喉癌中线粒体DNA拷贝数和D-loop区基因突变与临床病理的相关性

目的探讨喉癌线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)拷贝数和D-loop区基因突变与临床病理特征的相关性。方法收集武汉市第一医院诊治的40例喉癌患者,取mt DNA的CoxⅡ和核DNA的β-actin为目的片段进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)扩增,对mt DNA D-loop区进行测序。结果喉癌组织中mt DNA拷贝数(0. 925±0. 136)高于其对应癌旁组织(0. 815±0. 096),两者差异有统计学意义(P <0. 05)。mt DNA拷贝数与患者淋巴结转移相关(P <0. 05),但与患者性别、吸烟、饮酒、肿瘤分期以及肿瘤分化无关。40例喉癌中有21例(52. 50%) mt DNA D-loop区共检测17个突变位点、34个突变;发现86个多态性位点;且mt DNA D-loop区基因突变与患者淋巴结转移和肿瘤分化程度相关(P均<0. 05),其与患者性别、吸烟、饮酒以及肿瘤分期无关。结论喉癌组织中mt DNA拷贝数高于其对应癌旁组织,且mt DNA Dloop区存在高频基因突变,提示mt DNA拷贝数变化以及D-loop区基因突变与喉癌的发生、发展密切相关。

HBV PreS/S区基因突变诱导肝细胞内质网应激致肝细胞肝癌相关机制研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个全球性的公共卫生问题,可导致肝硬化和肝细胞肝癌(HCC)等多种疾病。HBV S区基因组编码大表面蛋白(LHB)、中表面蛋白(MHB)、小表面蛋白(SHB),其基因组突变形成的变异S蛋白会在肝细胞内质网中大量积累,进而产生内质网应激(ERS)现象。同时,ERS和内质网未折叠蛋白质反应(UPR)激活参与了HCC的发生、发展和对治疗的应答,在促HCC的发病机制中发挥重要作用。文章就HBV S区基因组突变引起变异S蛋白在内质网中堆积造成的ERS现象致HCC的相关研究进展进行综述。

核苷类似物干预下慢性乙型病毒性肝炎患者HBV多聚酶区基因突变检测分析

目的研究重庆地区慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者核苷类似物治疗过程中HBV多聚酶区(P)基因变异情况。方法选取350例接受核苷类似物治疗后出现病毒学突破的慢乙肝患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法,分析HBV P区基因变异发生情况。结果 350例患者中有124例检测出基因型耐药,C基因型在基因型耐药患者中所占比例显著高于无基因型耐药患者的比例(P<0.001)。突变类型共计23种,其中以rtM204I突变最多见(41,33.1%),其次为rtL180M/rtM204V联合突变(25,20.1%)。主要核苷类似物耐药所占比例最高为拉米夫定(60.5%),其次为阿德福韦(21.8%)及替比夫定(16.1%)。结论 HBV P区基因耐药的氨基酸突变复杂多变,rtM204V/I突变最为常见。基因C型患者更易出现基因型耐药。

CNE1、CNE2鼻咽癌细胞株中ATM/PI3K区基因突变的检测

为了探讨具有不同放射敏感性的CNE1、CNE2鼻咽癌细胞株中ATM/PI3K区基因突变的情况,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和PCR产物直接测序方法(荧光标记的ddNTPs循环测序),对CNE1、CNE2中ATM的PI3K关键区域进行突变检测。结果表明,所测CNE1、CNE2中的ATM/PI3K区序列中没有发生突变,认为鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2间内在的放射敏感性的差异可能与ATM/PI3K区基因突变不相关。

HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S和S区基因突变及基因分型

【目的】研究HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S(前S1和前S2)及S区的基因突变模式和基因分型,为从病毒因素探讨HBV母婴传播免疫阻断失败提供实验基础。【方法】选取血清HBsAg阳性且HBV-DNA≥105 IU/mL的孕妇41例,提取血清HBV DNA,靶向设计HBV各基因型的前S及S区通用引物,经PCR扩增测序进行序列分析,检测和分析前S及S区基因的突变情况,并进行基因分型。【结果】①在41例样本中,共有29例(70.73%)样本存在前S1、前S2及S区基因突变,突变方式以碱基置换为主;前S1、前S2及S区基因的突变频率分别为8.96%、9.88%和3.24%,前S1和前S2区的突变频率显著高于S区(P<0.05)。②对41例样本根据S区点突变的特点进行基因分型及同源树簇集分析,结果B基因型22例,C基因型19例,两基因型在全S区的基因突变频率相比,差异无统计学意义(P>0.05);B、C两基因型分别形成独立的簇集,簇集间同源性<90%,但簇集内B、C两个基因型的同源性分别达96%和95%。【结论】①HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S及S区的基因突变普遍存在,突变形式以碱基置换为主,突变频率以前S1和前S2区常见,S区则相对稳定;②不同HBV基因型间同源性差异较大,按HBV不同基因型分别进行前S和S区基因突变模式的分析将更有意义。

初诊慢性粒细胞白血病患者ABL激酶区基因突变的研究

目的:探讨初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者BCR-ABL激酶区基因突变,了解初发患者BCR-ABL激酶区基因突变导致甲磺酸伊马替尼(IM)耐药率,为患者实行个体化治疗提供理论依据。方法 :采集初诊CML患者外周血或者骨髓,采用巢式PCR结合核苷酸序列测序的技术检测BCR-ABL激酶区基因突变。结果:共检测了87例患者,其中3例患者分别存在M351T、Q252H、Y253H突变,1例加速期,2例急变期,随访证实该3例患者均对IM耐药;1例慢性期患者检测出ABL激酶474氨基酸位点之后存在35 bp插入突变,但临床随访证实其对IM敏感;2例急变期患者存在第八外显子缺失,并对IM耐药。结论 :初诊CML患者存在BCR-ABL激酶区基因IM耐药基因突变,尤其是处于加速期、急变期患者,早期检测BCR-ABL激酶区基因突变有利于患者早期选择合适的一线药物行个体化治疗。

中国人肝豆状核变性基因突变热点区的快速检测

目的 探讨中国人肝豆状核变性 (Wilson sdisease ,WD)患者和携带者基因突变热点区的简便、准确的检测方法。方法 采用聚合酶链反应 限制性酶切多态性技术 (PCR RFLP)对 35例WD患者和 5 0例健康体检者检测中国WD基因———P型铜转运三磷酸腺苷酶 (ATP7B)外显子 8的密码子 778位基因突变。结果 35例WD患者共检出 4例 778位突变纯合子和 11例杂合子 ,纯合子检出率 11.4 % ,杂合子检出率 31.4 %。 5 0例正常对照中无一例突变。结论 ATP7B基因 8号外显子 778位是中国人WD的高频突变点 ,PCR -RFLP法具有简便。

基因芯片检测HBV基因突变的临床意义——81例慢性乙型肝炎患者HBV前C区和BCP区突变的临床资料分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组前C区变异和基本核心区启动子(basiccorepromoter.BCP)变异的临床意义以及基因芯片在慢性乙型肝炎(慢乙肝)临床检测中的应用。方法:用基因芯片法检测HBVDNA阳性慢乙肝患者的血清标本,根据HBV血清标志物的实验结果将受试者分为HBeAg(+)组和HBeAg(-)组,比较分析两组患者的临床资料,并根据变异在不同类型慢乙肝患者中的检出状况,以评定HBV前C区和BCP区变异的临床意义。结果:81例血清HBVDNA阳性患者中检出前C区变异51例,突变检出率为63.0%,检出BCP区变异60例,突变检出率为74.1%,其中HBeAg(-)者变异的检出率均明显高于HBeAg(+)者,突变株的检出以慢性重型肝炎最高,其次是慢乙肝重度、中度患者,慢乙肝轻度患者最低,表明HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关,而与性别、年龄无关。结论:基因芯片定量检测HBV基因突变高效可靠,对于判断慢乙肝患者病情轻重、预后好坏和指导用药,具有一定临床参考价值。

慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变的临床研究

采用聚合酶链反应 (PCR)及单链构象多态分析 (SSCP)银染技术检测了 32例HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者及乙肝病毒携带者的前C区基因变异。结果表明有前C区基因突变株感染者 8例 ,突变株感染者检出率为 2 5 .0 % ;突变株的检出率以慢性乙肝重度最高 ,其次是慢性乙肝中度、轻度患者 ,乙肝病毒携带者最低 ;抗 -HBe阳性患者前C区突变株检出率高于HBeAg阳性患者。提示HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关。

