Rh缺失型D(D--)血型的免疫学检测及稀有血型库分析

目的探讨Rh缺失型D(D--)的基因型和血清学特点。方法采用血型血清学对1例表型为D--患者血清进行检测并通过基因测序对其进行基因分型。结果被检者血清抗筛、主侧配血在微柱凝胶法中均为4+凝集,而在盐水法中不凝集;自身对照及次侧配血在盐水法及微柱凝胶法中均不凝集。经血清学方法检测,该被检者血型表现为D--表型;基因分型证实,RHD基因未见突变,其相应抗原正常表达,而RHCE基因第1外显子第48碱基发生了48G>C的纯合突变,同时缺失了第2至第9外显子,导致RHCE基因相应抗原无法正常表达。结论D--与RHCE基因异常有关,怀孕或者输血均可能诱发机体血清中产生抗Hr0抗体。因此,亟需完善我国D--稀有血型库。

Rh缺失型D--临床及家系调查分析2例

目的探讨Rh缺失型D--患者临床特点,并评价家系调查及血清学检查在Rh缺失型D--诊断中的作用。方法对近期收治的2名疑似Rh缺失型D--患者的临床表现与血型血清学检查结果进行分析,并作家系调查。结果2名患者分别来自近亲和非近亲婚配的家系,2家系调查发现亲代成员血清学表型均为纯合子,分别是D+C+c-E-e+和D+C-c+E+e-。2名患者均发生了严重的母儿Rh血型不合溶血病,血清学检查证实为RhD--表型。结论Rh缺失型D--可发生在近亲和非近亲婚配的家系中,并可导致严重的新生儿溶血病;血清学检查结合家系调查对Rh缺失型D--的诊断具有重要意义。

Rh缺失型D--个体及其家系成员基因分型与序列分析

目的初步探讨Rh缺失型D--个体发生的分子机制。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),对两例Rh缺失型D--个体及其家系成员RHD与RHCE基因多个外显子与内含子进行扩增。根据PCR-SSP结果,对所有与血清学表型不符的异常扩增片段进行克隆测序。结果两例Rh缺失型D--个体PCR-SSP扩增后获得D、e的基因相关片段。经测序发现,RhD--个体1第5外显子第22位核苷酸出现缺失,48与90位发生点突变。RhD--个体2第5外显子第89位发生突变。结论Rh基因外显子的缺失以及单个核苷酸的缺失与突变可能是导致Rh缺失型DD--形成的重要原因之一。

两例D--个体的血清学鉴定和基因分析

目的分析研究2例D--表型患者的血清学和基因型的特征。方法采用盐水法鉴定2位患者的ABO、Rh血型;采用盐水法和抗球蛋白法对样本进行抗体筛查和抗体鉴定;测序分析样本的RHCE、RHD及RHAG的外显子序列。结果2位患者血型均为B型D--,抗体筛查阳性,血清中存在抗-Hro。患者1的RHCE基因型为RHCE-D(3-7)-CE,患者2的RHCE基因型为RHCE-D(3-8)-CE。结论2例D--表型形成的分子机制与RHCE基因和RHD基因之间的基因重组有关;D--表型易产生抗-Hro。

利用D--外周血B细胞构建单克隆抗-C杂交瘤细胞株

目的以1例稀有的O型D--献血者外周血单个核细胞为实验对象,制备分泌Rh血型系统单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法无菌分离外周血白细胞,经淋巴细胞分离液分离得到单个核细胞(PBMCs),利用B95-8培养上清中的EB病毒(EBV),转化PBMCs中的B淋巴细胞使其母细胞化。血清学筛选分泌特异性抗体的单一B细胞克隆并扩大培养,与SHM-D33瘤细胞在电刺激下融合,经含有次黄嘌呤(Hypoxantine,H)、氨基蝶呤(Aminopterin,A)、胸腺嘧啶核苷(Thymidine,T)、脱氧胞嘧啶核苷(2-Deoxycytide,D)、毒毛旋花苷(Ouabain,O)的培养基,即HOTD(HATD+Ouabain)选择性培养、微量板抗体筛选以及有限稀释亚克隆,建立分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,血清学和流式细胞试验鉴定抗体特异性。结果从D--外周血转化B淋巴细胞培养上清中,初筛得到与R;R;(DCe/DCe)O型红细胞凝集,与R;R;(DcE/DcE)O型红细胞不凝集的单个细胞克隆3A6-C6,初步鉴定抗体特异性为抗-C,与SHM-D33骨髓瘤细胞杂交后建立了持续稳定分泌IgM抗-C的杂交瘤细胞株。结论本研究从外周血B细胞开始构建单克隆杂交瘤细胞株,为Rh血型系统血清学单克隆试剂的研发和改造奠定了基础。

