道地药材霍山石斛及其相似种的分子鉴定

为检测霍山石斛与霍山产铜皮石斛、霍山产铁皮石斛及其它产地的几种药用石斛的差异,对霍山石斛及其相似种进行ISSR分子标记比较研究。结果表明,尽管霍山石斛及其相似种的外部形态差异较小,但在ISSR分子标记指纹图谱上却存在着显著而稳定的差异。因此,根据ISSR分子标记指纹图谱所显示的多态性位点差异,能准确鉴别霍山石斛及其相似种植物及药材。此方法简单、稳定性高、可重复性好,在霍山石斛的分子鉴定研究中有较大的应用价值。

栽培基质对铁皮石斛生长的影响

以松树皮、松树皮混合泥炭土和松树皮混合蔗渣为栽培基质,对铁皮石斛在海南省乐东黎族自治县生长情况进行研究,通过调查不同栽培基质下铁皮石斛茎长、茎粗、分蘖、节数、根数、根长、地上部生物量、地下部生物量、鲜叶产量和鲜条产量差异,筛选出适宜当地种植铁皮石斛的栽培基质。试验显示:松树皮混合泥炭土(体积比为2∶1)能显著促进铁皮石斛茎伸长、节数根数增多,提高生物量,增加鲜条和鲜叶产量,总体情况显著优于其它处理,是适宜铁皮石斛生长的栽培基质。铁皮石斛生物地上生物量与其农艺性状的相关性分析结果表明,根是影响石斛生物量的关键因素,栽培基质主要通过影响根增殖,增加根重,促进地上部茎伸长,提高地上部生物量,增加铁皮石斛产量。以上结果为在海南省乐东黎族自治县种植铁皮石斛提供了参考。

不同产地铁皮石斛的品质比较研究

为了筛选铁皮石斛优良种质,在广西、安徽、云南、浙江收集不同产地的铁皮石斛,参照2010年版《中国药典》提供的方法,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量,并使用高效液相法测定毛兰素的含量。结果表明:在0.018～0.090mg范围内,葡萄糖与吸光值线性关系良好,相关系数r=0.9987,不同产地铁皮石斛多糖含量为25.15%～36.53%;柱前衍生化HPLC法测定D-甘露糖含量专属性强、精确、重现性好,不同产地铁皮石斛甘露糖含量为18.00%～32.35%;不同产地铁皮石斛毛兰素的含量为0～0.0043%。不同产地的铁皮石斛多糖、甘露糖和毛兰素含量差异显著,其中采自云南、浙江的种质在多糖和甘露糖方面有优良的遗传基础,而广西种质的毛兰素含量相对较高。

水生蔬菜对富营养化水体净化及资源化利用

通过采用水生蔬菜水芹和豆瓣菜作为生态浮床栽培材料,对其净化富营养化水体的效果及其处理后的品质等方面进行研究.结果表明,水生蔬菜不仅能在富营养化水体中正常生长,还对富营养化水体有较强净化能力,且净化能力随着处理时间的延长而提高.处理20d,水芹对富营养化水体中的TN、NH_4^+-N、TP、COD_(Mn)、Chl.a的去除率分别达到76.86%、69.39%、90.45%、95.03%和89.81%;豆瓣菜对富营养化水体中的TN、NH_4^+-N、TP、COD_(Mn)、Chl.a的去除率分别达到78.27%、67.95%、89.98%、95.38%和91.28%.水芹和豆瓣菜不仅能显著改善富营养化水体的水质,且没有产生硝酸盐及重金属富集,符合食用标准;还能产生一定的经济效益.

铁皮石斛EST-SSR引物的评价、甄选与应用研究

开发、评价已筛选的铁皮石斛EST-SSR引物,并探讨其在遗传多样性、物种鉴定、遗传图谱构建、亲缘关系鉴定等方面应用。利用前期筛选的20对多态性较好的引物用于16份材料(15份铁皮石斛与1份串珠石斛)的聚丙烯酰氨凝胶电泳,统计扩增条带。采用Pop Gen32软件进行Nei’s基因多样度和Simpson指数等多态性指标的统计,分析单个引物和组合引物的区分率,之后采用NTSYSpc2.1软件计算遗传相似系数聚类图的构建。结果表明,引物DN4等16对引物多态性较高,而DN13、DN23、DN60和DN67多态性较低。单个引物均不能将所有供试样品区分开来,其中DN4、DN10、DN105、DN81、DN39和DN71区分率相对较高;利用组合引物能够将所有样品进行有效区分,其中DN4+DN10+DN105+DN39引物组合可作为核心引物予以使用,可用于铁皮石斛指纹图谱的构建和遗传多样性分析。聚类分析结果表明,该20对引物可以较好地应用于铁皮石斛种内、种间亲缘关系的鉴定。此外,引物DN4、DN13、DN39、DN58、DN65、DN67、DN10和DN99可用于铁皮石斛与串珠石斛的鉴定。本研究开发的20对引物可较好地应用于铁皮石斛遗传多样性分析、种质鉴定、亲缘关系鉴定和遗传图谱构建等方面,具有广泛的应用性。

