文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)NS5蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

通过对文山松毛虫质型多角体病毒 (DendrolimuspunctatusWenshanensiscytoplasmicpoly hedrosisvirus,DpwCPV)的增殖、纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS 热酚法抽提得到基因组dSRNA ,使用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并回收纯化第九片段S9。S9RNA双链经高温变性 ,逆转录合成cDNA双链。根据DpwCPV与BmCPV 1的同源性设计引物 ,将S9进行PCR扩增后 ,克隆到PMD1 8 T载体上。最终获得一个 977bp的序列 ,其中包含一个 963bp的开放阅读框 (ORF)。推测DpwCPVS9基因编码一个 32 0个氨基酸的蛋白 ,分子量约为 35 5 60。

文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)多角体蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

通过对文山松毛虫质型多角体病毒的增殖 ,纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒 提纯的病毒粒子经SDS 酚抽提 ,琼脂糖凝胶电泳分离基因组dsRNA ,低熔点琼脂糖电泳法回收纯化编码多角体蛋白的第十片段S10 S10经DMSO变性 ,逆转录合成cDNA第一条链 ,PCR扩增后 ,克隆在PMD18 T载体上 ,克隆片段全长 76 3bp 起始密码AUG位于第 3～ 5位碱基 ,终止密码UGA位于第 74 7～ 74 9位碱基 推测DpwCPV多角体蛋白基因编码一段由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,分子质量为 2 84 39.4 4× 10 3 与舞毒蛾质型多角体病毒 (LdCPV)多角体蛋白基因比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 97% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 99% ;与家蚕质型多角体病毒(BmCPV)多角体蛋白基因相比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 88% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 97%

文山松毛虫质型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

对文山松毛虫质型多角体病毒的形态结构及理化特性进行了研究,多角体大部分为六边形,少数为四边形及近园形,其大小在0.47～2.45μ之间,平均为1.1μ。病毒粒子呈球形,无囊膜,致密的核芯区由一层外壳包裹,直径为60nm。病毒粒子表面有12个刺突,放大图象可见其亚单位排列。多角体蛋白的主要成分为一种,分子量为26200道尔顿,多角体蛋白氨基酸组成中不含半胱氨酸;其碱性氨基酸与酸性氨基酸之比为1:2.16。病毒粒子结构蛋白含五条多肽组分。用SDS-热酚法提取所得核酸,其热变性紫外吸收OD260值增加51.6％。抗核酸酶S1。Tm值为86℃。在1％琼脂糖凝胶电泳中可分为9个片段,而在5％PAGE中,则可分为10个片段。各片段大小在0.66×106～2.85×106道尔顿之间,总分子量为15.35×106。电镜分析研究显示了CPV RNA在0.4μ、0.8μ和1.2μ处有三个分布峰。

云南省松毛虫病毒资源及其应用

１９７８年以来，云南省从松毛虫自然感病虫尸中分离到６种病毒。于１９８４～１９９４年，先后应用推广松毛虫质型多角体病毒防治文山松毛虫、云南松毛虫及思茅松毛虫４２８２．３ｈｍ２，当年防效７０．０％～９２．８％，持续感染明显。文山松毛虫质型多角体病毒致病力强，毒力稳定，并具有继代感染的作用。

不同治理区文山松毛虫自然种群生命表比较

文山松毛虫Dendrolimus punctatus wenshanensis Tsai et Liu在云南省是危害较为严重的害虫之一,文山松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus wenshanensis Cytoplasmic Polyhedrosis Virus,Dpw CPV)制剂的应用为控制文山松毛虫的危害发挥了积极的作用。利用生命表技术来研究Dpw CPV施用区和化学药剂施用区文山松毛虫自然种群动态和发展趋势,结果显示:寄生是文山松毛虫蛹期的第一致死因子,捕食是其它发育阶段第一致死因子;在Dpw CPV施用区,文山松毛虫除卵期外的其他发育阶段,病毒是排在首位的微生物致死因子,云南松Pinus yunanesis林内的文山松毛虫种群趋势指数为0.61,预测下一代的种群呈下降趋势;在化学药剂施用区,文山松毛虫不同发育阶段的微生物致死因子各不相同,云南松林内的文山松毛虫种群趋势指数为1.82,预测下一代的种群呈上升趋势。研究结果为准确预测文山松毛虫种群变动规律,揭示Dpw CPV持续控制文山松毛虫危害的机制提供了科学数据支持。

文山松毛虫生物学特性及两种生物杀虫剂防治试验

首次观察了文山松毛虫DendrolimuspunctatuswenshanensisTsaietLiu一年发生 1代的生物学特性 ,测定了室内外各龄幼虫的取食量。跟踪观测了文山松毛虫各虫期的存亡状况 ,研制出一个完整世代的自然种群生命表 ,整个世代死亡率达 99 90 %。应用Bt乳剂和文山松毛虫质型多角体病毒 (DpwCPV)防治文山松毛虫的试验表明 ,Bt和DpwCPV防治 5龄幼虫效果良好。