Rh缺失型D--个体及家庭成员的血型鉴定与遗传分析

目的:分析Rh缺失型D--个体及其家庭成员的血型鉴定结果和遗传背景.方法:采集产妇及其家庭成员血液标本鉴定ABO血型、Rh血型,并对产妇及其子进行抗体释放试验(DAT)及抗人球蛋白试验,采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法扩增产妇及其家庭成员的RHD、RHCE基因特异性序列,分析扩增产物.结果:产妇、其丈夫、患儿、其女、其母、其姐、其兄ABO血型鉴定结果显示均为A型,其妹为AB型.产妇Rh血型为D--,存在C、c、E、e抗原缺失现象;其夫及两子女Rh血型均为D+C+c-E-e+,均有C、e抗原.产妇DAT试验阴性,患儿DAT实验阳性(++);抗体鉴定阴性;产妇抗人球蛋白试验强阳性,与所有细胞均发生强凝集(+++),产妇自身对照无凝集.产妇及其家庭成员PCR结果证实,产妇RHD基因未见异常,亦未检出RHCE基因的特异性序列;其他家庭成员均有正常表型及RHCE基因产物,且产妇及其家庭成员PCR结果与血型学表型基因相符.结论:RHCE基因缺失可能是引起Rh缺失型D--的重要分子基础.

Rh缺失型D--个体及家系成员Rh膜复合物蛋白的定量分析

目的考察罕见血型Rh缺失型D--个体及家系成员Rh膜复合物蛋白的变化情况。方法采用流式细胞仪测定红细胞膜上D、Band3、CD47、GPA、LW、RhAG蛋白的表达量。结果先证者、父亲、母亲、女儿、丈夫D、Band3、CD47、GPA、LW、RhAG蛋白的表达量与对照的比值为:2.38、1.61、1.83、2.00、0.62;1.03、0.72、1.12、0.85、0.99;0.35、0.79、0.66、0.88、0.91;0.86、0.80、0.91、0.81、0.87;2.46、未做、2.36、2.30、1.12;0.70、0.78、0.93、0.86、0.97。结论 D--个体及家系成员LW的表达与D抗原的表达量呈正相关,D--个体CD47的表达减少,其他蛋白变化不大。

1例新生儿溶血病的Rh缺失型D--血型鉴定及家系调查

与ABO系统不同,Rh血型系统是红细胞血型中最复杂的一个系统,而Rh缺失型D--则是该血型系统中一种极为罕见的变异体,血清学表现为D抗原的增强和其他抗原(C、c、E、e)抗原的缺失。本例新生儿因发生溶血病,多次交叉配血失败,经鉴定其母亲为Rh缺失型D--,现报道如下。1临床资料产妇,27岁,A型血,孕3产2,无输血史;患儿足月出生,羊水污染Ⅰ度,24 h内出现黄疸,肌张力减退。

RhD--表型引起的胎儿新生儿溶血病的免疫学分析--附1例报道

目的分析1例胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)产生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法使用血清学方法对患儿及其母亲进行ABO血型、Rh分型,血液抗体细胞,谱细胞分析,探讨导致胎儿溶血的抗体以及Rh缺失型D--的血型血清学特点,对产妇进行RH基因序列分析。结果患儿母亲血型为O型,血清学试验结果显示Rh缺失型D--,怀疑为多次妊娠产生针对Rh高频抗原的抗-Hr0,抗体通过胎盘屏障,使患儿获得针对Rh高频抗原的抗-Hr0,导致HDFN,基因检测结果为RHCE^(*)Ce/RHCE^(*)Ce。结论对产妇开展Rh缺失型D--的形成机制进行深入研究,为HDFN换血治疗提供临床价值,也为特殊血型人群输血提供临床依据。

