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果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备
被引量:
1
1
作者
李其久
崔剑
+2 位作者
孟宪军
陈长兰
贲松彬
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期844-846,850,共4页
目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG...
目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达;以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果:扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性。结论:已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段。
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关键词
果蝇硒蛋白
d-selk
原核表达
多克隆抗体
下载PDF
职称材料
题名
果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备
被引量:
1
1
作者
李其久
崔剑
孟宪军
陈长兰
贲松彬
机构
沈阳农业大学食品学院
辽宁大学生命科学院
辽宁大学药学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期844-846,850,共4页
基金
国家自然科学基金资助(30671176)
辽宁省教育厅资助(2009A310)
辽宁省科学技术计划项目(2010225036)
文摘
目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达;以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果:扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性。结论:已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段。
关键词
果蝇硒蛋白
d-selk
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Drosophila selenoprotein
d-selk
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备
李其久
崔剑
孟宪军
陈长兰
贲松彬
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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