文山松毛虫质型多角体病毒杀虫剂的研制

报道了文山松毛虫质型多角体病毒杀虫剂的研制 ,包括多角体的纯化、辅助剂的筛选、剂型研制、产品包装以及病毒杀虫剂的产品质量检测及生产等。该杀虫剂为乳剂 ,多角体浓度达 2 .5×10 9PIB/mL ;所选辅助剂取材方便、容易配制 ,对环境没有污染。经安全检测证明 ,无致病菌 ,符合国家卫生标准 ,对试验动物小白鼠无毒性和致病性。生物测定用 1× 10 6PIB/mL感染 2龄文山松毛虫幼虫 ,其死亡率平均为 85 .5 %

德昌松毛虫文山松毛虫有效积温的初步研究

在室内自然温度条件下对德昌松毛虫 (DendrolimuspunctatustechangensisTsai)和文山松毛虫 (DendrolimuspunctatuswenshanensisTsaietLiu)各虫态的发育起点温度和有效积温进行测定 。

文山松毛虫危害程度与发生范围预测预报研究

编制了文山松毛虫预测预报虫灾级数表 ,提出了文山松毛虫危害程度初步测报式 .利用马尔可夫链模型分析法进行了文山松毛虫发生面积的预测预报 。

苏氏克虫菌1号、2号防治文山松毛虫的药效对比试验

用研制出的苏氏克虫菌1号和2号生物农药, 对文山松毛虫幼虫进行了林间药效对比试验。其用药后1天、5天的效果: 苏氏克虫菌1号的虫口减退率分别为13 6 %和54 4 %; 苏氏克虫菌2号分别为7 2 %和43 2 %,差异达极显著。用药后10天和15天的效果: 苏氏克虫菌1号的虫口减退率分别为79 2 %、87 6 %, 2号分别为76 0 %和84 0 %, 二者的效果差异由极显著降为显著水平。纵观其防治文山松毛虫幼虫效果, 苏氏克虫菌1号比2号的药效来得快, 且最终效果也强于2号。

印楝素制剂防治松毛虫及松小蠹室内试验初报

应用印楝素乳油进行了松毛虫、松小蠹的室内防治效果试验。试验结果表明用 0 3%印楝素乳油 4 0 0倍“触杀 +胃毒”处理松毛虫 ,施药后 2 0天 ,防治效果达到 88 5 % ;用 0 3%印楝素乳油 10 0倍“触杀 +胃毒 +内吸”处理松小蠹 ,施药后 15天 ,防治效果达到 95 6 %。观察发现 ,施用印楝素后 ,使松毛虫 2龄幼虫产生较强的拒食作用 ,并能抑制其生理发育。

文山松毛虫越冬代幼虫空间分布型及其应用

选择10块不同立地条件的林分设样地,测定文山松毛虫越冬代幼虫的空间分布型,分别建立最适抽样数关系式,并对越冬代幼虫进行序贯抽样分析.结果表明:越冬代幼虫空间分布为聚集分布.当mo=21条/株时,最大抽样数为282株;mo=17条/株时,最大抽样数为188株.

Bt—DCPV复合微生物杀虫剂防治文山松毛虫试验

经Bt 2× 10 7、 4× 10 7、 6× 10 7、 8× 10 7、 1× 10 8孢子 /mL5种浓度对 4龄文山松毛虫的室内生测 ,筛选出松毛虫死亡率达 70 %的最佳浓度为 2 0× 10 7孢子 /mL ;以此浓度的Bt与DCPV复配试验 ,选择残存虫DCPV感染率 5 0 %的DCPV最低浓度为 6 0× 10 5PIB/mL。林间应用最适的Bt +DCPV复配浓度是 6 0× 10 7孢子 /mL +4 0× 10 5PIB/mL ,其防治效果为 82 0 8%。

赤眼蜂大面积防治不同类型区马尾松毛虫试验

研究和分析了赤眼蜂大面积防治不同发生类型区(丘陵区、山区和越冬代、第三代)马尾松毛虫的试验情况,发现利用赤眼蜂对丘陵区越冬代马尾松毛虫进行规模防治效果最佳,其次是山区越冬代马尾松毛虫。对第三代松毛虫的防治,效果不理想。