铁皮石斛胚状体对大鼠抗疲劳能力的影响

目的研究铁皮石斛胚状体对大鼠抗疲劳能力的影响。方法大鼠随机分为低、中、高剂量组(铁皮石斛胚状体0.2、0.4、0.8 g/kg),空白对照组、跑步对照组及铁皮枫斗组(铁皮枫斗1.2 g/kg),进行大鼠跑台实验。观察大鼠运动前、运动后0 min及运动后30 min血糖含量、全血乳酸含量变化并检测运动后肝糖元、肌糖元及血尿素氮的含量。结果与跑步对照组相比,铁皮石斛胚状体各剂量组可以在跑步30 min后提高血糖含量并降低全血乳酸含量,中、高剂量组可以降低运动后肝糖元及肌糖元的消耗,各剂量组均能明显降低血尿素氮的含量。结论铁皮石斛胚状体具有提高大鼠抗疲劳能力的作用。

菌根真菌对铁皮石斛的影响及其抗病机理研究

在分析菌根真菌对铁皮石斛抗病能力影响的基础上,研究在感病条件下,菌根真菌对铁皮石斛SOD、POD、PAL、PPO活性的影响。结果表明,优良菌根真菌JSNL003能够通过提高SOD、POD、PAL和PPO的活性,增强细胞膜的调节功能,进而提高菌根化铁皮石斛植株的抗病能力。

大黄中大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的提取、纯化及含量测定方法的研究

目的对大黄中大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷进行提取、纯化及含量测定的方法进行研究。方法采用大孔吸附树脂对大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷进行纯化,采用高效液相色谱法,以自制大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷标准品作对照,对大黄药材中有效成分大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷进行了含量测定。色谱柱:Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm);柱温:40℃;流动相∶乙腈-水(30∶70,v/v);流速:1.0mL·min-1;检测波长:420nm。结果被测峰和其他峰可完全分离,在10～200μg·mL-1内具有良好的线性关系,r=0.9998,测得药用大黄中大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量为0.713%,回收率:97.82%,RSD:0.84%。结论这种方法准确、可靠,可用于大黄药材的质量控制。

利用铁皮石斛原球茎进行组培快繁

【目的】利用铁皮石斛原球茎（PLB）扩繁植株进行组培苗生产,为其工厂化组培育苗提供参考依据。【方法】以桂斛1号、桂斛2号、野生青杆和野生红杆4个铁皮石斛品种的茎尖为试验材料,分别在适宜的培养基上进行原球茎诱导、增殖和分化培养,同时对种子进行愈伤分化培养,探讨不同扩繁植株组培方法对其增殖速度、出苗率、变异率及栽培表现的影响。【结果】铁皮石斛茎尖诱导形成原球茎扩繁植株的出苗率高达89.7%～95.3%;每个球茎经过10个增殖周期培养增殖至14953个;变异率可控制在1.1%～1.7%。种子繁殖的植株其茎尖愈伤组织诱导率、出苗率最高达90.7%;每粒种子经过10个周期增殖培养,原躯体数增殖至4000个;变异率为7.9%～10.3%;栽培表现比经原球茎方式培养的植株差。【结论】利用铁皮石斛原球茎进行工厂化育苗可快速获得铁皮石斛优质种苗。

铁皮石斛对D-半乳糖致衰老模型小鼠保护作用的研究

目的:研究铁皮石斛的抗衰老作用并探讨其作用机制。方法:小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和铁皮石斛组,每组10只。皮下注射D-半乳糖15 d后,维生素E组和铁皮石斛组分别灌胃Vit E、铁皮石斛;正常对照组、模型对照组灌胃等体积的生理盐水,8周后进行水迷宫试验、脏器指数测定、血清与肝组织T-SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA浓度的测定。结果:通过水迷宫实验发现,铁皮石斛组小鼠学习和记忆能力、空间搜索能力、空间辨别能力均较模型对照组明显增加(P<0.05);肝脏指数呈显著下降趋势(P<0.05),免疫器官胸腺与脾脏指数显著提高(P<0.05或P<0.01);血清和肝组织T-SOD、GSH-Px、CAT活力显著提升(P<0.01),MDA浓度显著降低(P<0.01或者P<0.05)。结论:铁皮石斛可通过增强机体免疫功能、提高抗氧化能力等发挥其延缓衰老的作用。

