山药原植物薯蓣及其近缘种的分子鉴别和亲缘关系研究

采用CTAB法提取总DNA,应用PCR产物直接测序法,测定了山药原植物薯蓣及其近缘种共10个种和1个变种的trnL-F和rbcL序列。序列分析结果表明:薯蓣及其近缘种trnL-F序列长689-834 bp,当空位始终作缺失处理时,有变异位点67个,其中信息位点11个,占序列总长度的1.43%;种间碱基差异百分率为1.6%,其中转换率为0.6%,颠换率为1.0%;序列的G+C含量为32.5%。薯蓣及其近缘种rbcL序列长1 096-1 160 bp,存在变异位点42个,其中信息位点10个,占序列总长度的0.93%;种间碱基差异百分率为0.6%,其中转换率为0.3%,颠换率为0.3%;序列G+C含量为44.1%。基于2个序列分别重建了薯蓣及其近缘种的系统发育树。结果表明2个系统树的结构基本一致,均支持经典分类方法对薯蓣及其近缘种的亲缘关系的划分。同时,本研究也证实叶绿体基因组序列测定是鉴定山药原植物薯蓣及其近缘种的快速、可靠、有效的方法。

福建山药种质资源遗传多样性的RAPD分析

山药(Dioscorea polystachya Turcz.)具有重要的药用价值,了解其遗传多样性对山药引种育种、资源研究等都具有十分重要的意义。本研究利用RAPD-PCR技术对来自福建不同地区的34份山药资源进行遗传多样性分析。从200多条RAPD随机引物中筛选出24条引物,共扩增出182条带,其中多态性条带数为161,多态性比例为88.5%。应用DPS统计数据软件进行差异条带的遗传距离系数分析,构建遗传距离系数矩阵,然后用非加权配对算术平均法(UPGMA)进行聚类分析,构建聚类分析图。聚类分析结果表明,当遗传相似系数为0.66时,可将34份资源分成4类:普通山药、田薯、扁山药和福建大薯。当遗传相似系数为0.68时,可将普通山药分为长山药和棒山药2个亚类,这与经典的园艺学分类相符,在分子水平上支持了按园艺学薯块类型对山药资源进行分类的观点。

山药种质资源亲缘关系的ISSR分析

采用ISSR标记技术,分析了94份山药种质资源的遗传多样性及亲缘关系。从100条引物中优选出24条引物,共扩增出352条清晰条带,其中多态性带344条,多态性百分率为97.7%。聚类分析结果将94份山药资源分为4类,第Ⅰ类为薯蓣群、第Ⅱ类参薯群、第Ⅲ类为山薯群、第Ⅳ类褐苞薯蓣群,各种类群的遗传距离依次为:0.053 8～0.088 4,0.035 3～0.068 2,0.053 3～0.138 2,0.054 2～0.126 6,说明4个类群内各资源间亲缘关系由远到近的顺序为:参薯>山薯>薯蓣>褐苞薯蓣。以遗传相似性为标准,以种群为单位,参薯群与山薯群亲缘关系最近;与薯蓣群亲缘关系次之;与褐苞薯蓣群亲缘关系最远。

温度因素对薯蓣多糖测定的影响研究

本实验考察了水提温度、原料干燥温度等因素对薯蓣多糖含量测定的影响。分别以河南铁棍山药、昆明栽培山药、浙江文成参薯以及福建三明褐苞薯蓣为试样,在不同温度下干燥和提取,采用硫酸-苯酚法测定多糖含量。结果表明,样品的干燥温度对多糖含量测定结果影响不大,而水提温度对于多糖含量测定结果影响极大。薯蓣多糖测定实验中的水提温度不宜超过65℃,水提温度过高时会因原料中淀粉溶出而导致多糖测定结果大幅虚高。

