儿童非霍奇金淋巴瘤的预后因素分析

目的:研究儿童非霍奇金淋巴瘤(NHL)的预后影响因素。方法:纳入2012年1月到2022年12月期间我院小儿血液内科收治的初发NHL患者108例,收集病历资料;采用寿命表法计算5年总生存率(OS)、无进展生存率(PFS),用Cox比例风险模型对预后影响因素进行分析。结果:108例NHL患儿中,男女比例2.72∶1,平均年龄为7.82岁。所有患儿均接受规范化疗,其中死亡21例,复发/进展24例,5年累积OS 79.0%,累积PFS 71.0%。单因素分析显示,中枢神经系统侵犯、乳酸脱氢酶(LDH)、D-二聚体、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、预后营养指数(PNI)等因素影响患儿的预后;多因素分析显示,LDH、D-二聚体、PNI为独立的预后因素。由LDH、D-二聚体、PNI构建危险评分模型,危险评分高值组的生存率明显低于低值组。结论:目前儿童非霍奇金淋巴瘤化疗效果良好,LDH、D-二聚体、PNI是儿童非霍奇金淋巴瘤独立的预后因素,并且由LDH、D-二聚体、PNI计算得来的危险评分可用于儿童NHL的预后评估。

海洛因成瘾者不同戒断时间肠道屏障损伤血清标志物的研究

目的分析不同戒断时间内肠道屏障损伤标志物的变化,研究海洛因戒断后肠屏障损伤的机制,为海洛因戒断后精神症状改变和肠屏障之间的关系提供新的方向。方法招募14名海洛因戒断1周(HWS1W),24名海洛因戒断3月(HWS3M)的人群和26名健康者为对照组(HCs),用ELISA法测定血清iFABP、D-LDH、DAO、LBP、Zonulin和BDNF。结果HWS1W组的血清D-LDH、DAO、LBP、Zonulin和BDNF水平均明显高于HCs组(P<0.001)。HWS3M组的血清iFABP、D-LDH、DAO和BDNF明显高于HCs组(P<0.001)。DAO在海洛因戒断1周时明显升高,3个月时明显降低,但仍高于健康对照组(P<0.001)。iFABP在急性戒断期(1周)没有变化,但在戒断的3个月左右增加。LBP和Zonulin在海洛因戒断组约1周内明显增加,但在HWS3M组和HCs组之间差异无统计学意义(P>0.05)。HWS1W组和HWS3M组的D-LDH和BDNF的水平明显增加(P<0.001)。结论海洛因戒断1周和3个月均发生肠屏障功能损伤。戒断1周后,肠屏障损伤可能与肠道菌群紊乱、紧密连接蛋白变化、肠道炎症和肠上皮完整性损伤有关。戒断3个月后,肠屏障损伤更可能是肠屏障上皮持续损伤造成的。

重组融合蛋白大肠杆菌不对称合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸

将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。

柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护机制研究

目的探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制。方法培养H9c2细胞,利用H2O2(400μM,4h)建立心肌细胞损伤模型。设立空白对照组、心肌损伤模型组(H2O2组)、柴胡皂苷D组(4μM),加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400μM H2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst 33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量,同时利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体(PPARγ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)基因水平的表达变化。结果 Hoechst 33258染色和流式细胞检测结果显示:与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组(均P<0.05);细胞内活性氧(ROS)含量检测结果显示:H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组(均P<0.05);与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低(均P<0.05);柴胡皂苷D组的PPARγ、Nrf2、HO-1在m RNA水平的表达较H2O2组升高(均P<0.05)。结论柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用。

玄参中苯丙素苷对肝细胞损伤保护作用的研究

目的:研究苯丙素苷对肝细胞损伤的保护作用。方法:通过D—氨基半乳糖造成体外和体内肝细胞损伤,观察苯丙素苷对肝细胞存活率、LDH、ALT和AST的影响。结果:苯丙素苷在体外能提高肝原代培养细胞的存活率,降低LDH水平。在体内能降低肝衰竭大鼠ALT和AST水平。结论:苯丙素苷对D—氨基半乳糖造成肝细胞损伤具有明显的保护作用。

耐热菌D-乳酸脱氢酶突变体的可视化建模和大肠杆菌中突变体对产苯乳酸的影响

以生物信息学为基础,分析D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的保守氨基酸残基、活性中心氨基酸残基、蛋白质三维结构和同源建模,可视化比较建模突变体空间构象,优选最佳突变体模型。结果显示,在D-LDH的20个保守氨基酸中,4个与酶活性中心有关。比较突变体模型发现,49和297位的phe或try的苯环形成空间位阻,F49A或Y279A及F49A和Y279A双突变体可解除位阻。对已构建的三个突变体初步发酵显示,IPTG和乳糖都能诱导突变体酶在大肠杆菌中产生苯乳酸,静置培养比摇振培养产量高,用乳糖诱导时,突变体F49A(A.a D-LDH-F49A株)苯乳酸的量比野生型(A.a.D-LDH株)的高。优选可视化突变体可作为高效构建工程菌的方法之一。

