基于26S rDNA D1/D2序列分析酱香型白酒酒醅中酵母菌的群落结构

【目的】比较分析不同发酵阶段的酱香型白酒北大仓酒醅中酵母菌的群落结构。【方法】酒醅样本采集自黑龙江省北大仓白酒不同阶段的发酵窖池,采用平板分离技术获得大量酵母菌纯培养物;基于26S rDNA D1/D2区域的碱基序列,准确鉴定酒醅中的酵母菌;根据酵母菌的数量变化、种类组成、相对频率、多样性指数及其相似性系数,研究酱香型北大仓白酒酒醅中酵母菌的群落结构特征。【结果】北大仓白酒酒醅中酵母菌数量在酿造过程中的变化,遵循着"升高-降低-升高-降低"的规律;第1轮"升高-降低"的过程表现出急剧的"速升速降"特点,而第2轮"升高-降低"的过程则具有相对来说比较温和的"缓升缓降"特征。酒醅内的酵母菌鉴定为8属13种,总体多样性指数处于较高的水平,发酵初期酵母菌多样性指数逐渐增加,最高的多样性指数(1.89)出现在发酵第5 d的酒醅内;然后又逐渐下降,发酵至第11 d时降至最低(0.66);酒醅发酵至13 d时开始直至发酵末期,多样性指数呈现出波动性变化。北大仓白酒酒醅中酵母菌的种类组成总体来说比较接近,大多数情况下相似性系数都高于0.5,说明在白酒酿造过程中酵母菌的组成和分布处于一个相对稳定的状态。对于北大仓白酒酒醅内存在的常见酵母菌来说,Issatchenkia orientalis、Pichia kudriavzevii和Saccharomyces cerevisiae可能在酿造过程中发挥更重要的作用。【结论】北大仓等酱香型白酒的酒醅内存在着丰富的酵母菌资源,阐明酒醅内酵母菌的群落结构可以为解析酱香型白酒的发酵机理提供基础数据和理论基础。

大曲中酵母菌种群结构及多样性分析

将传统培养方法与分子生物学技术相结合,对大曲中酵母菌种群结构特征及多样性进行研究。从大曲中共获得92株酵母菌纯培养,通过5.8S-ITS RFLP指纹图谱分析后,得到12个不同的类群。从各个类群中随机选取代表菌株进行26S rDNA D1/D2区域序列分析和系统发育分析,大曲中酵母菌主要分布在Saccharomyces、Pichia、Zygosaccharomyces、Debaryomyces、Can-dida、Endomyces、Rhodotorula、HanseniasporaI、ssatchenkia9个已知酵母菌属。传统培养方法与分子生物学技术相结合能较好地从分子水平揭示大曲中酵母菌的种群结构及多样性。

一种酵母快速批量分子鉴定方法

26S rDNA D1/D2区域序列同源性分析是一种常用的酵母分子鉴定方法。D1/D2区域序列的扩增需要酵母染色体DNA作为模板,目前常用的酵母染色体DNA提取方法繁琐耗时且难以进行批量操作,限制了酵母分子鉴定的规模化。研究中建立了一种快速高效的批量酵母染色体DNA提取方法,整个提取过程仅耗时20min,从而使得酵母大规模快速分子鉴定成为可能。用该方法制备的染色体DNA不需要任何后续处理即可作为模板用于扩增酵母的26S rDNA D1/D2区域序列,获得了良好的扩增结果以及扩增产物的测序结果。

两种分子标识在酵母分子鉴定中的比较

rDNA序列同源性分析是一种通用的酵母分子鉴定方法,26S rDNA D1/D2区域和rDNA内部转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)是rDNA序列同源性分析中最为常用的两种分子标识。同时使用这两种分子标识对20株分离自水果表面的酵母菌株进行分子鉴定,结果显示19株酵母分离物的鉴定结果相一致,两种分子标识序列在认定酵母种内和种间关系时都拥有足够的差异,能将大部分酵母菌株直接鉴定到种一级水平。