福建山药资源形态标记分析

用系统聚类法对15个农艺性状指标进行分析,构建遗传距离树状图,发现当绝对值距离在13～26时,34份山药资源根据地上部长势的强弱划分成2个大类;当绝对值距离在9～13时,生长势较弱的一类又可分为2个亚类,一类为有分枝具黄褐皮色的长状山药,另一类为棒状山药及参薯;绝对距离在8左右时,又可将棒状山药和参薯分开。综合形态标记和分子标记分析结果可知,两种方法均能将参薯和普通山药分开,且说明薯块类型可以作为山药分类的重要依据。

ISSR和SRAP在山药遗传多样性分析上的应用比较

以90份山药种质资源为材料,从多态性检测水平、遗传多样性检测水平、遗传距离分析和聚类分析4个方面对ISSR与SRAP揭示山药种质资源遗传多样性的差异进行分析。结果表明:SRAP标记的扩增谱带总数、平均扩增谱带数、平均多态性谱带数都远高于ISSR标记,遗传距离范围也比ISSR标记更广,但多态性比率差异不大;2种标记在检测遗传多样性和种群间的分化程度方面较为相似,二者结果均表明山药种质资源总的遗传变异中约有52%变异存在于种群间,约48%的变异存在于种群内;从聚类分析的结果上看,ISSR标记在以遗传距离为0.13时将山药资源分为4个类群,而SRAP标记以遗传距离为0.18时将其分为5个类群。综合4个方面比较结果及SRAP标记和ISSR标记自身的特点,认为SRAP标记更适合用于山药遗传多样性分析。

HPLC测定感冒清热颗粒中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

目的 :建立反相高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中的升麻苷及 5 O 甲基维斯阿米醇苷含量 ;方法 :采用APEXODS色谱柱 ,分别以醋酸钠水溶液 (40mmol·L-1,pH 6 .9) 甲醇 (6 5∶35 )和水 甲醇 四氢呋喃 (6 2∶38∶1)为流动相 ,检测波长为 2 5 4nm ,流速为 0 .8mL·min-1;结果 :升麻苷与 5 O 甲基维斯阿米醇苷分别在 0 .72～ 6 .5 μg·mL-1与 0 .92～ 16 .5 μg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好 (r =0 .9999) ;加样回收率分别为 10 0 .3%和 94 .7%。测得感冒清热颗粒中含有升麻苷 0 .133mg·g-1和 5 O 甲基维斯阿米醇苷 0 .16 7mg·g-1。结论 :该法简便、快速。

HPLC法测定大青根中腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷的含量

目的:建立HPLC法测定大青根中腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷含量的方法。方法:采用Diamnosil ODS-C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为室温,进样量为10μl。结果:腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷线性范围分别为5～100μg·ml^(-1)(r=0.999 6),5～100μg·ml^(-1)(r=0.999 3);平均回收率分别为98.2%(RSD=1.08%,n=6)和98.4%(RSD=1.18%和n=6);样品平均含量分别为0.081,0.014 mg·g^(-1)。结论:本方法可用于大青根药材的质量控制。

毛脉酸模根中一新的色原酮苷类化合物(英文)

从毛脉酸模根(Rumexgmelini Turcz.)75%乙醇提取物中分离得到1个新色原酮苷和5个已知化合物,应用波谱学方法及文献对照分别鉴定为2,5-dimethyl-7-hydroxychromone-7-O-β-glucopyranoside(1),nepodin-8-O-β-D-glucopyranoside(2),10-hydroxyaloin A(3),10-hydroxyaloin B(4),5-methoxyl-1(3H)-benzofuranone-7-O-β-D-glucopyranoside(5),phenylethyl-O-α-L-arabinopyranosy-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside(6)。其中化合物1为新化合物,3～6首次从酸模属中分离得到,化合物2首次从该植物中分离得到。

RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量

目的建立防风药材中4种有效成分含量同时测定的方法，以比较不同产地防风药材及不同部位中有效成分的含量，为防风药材质量标准的制定及防风的资源开发提供科学依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1．0mL·min^-1；检测波长：254mm；柱温：30℃。结果升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷能够达到基线分离；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度在1．92～400mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9998，n=5），平均加样回收率分别为97．5％、97．7％，RSD分别为1．3％、2．8％（n=9）；升麻素、亥茅酚苷质量浓度在0．96～200mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999，n=5），平均加样回收率分别为99．3％、97．7％，RSD分别为2．0％、1．7％。结论本方法为防风药材的资源开发提供了参考，可用于防风药材的质量控制。