铁皮石斛复方制剂的抗氧化和延缓衰老作用研究

目的研究铁皮石斛复方制剂的抗氧化和延缓衰老作用。方法通过二苯代苦味酰基自由基(DPPH)和羟自由基清除实验检测铁皮石斛复方制剂的体外抗氧化活性。利用秀丽线虫氧化应激模型,验证铁皮石斛复方制剂的体内抗氧化活性,同时在正常条件下检测铁皮石斛复方制剂对寿命的影响。在氧化应激条件下,测定铁皮石斛复方制剂对秀丽线虫活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及丙二醛(MDA)含量的影响。结果铁皮石斛复方制剂对DPPH和羟自由基均有较好的清除作用,在16.0 mg/mL质量浓度下对DPPH和羟自由基清除率均达到60%。铁皮石斛复方制剂能提高秀丽线虫在高浓度百草枯(50 mmol/L)氧化胁迫条件下的存活率,同时也能延长其在正常条件下的寿命。在低浓度百草枯(2 mmol/L)氧化胁迫下,铁皮石斛复方制剂能显著降低秀丽线虫ROS含量并增强SOD活力,但对CAT活力和MDA含量没有明显影响。结论铁皮石斛复方制剂具有抗氧化活性,能提高秀丽线虫在氧化胁迫条件下的存活率并延长寿命,其机制可能与提高秀丽线虫SOD活力有关。

铁皮枫斗颗粒组方药物对CAG大鼠胃黏膜萎缩的逆转作用及PCNA、Bcl-2表达的影响

目的:探讨铁皮枫斗颗粒及其组方药物对亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitro soguanidine,MNNG)诱发慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)模型大鼠萎缩胃黏膜逆转作用及对PCNA蛋白、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:Wistar大鼠自由饮用167 mg/LMNNG饮用液,实验造模12周。确定成模后,将大鼠分为模型组、铁皮枫斗颗粒组、组方药物铁皮石斛提取物组、组方药物西洋参提取物组,另设正常组作对照。并分别给予药物治疗8周后,观察大鼠体质量、胃组织病理组织学、胃组织增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达情况。结果:铁皮枫斗颗粒组体质量显著高于模型组,体质量丢失显著恢复(P<0.01);铁皮石斛提取物组、西洋参提取物组体质量恢复均显著高于模型组(P<0.05)。铁皮枫斗颗粒组腺体萎缩、主细胞、不典型增生、肠化较模型组显著减轻(P<0.05,P<0.01);铁皮石斛提取物组腺体萎缩、主细胞、肠化显著减轻(P<0.05,P<0.01);西洋参提取物组腺体萎缩、不典型增生、肠化显著减轻(P<0.05,P<0.01)。模型组雄1发生肿瘤,治疗各组未发生肿瘤。铁皮枫斗颗粒组PCNA蛋白、Bcl-2蛋白较模型组有降低趋势。铁皮石斛提取物组、西洋参提取物组PCNA蛋白、Bcl-2蛋白较模型组有显著降低(P<0.05)。结论:铁皮枫斗颗粒及其组方药物均对CAG模型大鼠具有良好的治疗作用,减轻体质量丢失,减轻胃黏膜萎缩和肠化,其作用机理之一可能是通过下调胃黏膜PCNA、Bcl-2蛋白的高表达起到治疗作用。

霍山石斛与铁皮石斛对比研究进展

本文主要通过整理分析霍山石斛和铁皮石斛的相关文献,基于鉴别、含量测定、指纹图谱、药理作用、综合开发利用等研究进展,概括霍山石斛和铁皮石斛研究的异同,为霍山石斛进一步开发研究提供参考。

铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分分离、鉴定及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

目的分离、鉴定铁皮石斛叶中的黄酮碳苷类成分,并评价其体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性。方法采用大孔吸附树脂和制备型高效液相色谱法对铁皮石斛叶中的黄酮碳苷类成分进行分离和纯化,通过紫外光谱、核磁共振、高分辨电喷雾离子化质谱等波谱方法对化合物进行推导和鉴定。考察黄酮碳苷类成分与阳性对照(阿卡波糖)的α-葡萄糖苷酶体外抑制活性。结果从铁皮石斛叶中分离得到5个芹菜素-6,8-C-二糖苷,鉴定为芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8-C-β-D-异鼠李糖(1)、夏佛塔苷(2)、异夏佛塔苷(3)、异佛莱心苷(4)和佛莱心苷(5)。化合物1~5和阿卡波糖抑制α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度分别为(1.79±1.27)、(2.05±0.72)、(1.93±0.67)、(1.09±0.46)、(1.36±0.58)、(18.69±1.24)μmol/L。结论从铁皮石斛叶中分离得到5个具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的芹菜素-6,8-C-二糖苷类成分,其中化合物1为新化合物,化合物2首次从该植物中分离得到。

