采用大孔吸附树脂纯化发酵液中D-3-苯基乳酸

为从发酵液中分离纯化D-3-苯基乳酸(D-3-phenyl lactic acid,PLA),利用重组大肠杆菌E.coli p ET-28aldhY52V转化底物苯丙酮酸(phenylpyruvic acid,PPA)合成PLA,采用离子交换法对PLA纯化工艺进行了初步研究。通过对6种常用阴离子交换树脂对PLA的静态吸附容量测定,确定了D315具有较强的PLA吸附性能。在固定床上样条件优化结果表明,上样流速为4 BV/h、径高比为1∶7时,上样吸附效果较好。利用二阶段洗脱工艺:第一阶段用100 mmol/L HCl进行洗脱,第二阶段用200 mmol/L Na Cl在5 BV/h流速下洗脱。洗脱验证结果表明,第一阶段洗脱液中PLA/PPA的质量浓度比值由初始的4.2上升到10.3,PLA收率为66.4%。研究结果为进一步采用离子交换法纯化发酵液中PLA的工艺优化提供了借鉴。

D-脯氨酸催化的(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸衍生物的合成

报道了一条合成（3S,4S）-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸（Ahppa）衍生物的新路线。以氨基保护的L-苯丙氨酸为起始原料,依次经Weinreb胺缩合、还原、aldol缩合及溴仿4步反应合成了3个Ahppa衍生物,总收率5.8%-6.7%,其结构经^1H NMR,^13C NMR和ESI-MS确证。对反应条件进行了探讨,结果表明：催化剂D-脯氨酸用量对反应收率影响不大,对立体选择性影响较大;氨基上保护基体积较大有利于提高反应立体选择性。

重组融合蛋白大肠杆菌不对称合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸

将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。

青岛能源所实现100%光学纯D-乳酸的生物合成

近日,中国科学院青岛生物能源与过程研究所生物基材料组群赵广研究组成功利用克雷伯氏菌实现100%光学纯D-乳酸的合成,产量和转化率等指标均处于国际先进水平。克雷伯氏菌具有可利用碳源广、生长迅速等优点,是1,3-丙二醇等产品的主要生产菌株,在以往研究中较少有关注该菌在乳酸合成方面的潜力。

加ω-3脂肪酸全肠外营养对肠梗阻术后患者肠黏膜屏障功能的影响

目的探讨加ω-3脂肪酸全肠外营养支持对肠梗阻术后肠黏膜屏障功能的影响。方法将75例肠梗阻术后患者随机分为试验组（38例）和对照组（37例）。两组患者术后开始接受5天的静脉营养支持。试验组补充ω-3脂肪酸注射100ml／d，其余热量用20％中长链混合脂肪乳剂补充。对照组脂肪乳剂的补充全部采用20％中长链混合脂肪乳剂；检测对照组及试验组治疗前1天，治疗后第5天血浆D哥L酸、二胺氧化酶（DAO）水平。检测术后第5天白蛋白，C反应蛋白，记录术后排气、排便时间和住院时间。结果试验组治疗后血浆DAO活性、D-乳酸均显著低于治疗前，差异有统计学意义（P〈0．05），对照组治疗后血浆及DAO活性及D哥L酸与治疗前比较差异无统计学意义（P〉0．05）。治疗后试验组DAO活性、D-乳酸低于对照组（P〈0．05）。术后第5天C反应蛋白、通气、排便时间和住院时间均显著低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论加ω-3脂肪酸全肠外营养支持有助于保护肠梗阻术后肠道黏膜上皮，降低肠黏膜的通透性。

一种从L型取代苯丝氨酸酯制备D-（-）-苏式-1-R-取代苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟-1-丙醇的方法

本发明公开了以工业生产拆分废液中提取和纯化的L型取代苯丝氨酸酯为原料经分步反应得到D-(-)-苏式-1-R-取代苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟-1-丙醇的方法。该方法简便，产率高，成本低，而且构型转化完全，是-种从L型取代苯丝氨酸酯向D型的氟甲砜霉素转化的有效简易方法，解决了利用拆分法制造氟尼康的无效对映体的废弃问题，减少环境污染，具有实用的经济价值。

D-(R)-酪氨酸的不对称催化氢化合成及其在药物合成中的应用

以最近开发的双膦-铑配合物[Rh((R,R)-QuinoxP*)(cod)]SbF6作为催化剂,利用不对称催化氢化方法合成了一系列D-(R)-酪氨酸衍生物,在S/C=10000条件下获得了99%ee的对映选择性.并将所得的氢化产物成功应用于具有重要生理活性的化合物(R)-2-羟基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸钠的合成.相比于已报道的方法,该工艺路线产率更高而且不需要柱层析分离,因而非常具有工业化应用前景.