甘薯和薯蓣块茎水提物对糖尿病小鼠的降血糖作用

近年来,全球糖尿病发病率增长迅速,糖尿病并发症也日趋严重,成为威胁人类健康的慢性疾病之一[1]。临床上治疗糖尿病主要采用胰岛素、双胍类和磺脲类等降糖类药物[2],但这些药物价格昂贵且长期服用还会产生严重的副作用。因此,从植物中寻求具有降糖作用的天然成分具有重大的开发价值和广阔的市场前景。

应用SRAP标记构建山药种质资源DNA指纹图谱

利用30对多态性良好的SRAP引物对90份山药种质资源进行PCR扩增,构建扩增图谱,共扩增到722个位点,多态性位点581个,多态性比例为80.47%,每对引物组合检测多态性位点3～30个,每对引物能鉴别6～51份山药种质资源；采用DNA数据分析软件对扩增出的多态性位点进行分析,构建山药种质资源方框指纹图谱,该图谱清晰地反映出每对引物能扩增的多态位点数、鉴别资源份数及资源具体编号,资源在该引物组合下所能检测得到的多态位点数及所处的具体位置等信息；从10对SRAP引物组合中挑选出的21个多态性位点,根据谱带的有无转化成的1/0字符串编码,形成山药种质资源DNA数字指纹图谱,该图谱可鉴别区分90份山药种质资源中的82份资源。同时这些指纹图谱可为下一步的山药品种鉴定,种质资源评价、利用,分子标记辅助育种及品种权保护提供技术支撑。

薯蓣茎生珠芽发生相关的转录组和PEBP家族基因表达特性分析

以薯蓣(Dioscorea polystachya Turcz.)的具茎生珠芽品种‘铁棍山药’(‘Tiegun’)和无茎生珠芽品种‘花籽山药’(‘Huazi’)为研究对象,采集‘铁棍山药’具茎生珠芽、茎基部无茎生珠芽和茎上部无茎生珠芽的叶腋部位以及‘花籽山药’的叶腋部位4组样品进行转录组测序,并以‘铁棍山药’不同发育期茎生珠芽的叶腋部位为样品进行qRT-PCR分析,以期明确与薯蓣茎生珠芽发生相关的调控基因。结果显示:从2个品种不同部位的4组样品中共获得77981个All-unigenes,长度主要集中于300~3000 bp,占总量的99.44%;All-unigenes的平均长度为1050 bp,N50值为1764 bp,GC含量为42.66%;转录组unigenes与油棕(Elaeis guineensis Jacq.)和海枣(Phoenix dactylifera Linn.)的同源性较高。对具茎生珠芽叶腋样品与3组无茎生珠芽叶腋样品的差异unigenes进行功能注释和表达量比较。结果显示:经过GO注释分析,3组转录组分别有6098、8840和9141个差异unigenes注释在细胞组分、分子功能和生物过程3大类43个亚类中,其中,注释在代谢过程亚类的差异unigenes数分别占对应注释unigenes总数的10.6%、10.5%和10.7%;3组转录组分别有11182、13552和15918个差异unigenes注释在KEGG代谢通路,且主要集中在代谢和遗传信息处理;表达量均上调的unigenes有3531个,表达量均下调的unigenes有1084个;在具茎生珠芽叶腋部位中特异性表达的unigenes有235个,而在无茎生珠芽叶腋部位中均特异性表达的unigene仅1个。从转录组中共鉴定出11个PEBP家族成员,且在系统演化树上这些PEBP家族基因主要分布在TFL 1-like和FT-like分支上,其中位于TFL 1-like分支的Unigene40804_All与拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕中已知功能的TFL 1基因高度同源,被命名为DpTFL 1,且DpTFL 1基因仅在‘铁棍山药’具茎生珠芽的叶腋部位表达。qRT-PCR分析结果显示:随‘铁棍山药’茎生珠芽发育,DpTFL 1基因的表达量逐渐升高,在发育成熟期达到最高。综合分析结果表明:与淀粉合成相关的SUS等基因以及与激素和糖代谢相关的基因可能参与‘铁棍山药’茎生珠芽发育的调控;DpTFL 1基因在‘铁棍山药’具茎生珠芽的叶腋部位特异性表达,其可能与薯蓣茎生珠芽发生有关。