文山松毛虫质型多角体病毒的剂型研制

在采用天然饲料养虫，塑料围栏式集虫、林地集虫及林间高虫口密度接毒增殖病毒的方法，解决了病毒批量生产的基础上，为适应云南大面积防治松毛虫的需要，进一步开展了ＤＰＷＣＰＶ剂型的研制。选用８种辅助剂进行文山松毛虫幼虫生活力试验及ＤＰＷＣＰＶ病毒毒力的影响试验。筛选出辅—１、辅—５、辅—６、辅—７等辅助剂作为ＤＰＷＣＰＶ病毒剂型研制的主要辅助原料；研制出ＤＰＷＣＰＶ—Ⅰ、ＤＰＷＣＰＶ—Ⅱ及ＤＰＷＣＰＶ—Ⅲ３种剂型。经对文山松毛虫幼虫毒力比较试验，选择出ＤＰＷＣＰＶ—Ⅱ剂型为林间大面积应用推广剂型。经大面积防治松毛虫试验，防治效果达８５１％，比普通水液制剂提高９８％。通过剂型产品储藏效果测定及安全性检测表明剂型产品有效保存期为１年，不含对人畜有害的沙门氏菌、志贺氏菌及弧菌等致病菌，证明该剂型安全可靠。

基于DpwCPV的松毛虫生物防治模式研发

文山松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus wenshanensis Cytoplasmic Polyhedrosis Virus,Dpw CPV)制剂的应用为控制松毛虫危害发挥了积极作用。本研究基于DpwCPV制剂,在云南弥勒市1 000 hm^2松林分别实施了3种松毛虫生物防治模式,经过1 a的综合应用,示范区松毛虫虫口数量相比治理前下降了59.1%。结果表明,基于DpwCPV制剂的3种生物防治模式具有方便、易操作的特点,可在松毛虫生物治理中广泛推广。

基于线粒体COI基因部分序列分析4种松毛虫的亲缘关系

为了探讨4种松毛虫的亲缘关系,对马尾松毛虫、油松毛虫、赤松毛虫和落叶松毛虫的线粒体COI基因序列进行了扩增和测序。在获得的636 bp的COI序列中碱基的平均频率为:A=34.75%,T/U=34.75%,C=15.25%,G=15.25%。马尾松毛虫遗传多样性最高(核酸多样度为3.93%),落叶松毛虫最低(0.629%)。4种松毛虫间的亲缘关系由远到近依次为:落叶松毛虫×赤松毛虫(0.083)、落叶松毛虫×马尾松毛虫(0.068)、落叶松毛虫×油松毛虫(0.066)、赤松毛虫×油松毛虫(0.057)、马尾松毛虫×赤松毛虫(0.054)、马尾松毛虫×油松毛虫(0.012)。基于线粒体COI基因序列能够鉴别4种松毛虫之间的亲缘关系,可作为种上的分子分类标记应用于松毛虫属昆虫系统发育的研究。

文山松毛虫质型多角体病毒S8片段cDNA克隆与原核表达

文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)S8 片段被克隆和测序,该片段全长 1332bp,编码 390 个氨基酸组成的分子量大约为 43kDa 的蛋白 P44。根据本实验室测定出的马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV )基因组全序列,设计引物,扩增出文山松毛虫质型多角体病毒 S8 部分片段,并亚克隆出 p44 基因序列,然后将 p44 基因序列 cDNA克隆到表达载体 pET-28a 中,构建成表达质粒 pET-S8,用 IPTG 诱导大肠杆菌 BL21,经 SDS-PAGE 证明 p44 基因在大肠杆菌中获得成功表达,并对其编码蛋白序列进行了分析。

德昌松毛虫质型多角体病毒防治大柏毛虫应用研究

应用德昌松毛虫质型多角体病毒ＤｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓｐｕｎｃｔａｔｕｓｔｅｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＣｙｔｏ－ｐｌａｓｍｉｃＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ（ＤｐｔＣＰＶ）防治四川内地柏木林区大柏毛虫Ｄ．ｈｏｕｉＬａｊｏｎ－ｑｕｉｅｒｅ的试验表明，以７．５×１０９ＰＩＢ／６６６．６ｍ２以上剂量防治３龄幼虫，其综合防效达８５％以上，且具有显著的扩散流行和持续防治效果。

害虫、天敌和食料的数学模型

本文从实际问题出发,结合已有的描述群落生态的数学模型,提出了一组描述马尾松毛虫(Dendrolimus pnnctalus,walker)、条毒蛾(Lymantria dissoluta,Swinhoe)、天敌和食料之间动态关系的数学模型: w(k+1=(a_1x(k+1)/(1+a_2x(k+1)/_z(k))+a_3w(k)/(1+a_4w(k)/y(k)) x(k+1)=b_1w(k)/(1+b_2w(k)/y(k))+b_3x(k)/(1+b_4x(k)/z(k))+ y(k+1)=c_1z(k)/[1+c_sz(k)+c_3y(k)][1+c_4w(k)+(k+1)] z(k+1)=d_1z(k)/[1+d_2z(k)][1+d_3x(k)+d_4w(k)] 对于这个模型的线性化形式,详细讨论了控制松毛虫的暴发所需的条件及其生态学机制。