ω-3多不饱和脂肪酸对重症急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的影响

目的 研究ω-3多不饱和脂肪酸对重症急性胰腺炎（SAP）患者血清中D-乳酸水平、二胺氧化酶（DAO）活性和尿中乳果糖/甘露醇（L/M）比值的影响.方法 选取2012年8月至2014年5月山西医科大学第一医院普外科和河南省郸城县人民医院普外科SAP患者40例,采用SAS 8.0统计软件编程随机分为研究组（n=20）和对照组（n=20）,对照组给予常规肠外营养（PN）支持,研究组应用鱼油脂肪乳制剂（富含ω-3多不饱和脂肪酸）替代结构脂肪乳制剂.分别于入院当天及营养支持后第1、5、10天抽取静脉血检测D-乳酸水平和DAO活性,留取尿液检测L/M.结果 两组患者PN后血中D-乳酸水平、DAO活性及尿中L/M比值均有不同程度降低.入院当天及营养支持后第1天,研究组与对照组D-乳酸水平[（7.47±0.72）mg/L比（7.31±0.54） mg/L,F=0.677,P=0.416; （7.37 ±0.68） mg/L比（7.35±0.59） mg/L,F=0.014,P=0.908]、DAO活性[（16.99±0.93） U/L比（16.83±0.82） U/L,F=0.314,P=0.579; （17.12±0.77） U/L比（17.07±0.68） U/L,F=0.068,P=0.796]及尿L/M比值（0.23±0.07比0.22±0.07,F=0.091,P=0.765;0.21 ±0.07比0.22±0.08,F=0.119,P=0.732）的差异均无统计学意义.营养支持后第5天和第10天,研究组与对照组比较,D-乳酸水平[（5.62±0.34） mg/L比（6.61±0.30） mg/L,F=95.242,P=0.000;（2.76±0.55） mg/L比（4.56 ±0.37） mg/L,F=148.052,P=0.000]、DAO活性[（7.02±0.93） U/L比（10.40±0.68） U/L,F=170.815,P=0.000; （3.32 ±0.80） U/L比（6.09±0.69） U/L,F=138.645,P=0.000]和尿L/M比值（0.57±0.08比0.82±0.07,F=112.668,P=0.000;0.19 ±0.12比0.27±0.08,F=6.551,P=0.015）显著降低.结论 临床应用富含ω-3多不饱和脂肪酸的鱼油制剂治疗SAP,可明显降低血中D-乳酸水平、DAO活性及尿L/M比值,提示ω-3多不饱和脂肪酸可保护肠黏膜屏障功能的完整性.

添加鱼油的肠外营养对严重创伤病人肠屏障功能和预后的影响

目的:研究鱼油(富含ω-3多不饱和脂肪酸)对严重创伤病人肠屏障功能变化和预后的影响。方法:对损伤严重度评分(ISS)≥16的26例严重创伤病人随机分为常规组(n=13)和鱼油组(n=13)。两组均采用等氮、等热量给药,分别于创伤后第1、3和6天采集外周血,同时设立对照组(n=10),采用酶学分光光度计法和ELISA法分别检测D乳-酸和肠型脂肪酸结合蛋白(IFABP)。记录全身炎症反应综合征(SIRS)发生率、感染并发症、最终结局和住院时间等,并进行组间比较。结果:严重创伤后血浆D乳-酸和血清IFABP水平均显著升高,尔后逐渐下降,但鱼油组较常规组下降更为显著;鱼油组较常规组SIRS发生率低。结论:鱼油有益于严重创伤后病人肠道血供和肠屏障功能的恢复,并能改善预后,降低SIRS的发生率。

草苁蓉正丁醇萃取物的抗氧化活性及物质基础初步研究

目的考察草苁蓉Boschniakia rossica正丁醇萃取部位的体内外抗氧化活性,并初步确定其抗氧化作用的物质基础。方法以清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基能力、亚铁还原能力实验(FRAP法)为指标,检测草苁蓉不同极性萃取部位的体外抗氧化活性;以D-半乳糖诱导衰老大鼠为模型,考察草苁蓉正丁醇萃取部位对大鼠肝脏组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响;采用高效液相色谱-质谱联用技术对草苁蓉正丁醇萃取部位化学成分进行初步分析。结果草苁蓉正丁醇萃取部位对DPPH、ABTS自由基具有良好的清除作用,且在亚铁还原实验的FRAP测定中表现良好;与模型组比较,草苁蓉正丁醇萃取部位各剂量组大鼠肝脏组织中MDA、SOD、CAT指标均有显著改善(P<0.01),表现为MDA水平降低,SOD、CAT活性升高,并回调到正常水平以上,其体内抗氧化作用呈现剂量依赖性。经液质联用分析从草苁蓉正丁醇萃取部位中共鉴定出19种化学成分,其中14个为苯丙素苷类(PPGs)。结论草苁蓉正丁醇萃取部位具有很好的抗氧化活性,其主要有效成分为PPGs。