铁皮石斛药材HPLC指纹图谱研究

目的建立铁皮石斛药材的RP-HPLC指纹图谱。方法采用梯度洗脱的方法,以KromasilKR100-5C18(250mm×4.6mm,5μm)为分析用色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相建立了铁皮石斛药材的指纹图谱,并进行了相似度的计算。结果该方法可使铁皮石斛中各成分得到较好的分离,并根据检测结果确定了15个共有指纹峰。结论该指纹图谱检测方法简便、重现性好,可作为铁皮石斛药材质量控制的重要方法。

铁皮石斛根茎中菲类化学成分分析

目的:研究铁皮石斛根茎的菲类化学成分。方法:运用各种柱色谱方法进行化学成分的分离纯化,并根据其理化性质、波谱解析、对照品比较以及文献报道对比鉴定化合物结构。结果:从其乙醇提取物中经反复纯化得到6个化合物,分别鉴定为2,3,4,7-四甲氧基菲(Ⅰ)、1,5-二羧基-1,2,3,4-四甲氧基菲(Ⅱ)、2,5-二羟基-3,4-二甲氧基菲(Ⅲ)、2,7-二羧基-3,4,8-三甲氧基菲(Ⅳ)、2,5-二羧基-3,4-二甲氧基菲(Ⅴ)、3,5-二羧基-2,4-二甲氧基菲(Ⅵ)。结论:其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ为首次从石斛属植物中分离得到。

液-质联用法测定铁皮石斛和西洋参及制剂中多菌灵残留

用高效液相色谱-质谱联用法定量检测铁皮石斛、西洋参药材及其制剂中的多菌灵残留。在酸性条件下以甲醇提取中药材和制剂中的残留多菌灵，分析色谱柱为Diamonsil C18（4．6mmi．d.×250mm，5μm），以4％四氢呋喃水溶液-甲醇梯度洗脱，采用选择离子监测模式，以m／z192为检测定量离子。多菌灵出峰时间在27min左右，线性范围为0．22—33ng，相关系数0．9993；方法检出限为0．015mg／L；定量限为0.022ms／L；平均回收率在95．6％以上。该方法灵敏、准确、可靠，定量范围宽，耐用性强，可作为中药中多菌灵残留的可靠检测方法。

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶+培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。

不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响

[目的]为了找到适合原球茎增殖的培养条件,为工厂化育苗提供技术支撑。[方法]以铁皮石斛茎段诱导出的原球茎为实验材料,研究了不同基本培养基、不同碳源、不同浓度的脱落酸(ABA)和培养方式对其增殖的影响。[结果]在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基;在低浓度的条件下,随ABA浓度的增加,原球茎的增殖速度加快,当浓度为0.5 mg/L时,增殖最大;蔗糖为碳源时原球茎增殖的效果比葡萄糖、果糖好;固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数最高。[结论]在改良MS中加入30 mg/L蔗糖和0.5 mg/L ABA,进行固体培养或液体振荡培养,铁皮石斛原球茎增殖的效果好。

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响。方法筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线。根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响。结果铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS+20%土豆+3%蔗糖+0.8%琼脂。与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(P<0.01),干质量分别提高了6.7%(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01)。与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01)。结论在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用。

铁皮石斛RNA提取及RT-PCR检测

目的 有效地提取铁皮石斛高质量的RNA,为研究环境胁迫对铁皮石斛生长与代谢影响的分子表达机制奠定基础.方法 建立声波处理的刺激组与对照组,改良苯酚-氯仿法制备的RNA,分光光度法检测其量,1.0%变性琼脂糖凝胶电泳检测其完整性;所得的总RNA经过RT PCR扩增,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测显示其差异cDNA片段.结果 提取的总RNA A260/A230为3.16,A260/A280为1.96,产量达0.27μg/mg,电泳条带清晰,完整性良好,可筛选出明显的差异cDNA片段,分子质量在240～600 bp.结论 用该方法能高质高量地提取富含多糖的药用植物总RNA.