环维黄杨星D对心衰大鼠心肌损伤及氧化应激的影响

目的研究环维黄杨星D对心衰大鼠心肌的作用,探讨其可能的机制。方法结扎SD大鼠冠脉左前降支复制心衰模型。造模成功后分组、给药,测定试剂盒血清乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);透射电镜观察心肌纤维、线粒体、质膜的变化。结果环维黄杨星D能明显减轻心衰大鼠心肌损伤,显著抑制心衰大鼠心肌中SOD活性降低和MDA含量升高。结论环维黄杨星D对大鼠的心力衰竭有一定的保护作用,其可能通过抑制氧自由基、脂质过氧化起作用。

三维花状层状双金属氢氧化物的制备及其对甲基橙的去除

以阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)为模板剂,制备三维花状LDH(3D-LDH).借助X射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱仪(FT-IR)等表征手段确定最佳合成SDS浓度,并将最佳条件下产物进行热重-差热分析(TG-DTA)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)分析.此外,将3D-LDH作为吸附剂,研究其对50 mg·L^-1甲基橙(MO)的去除性能及机制.结果表明,当SDS浓度高于0.05 mol·L^-1时,可形成直径约为1.5-2μm的花状微球.3D-LDH对MO的吸附容量为44.4 mg·g^-1,吸附动力学符合准二级动力学方程.结合XPS分析,3D-LDH对MO的去除机制主要为离子交换作用.

犬实验性肺血栓栓塞症后血清乳酸脱氢酶同工酶3和血浆D-二聚体的动态研究

目的 动态监测犬肺血栓栓塞症 (PTE)后血清乳酸脱氢酶同工酶 3(L DH3)与血浆 D-二聚体的变化 ,探讨两者在急性 PTE诊断中的价值。方法 采用健康杂种犬 18只 ,随机分为三组。栓塞 组采用自体血加凝血酶及人纤维蛋白原制备的自体血栓 ,由股静脉输入建立急性 PTE模型。栓塞 组不加人纤维蛋白原 ,余同栓塞 组。对照组由股静脉输入生理盐水加人纤维蛋白原。三组均于栓塞前后做肺动脉造影及螺旋 CT血管造影 ,栓塞前及栓塞后多时点留取血样测 L DH3及血浆 D-二聚体浓度。结果 肺动脉造影及螺旋 CT血管造影均证实犬 PTE模型制备成功。栓塞 组血浆 D-二聚体于栓塞后 30 m in明显上升 ,2 4 h后明显下降 ,自身前后比较及与栓塞 组、对照组比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。栓塞 ( 、 )组栓塞后 2 h至 4 d L DH3明显升高 ,与栓塞前及对照组比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 血浆 D-二聚体、L DH3在急性 PTE早期有一个相对特征性的动态变化过程 ,联合检测 D-二聚体、L DH3有助于急性 PTE的早期诊断。

环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞凋亡影响

目的研究环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导乳鼠心肌细胞损伤凋亡的影响。方法取SD大鼠乳鼠心肌细胞做原代培养,20μmol.L-1NE诱导心肌细胞凋亡模型,Giemsa染色TUNEL、DNA-Ladder凝胶电泳检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达,检测细胞LDH的外漏率,线粒体琥珀酸脱氢酶(MSDH)的活力,观察CVB-D的保护作用。结果模型组Giemsa染色形态学上出现典型的凋亡特征;DNA Ladder凝胶电泳出现典型的梯状条带;TUNEL染色法测定的凋亡率增高;Caspase-3的阳性表达率增高,细胞LDH的外漏率增加,MSDH活力降低。CVB-D明显的降低了细胞LDH的外漏率,提高了MSDH的活力,对心肌细胞的凋亡具有明显的保护作用。结论 CVB-D对心肌细胞凋亡和细胞的能量代谢障碍具有显著的保护作用。

环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导心肌细胞G蛋白偶联受体激酶-2表达的影响

目的观察环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌细胞损伤的保护作用及对G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)表达的影响。方法体外培养新生SD大鼠原代心肌细胞,建立NE诱导的心肌细胞损伤模型,以细胞存活率,培养上清液乳酸脱氢酶的(LDH)活性反映心肌细胞损伤。酶联免疫吸附法(ELISA)测定环磷酸腺苷(cAMP)含量,Western blot分析G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)蛋白表达。结果 NE能降低细胞存活率,提高培养液LDH活性,降低细胞内cAMP含量,增加GRK-2蛋白表达。CVB-D对NE诱导上述指标异常具有明显的改善作用。