1例Rh缺失型D--导致新生儿溶血病临床及家系的调查分析

目的分析1例受检产妇交叉配血不合及患儿新生儿溶血病(HDN)发生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法对产妇、其夫及患儿标本进行ABO及Rh血型鉴定,对产妇及患儿标本进行血型抗体检测,并对产妇家系作血型调查。结果产妇为Rh缺失型D--,产生IgG的多凝集抗体。结论产妇为Rh缺失型D--,产生IgG的多凝集抗体,是造成其交叉配血不合及患儿HDN发生的原因;产妇Rh缺失型D--形成,有一定遗传因素的影响。

Rh缺失型D--个体及其家系成员基因分型及遗传背景分析

目的分析Rh缺失型D--个体及其家系成员的基因分型及遗传背景。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),对Rh缺失型D--个体及其家系成员的RHD和RHCE基因的特异性序列进行扩增,并对扩增产物进行分析。结果先证者家系成员PCR结果与血清学表型基本相符,先证者RHD基因未见异常,未检出RHCE基因的特异性序列,其他家系成员均有正常表型及RHCE基因PCR产物。结论先证者RHCE基因大部分或全部缺失是造成其Rh缺失型D--的重要分子基础。先证者RHCE基因缺失,很可能其父母双方分别携带一条D--单倍型,在遗传时均将其遗传给先证者,从而形成Rh缺失型D--。

稀有D--表型产妇血清学检测及家系调查

目的:检测分析Rh缺失型D--的血型血清学特性和遗传背景。方法:使用特异性抗体检测先证者红细胞表面的D、C、c、E和e抗原,吸收试验进一步证实D--表型;采用经典抗球蛋白法鉴定先证者血清中的抗体特异性及效价;检测家庭成员的Rh表型,分析D--的家系遗传。结果:先证者为D--表型,血清中存在针对高频抗原R17的抗体,效价为512,家庭成员中先证者的妹妹为D--,父亲、母亲、姐姐及2个孩子均为D--杂合子。结论:D--表型存在家族遗传特性,亲属的Rh表型筛查有助于D--血液的获取。

维生素D治疗全面性发育迟缓患儿的临床疗效研究

背景 除了某些有明确病因的代谢性疾病导致的全面性发育迟缓(GDD),康复治疗是GDD的主要治疗方式;维生素D通过影响神经营养因子在调节神经细胞的发育和分化方面发挥着重要的神经保护作用;但目前关于补充维生素D对GDD患儿临床疗效的研究开展较少。目的 探讨补充不同剂量的维生素D对GDD患儿康复治疗的临床效果。方法 于2020年9月—2022年6月选取在郑州大学第三附属医院康复医学科首次住院就诊的120例GDD患儿为研究对象,采用随机区组化的方法将其分为常规组(38例)、400 U组(37例)和1 200 U组(35例)。常规组仅进行常规康复治疗;400 U组在常规康复治疗的基础上给予口服400 U/d维生素D;1 200 U组在常规康复训练的基础上给予口服1 200 U/d维生素D。收集3组患儿的性别、就诊年龄等基本资料;于入院时(治疗前)及第3个疗程末(治疗后)行血清25羟维生素D[25(OH)D]水平检测和Gesell发育量表评估[评估适应能力、大运动能力、精细运动能力、语言能力和社交能力5个能区的发育商(DQ)];记录发生在患儿住院期间不良事件的次数,并对上述资料进行分析比较。结果 3组患儿性别、居住地、出生季节、分娩方式、就诊年龄、出生体质量、出生胎龄、主要就诊原因比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前,3组患儿25(OH)D水平、Gesell量表各能区DQ值比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,1 200 U组患儿血25(OH)D水平、Gesell量表大运动能力、精细运动能力、语言能力DQ值高于常规组(P<0.05)。第1、2疗程期间,3组患儿不良事件发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);第3疗程期间,1 200 U组患儿不良事件发生率低于常规组及400 U组(P<0.05)。结论 补充1 200 U维生素D对GDD患儿的康复疗效有益,且能减少康复期间不良事件的发生率。

促黄体激素释放激素类似物的制备

以Rink Amide树脂为固相载体、N-芴甲氧羰基(Fmoc)保护氨基酸为原料,采用固相多肽合成法制备了一种促黄体激素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormone, LHRH)6位经D-构型半胱氨酸(D-Cys)取代的类似物[D-Cys^(6)]-LHRH。优化的裂解试剂为三氟乙酸-水-三异丙基硅烷(95.0∶2.5∶2.5,体积比),纯品的HPLC纯度为97.8%,总收率为47.5%。该方法简便高效、总收率高,为LHRH类似物的制备提供了参考,也为进一步构建LHRH受体靶向的多肽-药物偶联物奠定了基础。