扶芳藤总三萜对衰老小鼠血清及组织T-AOC、CAT、GSH-PX表达的影响及意义

目的探索扶芳藤总三萜对D-半乳糖诱导的小鼠衰老模型抗氧化作用。方法取健康清洁级雄性昆明小鼠75只,以皮下注射D-半乳糖(D-galactose)方法建立衰老小鼠模型;并将小鼠以单纯随机抽样法分为阳性药物组、模型组、扶芳藤总三萜高、低剂量组及正常对照组,每组15只,各组每天按预设方案给药连续21 d后,检测小鼠血清、心脏、肝脏及骨骼肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)三项抗氧化指标。结果与对照组比较,高、低剂量组小鼠的血清T-AOC及GSH-Px水平均升高,其中低剂量组的TAOC水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC及GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠心脏组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高、低剂量组的T-AOC水平明显高于对照组,高剂量组CAT水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC、CAT、GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠肝脏组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高剂量组的CAT水平明显高于对照组,高剂量组的GSH-Px水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC、CAT、GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠骨骼肌组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高、低剂量组的T-AOC水平明显高于对照组,高剂量组的CAT水平明显高于对照组,高剂量组的GSH-Px水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但低剂量组的CAT水平和GSH-Px水平升高均不明显,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论扶芳藤总三萜可提高衰老小鼠抗氧化能力,具有抗衰老功效。

山药“3414”肥效试验研究

山药施用氮、磷、钾肥的"3414"试验研究结果表明:在该试验条件下,适量增施氮肥、磷肥、钾肥可以提高山药的产量,但是过量施用都会导致产量下降;通过建立回归方程并对回归方程的各项数据进行分析显示,山药产量与氮肥、磷肥、钾肥的施肥量之间存在着显著的回归关系,推荐山药最高产量纯氮、五氧化二磷、氧化钾的施用量分别是25.88、5.16、18.86 kg/667 m2,纯氮∶五氧化二磷∶氧化钾的最佳配比为1.000 0∶0.199 0∶0.729 5,最高产量为2 624.688 kg/667 m2。

大叶山楝中二萜类化学成分及其抗炎活性研究

目的研究大叶山楝Aphanamixis polystachya枝叶的化学成分及其抗炎活性。方法采用硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及MCI等多种柱色谱技术进行分离纯化,根据理化性质结合波谱数据鉴定化合物结构。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型,对化合物进行抗炎活性评价。结果从大叶山楝枝叶中分离得到11个二萜类化合物,分别鉴定为(4S)-4-[(E)-11-(15,15-dimethyl-14-oxo-14,15-dihydrofuran-12-yl)-11,18-dihydroxy-7-methyloct-6-en-5-yl]-3-methyl-1(4H)-furanone(1)、nemoralisin B(2)、aphapolin A(3)、nemoralisin G(4)、nemoralisin J(5)、nemoralisin I(6)、nemoralisin H(7)、nemoralisin D(8)、nemoralisin A(9)、aphanamene B(10)和反式植醇(11)。化合物11对LPS诱导的RAW 264.7细胞内NO的生成有微弱抑制作用,其半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值为428.7μmol/L。结论化合物1为新化合物,命名为陵水暗罗素O(nemoralisin O);化合物3、8和11为首次从大叶山楝中分离得到;化合物11显示出微弱的抗炎活性。

五味子藤茎正丁醇部位化学成分研究

目的研究五味子Schisandra chinensis藤茎正丁醇部位的化学成分。方法利用多种色谱分离技术进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从五味子藤茎90%乙醇提取物的正丁醇部位中分离得到14个化合物,分别鉴定为槲皮素(1)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖苷(3)、芦丁(4)、芹菜素(5)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、染料木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、绿原酸(9)、阿魏酸(10)、咖啡酸(11)、齐墩果酸(12)、儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(13)、胡萝卜苷(14)。结论化合物3、7、8、13为首次从该植物中分离得到。