整合型HBV DNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)的慢性感染是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚。本研究拟探讨整合型HBV前C区突变、p53基因突变与HCC发生的关系,以期更好地了解HCC发生的分子机理。方法:应用聚合酶链反应技术(PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态(singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP)技术对28例肝癌组织、25例癌旁肝硬化组织、12例肝硬化组织和15例正常肝组织标本内的整合型HBVDNA及其前C区基因突变和肝细胞p53基因突变进行检测分析。结果:(1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合HBVDNA阳性率分别为6.66%、66.67%、96.43%和96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性(P<0.005);(2)4组整合型HBVDNA前C区突变率分别为0%、25.00%、48.15%和70.37%,4组间的突变率差异有显著性(P<0.05);(3)肝癌组织的p53基因突变率(57.14%)明显高于肝硬化组(16.67%)(P<0.05);(4)不同肝组织中p53基因突变率与整合HBVDNA阳性率、HBV前C区基因突变率呈正相关。结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合HBVDNA及其前C区基因突变和p53基因突变可能起协同作用。

淋球菌mtrR启动子区域中回文序列基因突变与多重耐药的关系

目的 :探讨淋球菌mtrR启动子区域中回文序列基因突变与多重耐药之间的关系。方法 :①纸片扩散法检测 5 6株淋球菌对 5种抗生素的敏感性 ;②PCR扩增mtrR启动子区域中包含有 13个碱基回文序列在内的 15 7个碱基 ,并进行SSCP(单链构象多态性 )分析 ;③根据SSCP的结果 ,选取 12株标本进行测序分析 ,将其核苷酸序列与标准敏感株ATCC194 2 4进行比较。结果 :5 6株细菌中有 5株对 5种抗生素都敏感 ;对 1种抗生素耐药的有 2 2株 ;对 2种抗生素耐药的有 19株 ,其中有 2株mtrR启动子区域中回文序列基因发生了突变 ;对 3,4和 5种抗生素耐药的株菌分别是 7株、2株和 1株 ,它们的mtrR启动子区域中回文序列基因均发生了突变。并且这 12株突变的类型一致 ,在 13个碱基的回文序列中发生了单个A/T碱基的缺失。结论 :mtrR启动子区域中回文序列基因突变介导淋球菌的多重耐药 ;

广西肝癌高低发病区p53基因突变热点的对比研究

目的 :并行、对比研究广西高、低发病区原发性肝癌p5 3基因突变热点。方法 :参照国际公共p5 3突变数据库资料发生频率最高的 7个突变类型作为检测探针设计寡核苷酸芯片 ,应用该种寡核苷酸芯片技术检测肝癌抑癌基因p5 3上对应的 7个常见突变位点的突变频率及突变类型。结果 :检测高发区组及低发区组肝癌石蜡包埋标本各 14例 ,p5 3突变发生率分别为 6 4 3%及 14 3% ,P <0 0 5。高发区组p5 3突变热点为 2 4 9编码区 ,占该组突变的 77 8% ,突变形式为 2 4 9ser突变。结论 :广西高发区肝癌p5 3基因突变热点为 2 4 9ser突变 ,低发地区肝癌p5 3基因突变点呈散发性 ;应用寡核苷酸芯片技术可并行、高效。

海珠益肝胶囊治疗HBV前C区基因突变患者的疗效观察

目的 观察海珠益肝胶囊治疗HBV前C区突变慢性乙肝患者的近期疗效。方法观察海珠益肝胶囊治疗 32例HBV突变株患者的疗效 ,并同野生株组做对照 ,比较 2组肝功能、HBV -DNA定量和近期应答率的变化。结果 2组治疗后肝功能复常率、近期应答率及HBV-DNA定量下降程度相近 ,经统计学比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 海珠益肝胶囊对HBV前C区突变株及野生株均有作用 。