血清铁蛋白和25-羟维生素D与老年非酒精性脂肪性肝病患者颈部血管斑块及心脏代谢指数的相关性

目的探究血清铁蛋白(SF)、25-羟维生素D[25-(OH)D]与老年非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者颈部血管斑块及心脏代谢指数(CMI)的相关性。方法选取医院128例老年NAFLD患者作为研究组,另选80例健康体检者资料为对照组。比较研究组和对照组及不同病变程度患者的血清Ferritin、25-(OH)D水平。根据是否形成颈动脉血管斑块将患者分为斑块组(n=36)和非斑块组(n=92)。比较两组临床资料,SF、25-(OH)D、CMI水平,分析影响老年NAFLD患者颈部血管斑块形成的多因素及血清Ferritin、25-(OH)D水平与患者颈部血管斑块及CMI的相关性。结果研究组血清SF值显著高于对照组(P<0.05),25-(OH)D水平显著低于对照组(P<0.05);SF水平:脂肪肝组<脂肪性肝炎组<肝硬化组(P<0.05),25-(OH)D水平:脂肪肝组>脂肪性肝炎组>肝硬化组(P<0.05);斑块组BMI、合并糖尿病、高血脂、血清ALT、AST、LDL-C、SF、水平、FPG、FINS、HOMA-IR、CMI、NFS值显著高于非斑块组(P<0.05),血清25-(OH)D水平显著低于非斑块组(P<0.05);多因素logistic回归分析显示,BMI、血清LDL-C、SF水平、CMI、NFS值升高是影响老年NAFLD患者颈动脉斑块形成的危险因素(P<0.05),血清25-(OH)D水平升高为保护因素(P<0.05);相关性分析显示,SF与NAFLD患者颈动脉斑块及CMI呈显著正相关(P<0.05),血清25-(OH)D水平与NAFLD患者颈动脉斑块及CMI呈显著负相关(P<0.05)。结论血清SF、25-(OH)D与NAFLD病情进展相关,且可能影响患者颈部血管斑块形成及心脏代谢,可作为NAFLD患者血管病变的诊治观察指标。

供应链金融对中小企业R&D投资效率的影响:基于融资约束视角

创新是中小企业保持竞争力、适应市场变化和实现可持续发展的关键。基于2016-2022年创业板中小企业相关数据,运用三阶段DEA分析、面板Tobit模型回归、二元Logistic回归等方法,探究供应链金融对中小企业R&D投资效率的影响。结果表明,供应链金融能够显著提高中小企业R&D投资效率,融资约束在二者间发挥遮掩效应。进一步分析发现,上述效应对供应链集中度较高的企业更为显著。结论可为发挥供应链金融筹资优势,促进供应链生态系统资源互补、信息共享的协同创新网络形成,进而支持中小企业创新活动提供理论支持。

研发网络嵌入、制度质量与全球价值链攀升

全球研发合作是各国突破创新边界限制、谋求科技进步、提升全球价值链地位的重要途径。各国(地区)政府纷纷将研发合作作为一项重要战略,在全球范围内寻求合作研发资源,参与研发网络。文章基于2007一2019年50个经济体专利合作数据刻画嵌入全球研发网络的结构特征,从研发合作的视角实证检验其对全球价值链攀升的影响及作用机理,并考察制度质量的门槛效应。结果显示:无论是全球研发网络嵌入广度还是深度均能显著促进经济体全球价值链攀升。这种积极作用通过人力资本结构升级和技术进步实现,并且发达经济体的价值链攀升效应显著;发展中经济体容易被“低端锁定”;不同技术密度行业嵌入全球研发网络的提升效应存在明显差异,嵌入广度对高技术产业、中高技术产业以及中低技术产业的GVC促进作用明显,但嵌入深度只对中低技术行业有显著的促进作用。为进一步探讨发达经济体和发展中经济体全球研发网络嵌入对GVC影响的异质性,引入制度质量这一门槛变量分析后发现,制度质量的改善影响全球研发网络嵌入并促进GVC攀升呈现阶段性特征。以上研究结论有助于从理论上阐释中国全球研发合作的影响效果,为中国制定研发合作战略提供参考借鉴。