骨髓转移瘤患者血清乳酸脱氢酶、D-二聚体检测的临床意义

目的探讨骨髓转移瘤患者血清乳酸脱氢酶(LDH)和D-二聚体检测的临床意义。方法分别测定患者骨髓转移瘤和非骨髓转移瘤患者化疗前后血清LDH和D-二聚体水平。结果骨髓转移组LDH和D-二聚体水平较正常对照组及非骨髓转移组高(P<0.01)。LDH和D-二聚体水平骨髓转移组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05),非骨髓转移组治疗前后差异有统计学意义(P<0.01)。结论血清LDH和D-二聚体水平可作为实体瘤患者骨髓浸润与否及疗效判断的辅助指标。

丁基苯酞对氯化钾及 N-甲基-D-门冬氨酸诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用

用原代培养大鼠皮质神经细胞的方法，观察ｌ丁基苯酞（ｌＮＢＰ）和ｄ丁基苯酞（ｄＮＢＰ）对ＫＣｌ及Ｎ甲基Ｄ门冬氨酸（ＮＭＤＡ）诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用。结果表明：ｌＮＢＰ和ｄＮＢＰ能剂量依赖性地抑制ＮＭＤＡ诱导的大鼠皮质神经细胞内乳酸脱氢酶的释放，降低细胞死亡率，改善受损细胞的形态；此外ｌＮＢＰ和ｄＮＢＰ还能明显减轻ＫＣｌ诱导的神经细胞损伤。提示：ｌＮＢＰ和ｄＮＢＰ对ＫＣｌ及ＮＭＤＡ诱导的大鼠皮质神经细胞损伤有明显保护作用。

轻质油(45℃馏分)蒸气的生殖毒性研究——Ⅱ.对大鼠睾丸LDH—X及溶酶体酶的影响

本研究观察了轻质油(45℃馏分)蒸气急性(30000mg/m^3和15000mg/m^3×8小时)和亚急性(3000mg/m^3×6小时/天×30天)动式染毒条件下,成年大鼠睾丸生化指标的改变。结果表明:(1)各实验组大鼠睾丸匀浆中LDH总量,LDH-X含量,与空白对照组比较无显著性变化(P>0.05)。(2)各实验组睾丸匀浆中游离型溶酶体酶β-D-半乳糖苷酶(β-D-G)、结合型β-D-G以及β-D-G游离酶/结合酶比值与空白对照组比较,差别不显著(P>0.05)。结合精子形态学检查结果,我们认为,在本实验浓度范围内,实验性急性、亚急性吸入轻质油(45℃馏分)蒸气对动物的生殖系统影响不明显。

2,4-滴丁酯对雄性小鼠的生殖毒性作用

目的研究2,4-滴丁酯对雄性小鼠的生殖毒性作用。方法将48只雄性ICR小鼠随机分为4组,即对照组(玉米油)和低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)和高剂量(40 mg/kg)2,4-滴丁酯染毒组,每组12只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,每周连续染毒6 d,实验周期为5周。染毒结束后采用分光光度法对睾丸组织中总抗氧化能力(T-AOC)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Na+K+-ATPase及Ca++Mg++-ATPase的活性进行测定。结果 T-AOC活力随着2,4-滴丁酯染毒剂量的升高逐渐下降,高剂量组与其他组比较差异显著;与对照组和低剂量2,4-滴丁酯染毒组相比较,高、中剂量组睾丸组织中LDH活力值较低,差异显著,且高剂量组与中剂量组比较差异显著;SDH活力随着2,4-滴丁酯染毒浓度的升高逐渐降低,高、中剂量组与对照组相比较差异显著,且高剂量组与中、低剂量组比较差异显著;与对照组和低剂量2,4-滴丁酯染毒组相比较,高、中剂量组睾丸组织中Na+K+-ATPase活力值较低,且差异显著;实验组Ca++Mg++-ATPase活力与对照组比较差异显著。结论 2,4-滴丁酯染毒对雄性小鼠睾丸组织具有一定的毒性作用。

LDH、D-D、CRP及ESR在小儿支原体肺炎诊断中的价值

目的探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)水平在小儿支原体肺炎临床诊断中的价值。方法选取2017年1月至2018年3月我院收治的96例小儿支原体肺炎患儿作为研究组,按病情严重程度分为轻症患儿(n=45)和重症患儿(n=51),选取同期健康体检儿童60例作为对照组,对照组及研究组治疗结束后进行血清各项指标检测,包括LDH、D-D、CRP及ESR,并分析血清各项指标与小儿支原体肺炎患儿病情严重程度的关系。结果研究组患儿血清LDH、D-D、CRP及ESR水平均高于对照组(P<0.05);治疗后,研究组患儿血清LDH、D-D、CRP及ESR水平均有所降低,但重症患儿仍高于轻症患儿(P<0.05)。Pearson相关分析表明支原体肺炎患儿血清LDH、D-D、CRP及ESR水平与其病情严重程度呈正相关(P<0.05)。结论支原体肺炎患儿血清LDH、D-D、CRP及ESR水平与其病情严重程度有关,可作为评估支原体肺炎患儿病情的临床指标。