拉萨扎叶巴沟瑞香狼毒根际土壤细菌的分离与鉴定

开展瑞香狼毒(Stellera chamaejasma)根际土壤微生物的研究,能够为遏制草原上瑞香狼毒的肆虐提供参考资料。釆用稀释倒平板法从瑞香狼毒根际土壤中分离、纯化细菌;采用经典分类和26S r DNA D1/D2区域序列分析相结合的技术,对纯化的菌株进行鉴定。结果显示,分离自拉萨河谷(扎叶巴沟)的瑞香狼毒土壤中的细菌55株,归属为鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas melonis)、Pseudomonas sp.、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、日本假单胞菌(Pseudomonas japonica)、芽孢杆菌(Bacillus sp.),其中又以鞘氨醇单胞菌为优势种;扎叶巴沟瑞香狼毒根际土壤细菌的种群结构间存在一定差异。其中鞘氨醇单胞菌对瑞香狼毒的抑制作用值得进一步研究。

新疆传统馕发酵面团中酵母菌的多样性分析

采用平板分离与纯化、26S rDNA D1/D2区域序列测定和系统发育分析方法,对新疆乌鲁木齐、阿勒泰、伊犁、喀什、阿克苏及和田6个地区民间传统馕面团发酵酵母菌多样性进行了研究。从中分离得到227株酵母菌,它们隶属于10个属14个种:Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces servazzii、Pichia fermentans、Pichia membranifacies、Pichia kudriavzevii、Pichia anomala、Candida humilis、Hanseniaspora uvarum、Torulaspora delbrueckii、Wickerhamomyces anomalus、Cladosporium ramotenellum、Cryptococcus albidus、Kodamaea ohmeri、Issatchenkia orientalis;其中Saccharomyces cerevisiae为优势种,占总分离株的55.51%(126株),在系统发育树上形成2个大分枝4个小分枝,A1-1分枝由115株菌株构成,是馕面团发酵的优势品系菌群。研究结果阐明了新疆民间传统馕面团中酵母菌的多样性,为开发利用传统馕面团的酵母菌资源提供了理论依据。

拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬酵母菌的分离与鉴定

蔡公堂乡为拉萨市主要果蔬生产基地,开展该地区大棚果蔬酵母菌多样性的研究,能够为青藏高原酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。采用研磨和稀释相结合的方法,从蔡公堂大棚果蔬中分离到140株酵母菌,结合经典分类法及26S rDNA D1/D2区域序列分析,对获得的酵母菌菌株进行分类。结果显示:供试酵母菌最终被归为13个属27个种,其中,Ustilentyloma graminis、Rhodotorula babjevae以及Rhodotorula diobovata这3个种是拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬酵母菌优势种;2个属(3个种)的酵母菌为子囊菌纲,相对丰度为2.14%,11个属(24个种)的酵母菌为担子菌纲酵母菌,相对丰度高达97.86%,供试果蔬分离的酵母菌菌株绝大多数为担子菌纲酵母菌;酵母菌种数和属数最多的为红椒,青椒中分离到的酵母菌种类则最少;酵母菌总丰度数据显示,圣女果中酵母菌数量最多;多样性指数表明,玉米、苦瓜、红椒和草莓酵母菌较为丰富和多样。总体而言,拉萨市大棚果蔬酵母菌资源较为丰富,另外不同品种果蔬间酵母菌种群分布差异较大。

新疆地方特色馕面团优良酵母菌的筛选

[目的]筛选馕面团优质酵母菌。[方法]从新疆乌鲁木齐、阿尔泰,喀什3个样品点采集样品,采用PDA和YEPD培养基分离纯化了馕面团发酵酵母菌,并进行了26S r DNA D1/D2区域序列测定和系统发育分析。[结果]试验得出,29株菌相互之间的26S r DNA D1/D2基因序列同源性比例为99%。在这29株菌26S r DNA D1/D2区序列的基础上采用邻近法构建了系统发育进化树,从中选出了11株代表菌,它们被认为是该地区特殊而独特的酵母品系,完成了初筛。进一步测定11株菌的发酵活力、发酵前后的p H与面团醒发时间,完成了复筛并获得了6株菌。接着对6株酵母菌进行了感官测试,最后获得了一株优质酵母菌K24(KM454437),馕感官评分为97.1分。[结论]研究筛选出来的一株馕面团酵母菌发酵效率高,为新疆馕加工产业提供技术依据。