防风药材质量标准研究

目的对防风药材进行质量标准提高研究。方法TLC法检定防风药材中5个色原酮类成分,HPLC法测定防风中4个主要有效成分的含量。结果防风药材中可同时鉴定出防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅰ和防风色原酮Ⅱ。结论防风药材中含防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅰ不得少于0.01%和防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷不得少于0.02%,4种成分的总量不得少于0.40%。

兴安升麻根茎的化学成分研究

目的研究兴安升麻Cimicifuga dahurica根茎的化学成分。方法通过硅胶柱色谱、开放ODS柱色谱、Sephadex LH-20以及半制备液相色谱等方法,对兴安升麻根茎的醋酸乙酯萃取部位及水层部位进行了分离,并通过理化性质及核磁共振波谱数据鉴定化合物结构。结果从兴安升麻醋酸乙酯萃取部位及水层部位中分离并鉴定了15个化合物,分别为20(R),23(R),24(R),25(S),26(S)-16β:23;23:26;24:25-三环氧-12β-乙酰基-3β,26-二羟基-9,19-环阿屯-7-烯-3-O-β-D-木糖苷(1)、小升麻苷B(2)、23-O-乙酰升麻烷-3-O-β-D-木糖苷(3)、7,8-二去氢-24-O-乙酰氢化升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(4)、24-表-升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(5)、24-O-乙酰兴安升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(6)、24-表-24-O-乙酰氢化升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(7)、12β-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(8)、23-O-乙酰基-7,8-二去氢升麻烷-3-O-β-D-木糖苷(9)、7,8-二去氢-25-脱氢升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(10)、25-O-乙基升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(11)、3,4-二羟基苯甲酸(12)、24-O-异兴安升麻醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷(13)、番石榴酸-1-乙酯(14)和番石榴酸-4-乙酯(15)。结论化合物6、11、12、14、15为首次从升麻属植物中分离得到,化合物1、4、5、8~10、13为首次从兴安升麻中分离得到。

兴安升麻根茎的化学成分研究

目的研究兴安升麻Cimicifuga dahurica根茎的化学成分。方法运用HP-20大孔吸附树脂、硅胶、ODS和Sephadex LH-20等柱色谱以及反相半制备型HPLC等各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定。结果从兴安升麻根茎大孔吸附树脂30%乙醇水洗脱部位中共分离得到了20个化合物,分别鉴定为cimicifugaside F(1)、(+)-(2S,3R)-2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-[(β-D-吡喃葡萄糖氧基)甲基]-7-甲氧基苯并呋喃-5-丙烯酸(2)、5-羟基-2-甲氧基苯甲酸(3)、苯甲酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(4)、异阿魏酸(5)、阿魏酸(6)、阿魏酸-4-O-β-D-阿洛糖苷(7)、阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(8)、芥子酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(9)、6,6′-二-O-芥子酰基蔗糖(10)、番石榴酸(11)、蜂斗菜酸(12)、N-反式对羟基苯乙基阿魏酰胺-4-O-β-D-阿洛糖苷(13)、N-反式-3′-甲氧基-4′-羟基苯乙基阿魏酰胺-4-O-β-D-阿洛糖苷(14)、N-反式-3′-甲氧基-4′-羟基苯乙基阿魏酰胺-4-O-β-D-葡萄糖苷(15)、grevilloside G(16)、丁香脂素(17)、丁香脂素-4,4′-O-β-D-双阿洛糖苷(18)、(+)-异落叶松树脂素-3a-O-β-D-葡萄糖苷(19)、(-)-5′-甲氧基异落叶松树脂素-3a-O-β-D-葡萄糖苷(20)。结论化合物1为1个新的木脂素苷类化合物,化合物2~4、8~10、15~17、20为首次从升麻属植物中分离得到。