HPLC法测定铁皮石斛饮料中D-甘露糖的含量

目的:建立铁皮石斛饮料中D-甘露糖(D-Man)含量的测定方法。方法:样品分别经乙醇沉淀、盐酸水解和衍生化处理。色谱柱使用Agilent EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);20mmol/L乙酸铵-乙腈溶液(80.5:19.5)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长250nm。结果:样品中西洋参多糖对甘露糖含量测定无干扰;样品中D-甘露糖在7.815～312.6μg/mL范围内,线性关系均良好,相关系数r=0.9997;样品回收率为99.66%,RSD为1.76%(n=6)。结论:本方法专属性强、灵敏、精确、重现性好,可用于本品多糖组成中D-Man含量的测定。

铁皮石斛产业化关键科学与技术的突破

针对铁皮石斛繁殖难、种植难、产品单一等产业发展重大问题,通过铁皮石斛基因组学研究,明确铁皮石斛为二倍体、有38条染色体、28 910个蛋白编码基因及在转录组水平上的器官基因表达特异性,具有大量种子而种子没有胚乳、广泛生态适应性、多糖合成的基因调控机制,为铁皮石斛遗传工程育种和活性药用成分的开发利用提供了理论基础;攻克了结实难、发芽难等繁育难题,建立了组培快繁体系,实现种苗工厂化生产,奠定了铁皮石斛人工种植基础;建立了铁皮石斛育种体系,明确了重要经济性状的遗传变异规律,育成铁皮石斛系列专用品种(品系),解决了实生后代分离严重问题,支撑铁皮石斛产业升级;揭示了目标化合物动态变化规律、养分吸收机制,突破了栽培基质、光调控、精准采收等关键技术,建立了设施栽培、活树附生、岩壁附生、立体栽培、盆栽等系列栽培模式,实现种出铁皮石斛、种出好的铁皮石斛。

基于PLS分析石斛品质与生态因子的相关性

基于中药材产地适宜性分析地理信息系统(TCM-GIS)平台,获得了采样区域11个生态因子值.应用偏最小二乘回归法(PLS)分析了石斛中的化学成分及其与生态因子的相关性.结果表明:同种石斛不同产地的化学成分含量差异显著.土壤类型与铁皮石斛中多糖含量呈极显著正相关;年降水量与金钗石斛中石斛碱积累呈极显著正相关;温度是影响鼓槌石斛中毛兰素含量的主要因素.主成分分析表明,浙江是铁皮石斛的最佳产地,贵州是金钗石斛的最佳产地,而云南是鼓槌石斛的最佳产地.

铁皮石斛化学成分研究

目的研究铁皮石斛Dendrobium officinale的化学成分。方法使用硅胶色谱法、反相硅胶色谱法及半制备HPLC等技术进行分离纯化,采用现代波谱技术鉴定化合物结构。结果从铁皮石斛70%乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖基（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、conicaoside（3）、3,4,5-三甲氧基苯-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、2,6-二甲氧基-4-羟基苯酚-1-O-β-葡萄糖苷（5）、4-（3＇-羟丙基）-2,6-二甲氧基苯酚-3＇-O-β-D-葡萄糖苷（6）、胸腺嘧啶脱氧核苷（7）、紫丁香苷（8）、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷（9）、（＋）-丁香脂素（10）、丁香脂素-4＇-O-β-D-单葡糖苷（11）、柚皮素（12）、对羟基苯甲酸（13）、4,4＇-二羟基-3,5-二甲氧基联苄（14）。结论化合物1~6为首次从石斛属植物中发现,7~8为首次从本植物中发现。

铁皮枫斗HPLC特征图谱研究

目的建立铁皮枫斗HPLC特征图谱。方法采用ZorbaxSBC18色谱柱；流动相为乙腈．0．2％的甲酸溶液，梯度洗脱；检测波长为270nm；柱温为35℃；流速为1．0mL·min^-1。结果铁皮枫斗标示出36个特征共有峰，10批样品的相似度为0．898～0．969。结论本方法准确可靠，重复性好，为铁皮枫斗的质量控制提供了一定的方法依据。

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0.02mol·L^-1乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长250nm;流速1.0mL·min^-1;柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290nm;流速0.8mL·min^-1;柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0.15~3.0,0.075~2.25μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.01%(RSD2.1%),101.69%(RSD2.0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12.75%~36.40%,2.93%~18.39%,19.23%~54.58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14.33%~29.47%,6.64%~15.20%,25.73%~44.37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0.0208~0.8320μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为101.96%(RSD1.8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0.0532~0.1224mg·g^-1(均值为0.0810mg·g^-1),0.0403~0.0900mg·g^-1(均值为0.0683mg·g^-1),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0.02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。