馏水,诱导小鼠结肠炎。试验第8天开始,对照组和0 mmol/L D-Asp组小鼠直肠灌注0.1 mL生理盐水,其他各组分别直肠灌注0.1 mL浓度为0.15、2.30和7.70 mmol/L的D-Asp溶液,每隔1 d灌注1次,共灌注5次。结果表明:1)与对照组相比,0 mmol/L D-Asp组小鼠第5天体重和平均日采食量显著降低(P<0.05),结肠长度变短并出现浸血现象。与0 mmol/L D-Asp组相比,7.70 mmol/L D-Asp组小鼠第12~14天体重和平均日采食量显著提高(P<0.05),结肠变长,绒毛高度增高及隐窝深度变浅,杯状细胞排列更规则。2)与0 mmol/L D-Asp组相比,7.70 mmol/L D-Asp组的血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)活性显著降低(P<0.05),结肠中天冬氨酸/谷氨酸载体2(SLC25A13)mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),结肠中白细胞介素-6(IL-6)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和天冬氨酸/谷氨酸载体1(SLC25A12)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。由此可见,直肠灌注D-Asp可通过提高抗氧化酶的活性和相关基因的表达,抑制炎性细胞因子的分泌,改善结肠形态结构,从而促进因DSS引起的小鼠结肠炎损伤修复。

抗N-甲基D-天冬氨酸受体脑炎动物模型的研究进展

抗N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎是一类严重的自身免疫性神经精神疾病。当前研究提示自身免疫性抗体的致病性可能是抗NMDAR脑炎的关键机制,但更深层次的发病机制尚未阐明。建立理想的动物模型有助于深入揭示抗NMDAR脑炎的潜在致病机制并探究有效的治疗靶点。近年来,不断有关于抗NMDAR脑炎的动物模型报道,本文综述了近年来已报道的抗NMDAR脑炎动物模型的基本特点及研究应用,旨在为进一步探究抗NMDAR脑炎的发病机制及治疗靶点提供参考。