铁皮石斛与几种常用混淆品的红外光谱鉴别

目的寻找能够鉴别铁皮石斛与几种常用混淆品的新方法,为进一步探索石斛类药材、饮片快速、有效的鉴别方法。方法采用药材原粉末加KBr直接压片法测定铁皮石斛与几种常用混淆品的红外光谱,所获得的指纹图谱进行特征峰指认和对比分析。结果铁皮石斛与几种常用混淆品的红外吸收频率、吸收峰的峰形和相对强度都存在较显著的差异。结论首次采用红外光谱法鉴别铁皮石斛与几种常用混淆品,结果快速、准确,为控制铁皮石斛商品提供了可靠的依据。

铁皮石斛茎、叶挥发性成分研究

利用水蒸汽蒸馏提取铁皮石斛挥发性成分，用GC／MS进行分离测定，铁皮石斛茎中分离出24个成分，鉴定出14个化学成分，占挥发油总量的91．76％；铁皮石斛叶中分离出20个成分，鉴定出18个化学成分，占挥发油总量的97．40％。铁皮石斛茎、叶挥发性成分中，含有11种相同成分。铁皮石斛的不同部位其挥发油化合物组成和含量不尽相同，为铁皮石斛的综合利用提供参考数据。

铁皮石斛人工种子包衣技术研究

以铁皮石斛未萌发原球茎、萌发原球茎为繁殖体,利用蔗糖、淀粉、ABA、NAA、活性炭、多菌灵、海藻酸钠设计了36种人工胚乳并研究它们对铁皮石斛人工种子萌发及生长状态的影响,筛选出适宜的繁殖体和胚乳配方,在此基础上进行包衣制作。结果表明:以萌发原球茎为繁殖体的人工种子萌发率和成活率较高。适宜的人工胚乳组合为蔗糖3.0%、ABA 1.0mg/L、活性炭浓度0.5%、多菌灵3.0%、海藻酸钠3.0%。在铁皮石斛人工种子外层制作包衣,自然条件下可获得较高的萌发率和成活率。

铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究

以铁皮石斛 Dendrobium candidum Wall.ex L indl.的茎段作外植体 ,比较不同的培养基、激素等因素对茎段分化丛生芽的影响 ,以及不同浓度的香蕉汁和活性炭对试管苗生根的影响。结果表明 :1/ 2 MS较好 ,BA作用优于 KT、ZT,最适浓度为 2 .0 mg/ L ;丛生芽培养于 1/ 2 MS+10 %香蕉汁 +0 .5 %AC的培养基上 ,生根效果最好。

铁皮石斛原球茎增殖条件的研究

研究了不同基本培养基、不同浓度的脱落酸和培养方式对铁皮石斛原球茎增殖的影响。结果表明在改良MS中加入0.5 mg.L-1脱落酸,进行固体培养或液体振荡培养,原球茎增殖的效果都比较好。

促进铁皮石斛试管苗移栽成活的研究

目的有效加速铁皮石斛试管苗的人工繁殖。方法 :对铁皮石斛试管苗在移植时期进行不同基质 (有无伴生植被 )、根长和营养液浓度等方面的研究。结果 :最适宜的基质是 1/ 3泥炭 +1/ 3锯末 +1/ 3珍珠岩 ,覆以苔藓类伴生植被可大大提高移栽成活率。组培苗根长在 0 .5～ 1.0cm时是移植的最佳时期 ,移植半个月后施放 1/ 2倍营养液为最好。结论

铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗研究

目的:筛选适宜铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗的培养基,提高继代扩繁系数和组培苗的质量.方法:在相同的培养条件下,把相同发育阶段的原球茎接种于含不同激素比例的培养基中生长;把丛生芽接种于蔗糖浓度不同的培养基中生长;把相同高度的幼苗接种于含不同附加物的培养基中生长;对结果所产生的不同生长状况进行综合分析.结果:原球茎的增殖以1/2MS添加BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L或BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L的激素比例为佳;原球茎分化以1/2MS添加BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L的激素比例为佳;丛生芽的生长中以30%蔗糖浓度的培养基为佳;生根壮苗中最佳的附加物为香蕉.