药品集采政策与药企研发行为

药品集采政策会加剧医药行业竞争,从而影响医药企业的研发投入。基于药品集采前后三年医药企业的研发专利样本,针对药品集采政策对药企研发行为影响的回归结果表明,集采政策的实施会增加医药企业的研发专利数量,但医药企业所面临的转换成本和集采的预期市场收益,会影响医药企业的研发行为,并进一步影响医药企业的创新效率。因此,要降低医药行业的制度成本,加强医药企业之间的分工合作和并购重组,提升医药企业的创新效率,从而加快完善药品集中采购制度和推动健康中国的政策落实。

颗粒蛋白前体和神经丝轻链蛋白及维生素D对临床孤立综合征转归的预测价值

目的探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)、神经丝轻链蛋白(neurofilament light chain,NfL)和维生素D及其受体(vitamin D receptor,VDR)在临床孤立综合征(clinically isolated syndrome,CIS)患者发病及转归中的预测价值。方法收集2017年12月至2021年12月作者医院收治的96例CIS患者,其中男33例,女63例,年龄(33.13±8.86)岁;另收集性别、年龄和长期居住地与CIS患者相匹配的神经系统非炎症疾病(non-inflammatory neurological disease,NIND)患者30例为对照组,其中男11例,女19例,年龄(31.17±5.78)岁。采用酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测纳入者和首次转归为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者的血清和脑脊液PGRN、NfL水平,淋巴细胞上清液中VDR水平。采用超高效液相色谱-串联质谱法检测外周血上清液中维生素D水平[维生素D水平=25(OH)D2水平+25(OH)D_(3)水平]。对CIS患者进行每个月电话随访1次,3个月门诊随访1次,监测血常规、肝肾功能,如出现临床转归,行头和脊髓MRI检查。结果随访时间12~38个月,中位数为24个月。57例CIS患者转归为MS(59.38%)。与NIND组比较,CIS患者血清和脑脊液PGRN水平(血清:t=-2.746,P=0.007;脑脊液:t=-17.822,P=0.000)、NfL水平(血清:t=-17.627,P=0.000;脑脊液:t=-13.543,P=0.000)升高,血清25(OH)D_(3)(t=22.512,P=0.000)和VDR水平(t=12.315,P=0.000)降低。与未转归CIS患者相比较,转归MS的患者NfL基线水平(血清:t=25.052,P=0.000;脑脊液:t=8.362,P=0.000)增高,血清25(OH)D_(3)基线水平降低(t=-4.323,P=0.000);与转归MS前比较,转归MS后患者脑脊液PGRN水平升高(t=-5.909,P=0.000),血清维生素D(t=5.265,P=0.000)、25(OH)D_(3)水平(t=5.204,P=0.000)降低,血清和脑脊液NfL水平升高(血:t=-17.229,P=0.000;脑脊液:t=-8.949,P=0.000)。ROC分析显示,CIS患者外周血25(OH)D_(3)水平低于12.58 ng/mL、脑脊液NfL水平低于1383 pg/mL易转归为MS。结论CIS患者存在神经轴突损伤。PGRN尚不能预测CIS向MS转归,NfL是预测CIS转归为MS的潜在标志物。低维生素D水平可能是CIS致病及转归为MS的预测因素。

多障碍环境下巡检机器人路径规划优化研究

针对大规模、密集的障碍物分布,高效地搜索最佳路径是一个挑战,为规划出更短的巡检路线,并实现多障碍环境下的灵活避障,文中提出一种多障碍环境下巡检机器人路径规划优化方法。使用二维矩阵构建巡检环境模型,应用D*算法在巡检环境模型中进行巡检机器人路径规划,并将传统D*算法中的扩展步长方式改变为自适应扩展步长,使机器人在面积较大的巡检场地能够更快地完成巡检;将代价函数由欧氏距离替换为切比雪夫诺距离和曼哈顿距离融合的代价函数,并引入了平滑度函数优化线路规划结果,使规划的路径更为平滑,在遇到由于多种原因产生的新障碍物时可以重新规划路径。通过实验结果可知,无论是静态地图还是动态地图,该方法均可以快速准确地规划出一条最佳路线,并且在多种环境中应用该方法能够高效获取路径规划结果。