乳酸脱氢酶催化活性浓度测量的不确定度评定

目的评定在乳酸脱氢酶(LDH)催化活性浓度测量中不同厂家或批号试剂的不确定度。方法配制不同厂家或批号LDH试剂,用国际临床化学联合会(IFCC)参考方法分别检测中值和高值两个浓度的混合血清,对所得数据进行配对t检验,计算不同厂家或批号试剂间的不确定度。结果P<0.05表示对不同厂家或批号LDH试剂,所测LDH催化活性浓度结果差异有统计学意义。不同试剂批号对中值和高值混合血清的扩展不确定度U分别为6.52%(k=2)和6.78%(k=2)。结论不同厂家或批号试剂对LDH催化活性测量有影响,因此,在进行不确定度评定时,应考虑不同厂家或批号试剂的影响。

胃肠安丸对肠易激综合征大鼠消化酶、水通道蛋白的影响

目的:探讨胃肠安丸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠止泻作用机制。方法:以喂饲高乳糖饲料加束缚应激相结合的方法复制IBS-D大鼠模型。将雌性Wistar大鼠,随机分为空白对照组、模型组及胃肠安(60 mg.kg-1.d-1)用药3组,每组各8只。通过比较体重增长率、腹泻潜伏期及腹泻指数,确定最佳用药周期。将45只大鼠随机等分为空白对照组、模型组、胃肠安80,60,40 mg.kg-1.d-1不同剂量等5组。计测胸腺指数、脾脏指数;小肠黏膜LDH,MDH及二糖(乳糖)酶活性;血清D-木糖含量;近端结肠组织AQP4含量。结果:用药后4 d胃肠安组与模型组体重增长率差值最大,腹泻指数差别有统计学意义(P<0.05),确定4 d为最佳用药周期。模型组较对照组胸腺指数、脾脏指数缩小(P<0.05),小肠黏膜LDH,MDH,二糖酶活性下降(P<0.05),AQP4含量升高(P<0.05)。与之相对,中剂量胃肠安组胸腺指数、脾脏指数增大(P<0.05),小肠黏膜LDH,MDH,二糖酶活性升高(P<0.05),但AQP4含量无显著差异。结论:胃肠安丸具有止泻作用,通过增强小肠黏膜消化酶活性,调节腹泻状态下机体糖分解代谢,是止泻机制之一。

可视化突变建模、定点突变和表达超耐热菌D-乳酸脱氢酶

目的:构建产天然防腐剂苯乳酸的工程菌。方法:分析超耐热菌(Aquifex aeolicus,A.aeolicus)D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的三维构象,并与构建的可视化突变体三维模型进行对比,通过比较酶活性中心氨基酸残基与底物的空间构象,优选最佳模型进行定点突变、克隆、表达和苯乳酸发酵实验。结果:优选到F49A和Y297S两个单突变模型和一个F49A/Y297S双突变模型,分别进行定点突变和工程菌构建,三个突变工程菌均能发酵产生苯乳酸。结论:可视化定点突变乳酸脱氢酶可作为构建高产苯乳酸工程菌的有效方法。

IL⁃6、LDH、D-二聚体水平对恙虫病合并肺部感染患者的临床意义

目的通过检测白介素-6(IL⁃6)、乳酸脱氢酶(LDH)、D-二聚体在恙虫病合并肺部感染患者血清中的表达水平,从而对患者病情进行预后评估,并分析其临床意义。方法选择海南医学院第一附属医院2018-2019年期间50名恙虫病合并肺部感染患者作为观察组,另选择羌虫病无肺部感染的患者50例作为对照组,分别采用化学发光法及速率法检测患者治疗前后血清中IL⁃6、LDH的浓度,采用免疫比浊法检测D-二聚体的浓度,并与对照组进行对比分析。绘制ROC曲线,观察三种指标与病情诊断和预后评估关系。结果观察组IL⁃6、LDH、D-二聚体三项指标均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与急性期相比,恢复期患者血清中IL⁃6、LDH、D-二聚体的水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值、阴性预测值均优于单个指标检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测恙虫病并肺部感染患者IL⁃6、LDH、D-二聚体浓度对病情诊断和预后评估具有重要的临床意义。