黑节草双受精过程及胚胎发育的研究

黑节草从传粉到受精约需１３０ｄ，精子在花粉管中形成，胚囊发育属蓼型胚囊，因反足细胞较早退化．故受精前胚囊多只由卵器和中央细胞组成。精卵核融合时，精核染色质进入卵核后凝集成颗粒状，并在原位与卵核的染色质融合．雌、雄性核仁一直维持至合子的第一次分裂期前．双受精作用正常，属于有丝分裂前配子融合类型．初生胚乳核发生２—３次分裂后逐渐退化消失，胚的发育局限于球形胚阶段．

不同有机物对铁皮石斛试管苗生长发育的影响

研究不同有机物浸提液对铁皮石斛试管苗生长的影响。在相同的培养条件下,以8种含有不同有机物的培养基培养试管苗,60d后对试管苗的各种性状进行记录统计,并与对照(没加有机物提取液)进行比较分析。结果不同的有机物浸提液对试管苗的影响效果不一样。壮苗以加入白萝卜提取液、CH和CM为佳,生根以加入香蕉提取液为佳,要提高繁殖系数以不加有机物为佳。

铁皮石斛专用叶面肥施用效果研究

[目的]为铁皮石斛的产业化发展提供技术依据。[方法]以铁皮石斛组培苗为试验材料,移栽后15 d开始对其喷施专用叶面肥(N∶P2O5∶K2O=25∶13∶13,N、P、K总含量51%,B、Fe、Zn、Cu、Mn、Mo总含量1%),每隔7 d喷施1次,共喷5次,以喷清水为对照,研究叶面肥对铁皮石斛单株鲜重、茎多糖含量、叶面积及叶绿素含量的影响。[结果]喷施叶面肥可促进铁皮石斛茎叶伸长生长,茎节、直径加长加粗,平均单株鲜重(6.6 g)明显高于对照(4.45 g),但多糖含量(167.45 mg/g)较对照(172.4 mg/g)略低;喷施叶面肥后,铁皮石斛平均叶面积和叶绿素含量分别较对照增加2.35 cm2和1.25 mg/g。[结论]长期喷施专用叶面肥可促进铁皮石斛茎叶伸长生长、提高其茎叶比和产量、增加叶面积。

铁皮石斛的组织培养与快速繁殖

以铁皮石斛(Dendrobium candidum Wallich ex Lindley)无菌苗分成的茎段、带顶芽的茎段和根蔸3类外植体在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L上均能诱导出丛芽,只有根蔸能诱导原球茎,且诱导丛芽倍数高于其它两类;在此培养基上原球茎的增殖系数高于其它组合的培养基;温度对原球茎继代增殖有明显影响,(25±1)℃最适合原球茎的生长繁殖;温度对生根的影响较为明显,较低的温度(23℃)有利于减少分生苗的数量,形成健壮高大的试管苗,适量的香蕉能促进形成粗壮的根和苗。

铁皮石斛的组织培养及快速繁殖

铁皮石斛的外植体在MS+6BA0.5 mg/L-2 mg/L+NAA0.25 mg/L^0.4 mg/L或2,4-D0.25 mg/L培养基中能诱导分化丛生芽3~5倍。原球茎分化丛生芽10~15倍。壮苗后在1/2MS+NAA0.2 mg/L^0.5mg/L诱导生根,生根率达90%以上。

铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建及分析

构建铁皮石斛互补脱氧核糖核酸(cDNA)表达文库,为克隆石斛活性成分生物合成相关功能基因的全长奠定基础。【方法】以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR(long distance polymerase chain reaction)法反转录合成双链cDNA,以λTripIEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库,文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位 (pfu)的数目来表示,PCR扩增鉴定插入片段。【结果】成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库,原始文库的噬菌斑滴度为 4．3×105pfu/mL,总克隆数为3．1×105,重组率为97．6％,扩增后文库总滴度为6．8×109 pfu／mL,对随机挑取的噬菌斑进行 PCR鉴定,结果插入片段多分布在0．5～2．0kb之间,绝大部分在1．2～1．7 kb左右。【结论】文库质量鉴定结果表明,所构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。