基于线粒体Cyt b基因和D-loop区分析元江鲤和杞麓鲤群体遗传结构

本文利用线粒体Cyt b基因和D-loop区部分序列,分析元江鲤(Cyprinus carpio yuankiang)和杞麓鲤(Cyprinus carpio chilia)群体的遗传结构。结果表明,在两个鲤群体中均获得929 bp的Cyt b基因序列和650 bp的D-Loop区序列。两个群体间平均遗传距离为0.00595(Cyt b)、0.00852(D-loop)。Cyt b基因共检测出元江鲤3种、杞麓鲤15种单倍型,两个群体共享两个单倍型(C-Hap1和C-Hap3);D-loop区序列共检测出元江鲤3种、杞麓鲤6种单倍型,两个群体共享两个单倍型(D-Hap1和D-Hap2)。元江鲤和杞麓鲤群体单倍型多样性(Hd)分别为0.30±0.10(Cyt b)、0.25±0.10(D-loop)和0.89±0.04(Cyt b)、0.73±0.05(D-loop)。元江鲤和杞麓鲤群体核苷酸多样性(π)分别为0.12±0.04(Cyt b)、0.12±0.09(D-loop)和0.77±0.09(Cyt b)、0.87±0.07(D-loop),杞麓鲤遗传多样性水平明显高于元江鲤群体。分子方差分析(AMOVA)显示,两个群体间有明显的遗传分化,且遗传变异主要来源于群体间。系统发育分析显示,元江鲤群体单倍型较少,类型较单一,与杞麓鲤群体差异大,多数元江鲤样本单倍型属于华南鲤(Cyprinus carpio rubrofuscus)类型;多数杞麓鲤样本具特有单倍型,部分属于华南鲤、远东鲤(Cyprinus carpio haematopterus)类型。结果表明,杞麓鲤与元江鲤群体遗传分化明显,元江鲤线粒体遗传多样性较低。

我国胃癌患者ERBB2基因组水平酪氨酸激酶区外显子20、21基因突变的研究

目的探讨我国胃癌患者体细胞基因组水平ERBB2酪氨酸激酶编码区20、21外显子基因突变情况。方法随机选取2004年1月～2006年10月我院胃癌病理标本60例，正常对照25例，用套式PCR分别扩增ERBB2酪氨酸激酶编码区20、21外显子，PCR产物直接测序，并进行序列比对。结果55例胃癌组织、22例对照组织的ERBB2酪氨酸激酶编码区20、21外显子获得完整扩增；其中1例发现存在21外显子K874E错义突变，但反向测序未获证实，认定其为假阳性。结论我国胃癌患者ERBB2酪氨酸激酶编码区基因突变不是“频发的分子事件”。

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变的研究进展。前C区某些部位,特别是第1896位核苷酸的终止突变,使HBV失去分泌HBeAg的能力,但不影响其复制与传染。前C区突变的发生除与HBV前基因组逆转录过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外,主要与宿主的免疫压力有关。前C区的突变常伴有其它基因特别是C基因的突变,共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归,使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切,在母婴传播及肝移植中具有特殊意义。

HBsAg和HBsAb双阳患者前C/C区基因突变分析

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(HBsAb)同时阳性(以下简称双阳)患者前C/C区基因突变的特点及其与S区基因突变的关系。方法选取18例双阳患者,对前C/C区及S区基因序列扩增并测序,分析测序结果。结果 18例双阳患者中,检出前C/C区氨基酸突变者7例;前C/C区发生突变与未发生突变者比较,其S区氨基酸的突变次数及突变率明显增加(P<0.05);7例前C/C区氨基酸突变患者中,4例为前C区nt1896突变,其中1例为HBeAg(-),3例为HBeAg(+)。结论双阳患者不仅S区氨基酸突变增多,其前C/C区氨基酸突变也明显增加;双阳患者前C区nt1896突变更常见于HBeAg阳性者,可能与双阳患者病毒株的复杂性有关。

乙型肝炎病毒前C区基因突变及临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)感染后临床表现复杂多样,多数表现为急性自限性肝炎,少数表现为暴发性肝衰,还有相当一部分向慢性化发展。在慢性HBV感染中,有的病情较缓和,有的发展迅猛,有的活动期与缓解期交替出现。同为HBV感染,为什么个体表现差异如此之大?以往认为是由机体免疫应答差异引起。但目前的研究认为HBV的基因突变与乙型肝炎(乙肝)