Cyclin D1与claudin7联合检测在肾上皮性肿瘤鉴别诊断中的价值

目的探讨Cyclin D1和claudin7在常见肾上皮性肿瘤中的表达及鉴别诊断中的价值。方法采用组织芯片技术联合免疫组化染色检测Cyclin D1和claudin7蛋白在309例常见肾上皮性肿瘤及20例正常肾组织中的表达,比较分析两种抗体对肾肿瘤诊断及鉴别诊断的价值。结果 Cyclin D1在肾嗜酸细胞瘤(renal oncocytoma,RO)、嫌色细胞癌(chromophobe renal cell carcinoma,ChRCC)、透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,CCRCC)、乳头状肾癌(papillary renal cell carcinoma,PRCC)、Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌和透明细胞管状乳头状肾癌(clear cell tubulopapillary renal cell carcinoma,CCTPRCC)中的阳性率分别为86.2%(50/58)、8.2%(4/49)、70.0%(98/140)、8.8%(3/34)、42.9%(6/14)和71.4%(10/14)。RO分别与ChRCC、PRCC相比(χ~2=64.72、52.56,P<0.000 1),CCRCC与ChRCC(χ~2=55.87,P<0.000 1),PRCC与Xp11.2易位性肾细胞癌(χ~2=4.28,P=0.039),CCTPRCC与ChRCC(χ~2=21.69,P<0.000 1)各组间比较,差异均具有统计学意义。claudin7在RO、ChRCC、CCRCC、PRCC、Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌和CCTPRCC中的阳性率分别为20.7%(12/58)、87.8%(43/49)、8.6%(12/140)、50%(17/34)、14.3%(2/14)、57.1%(8/14)。RO与ChRCC(χ~2=47.82,P<0.000 1)、CCRCC与CCTPRCC(χ~2=26.57,P<0.000 1)、PRCC与Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌(χ~2=5.29,P<0.05),各组间相比差异均有统计学意义。Cyclin D1阳性/claudin7阴性对于RO的敏感性和特异性分别为69.0%和95.9%,而Cyclin D1阴性/claudin7阳性对ChRCC诊断的敏感性和特异性分别为83.7%和96.6%。Cyclin D1阳性/claudin7阴性对CCRCC的敏感性和特异性分别为65.7%和71.4%,而Cyclin D1阳性/claudin7阳性对CCTPRCC的敏感性和特异性分别为42.9%和95.0%。结论 Cyclin D1和claudin7在不同组织类型肾肿瘤中的表达有差异,联合检测对RO与ChRCC、CCRCC与ChRCC、PRCC与Xp11.2易位性肾细胞癌的鉴别诊断具有重要作用。

子宫颈上皮内瘤变进展过程中Claudin-1、3、4、7的表达及意义

目的探讨紧密连接蛋白Claudin-1、3、4、7在子宫颈正常组织、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)(包括CIN1、2、3)及浸润性鳞状细胞癌组织中的表达变化及意义。方法应用免疫组化SP法检测9例正常子宫颈组织、12例CIN1、15例CIN2、28例CIN3和22例浸润性鳞状细胞癌组织中Claudin-1、3、4、7的表达。结果从正常子宫颈组织→CIN1/2→CIN3→浸润性鳞状细胞癌,Claudin-1、3、4、7的表达逐渐增加。CIN3及浸润性鳞状细胞癌组织与正常组织及CIN1/2比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CIN3与浸润性鳞状细胞癌比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Claudin-1与Claudin-7、Claudin-3与Claudin-4的表达强度随疾病的进展呈明显正相关。结论 Claudin-1、3、4、7可能与子宫颈鳞状上皮的恶性转化相关,联合检测Claudin-1、3、4、7的表达可作为CIN和子宫颈鳞状细胞癌早期诊断的辅助指标。

基于AQP3/Claudin-1研究痛泻要方治疗腹泻型肠胃激综合征模型大鼠的机制

目的通过构建腹泻型肠易激综合征(irritable bowel with diarrhea,IBS-D)大鼠模型,观察经痛泻要方治疗后肥大细胞(mast cell,MC)计数、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度变化,水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)和Claudin-1 mRNA及蛋白的表达水平,并探讨痛泻要方治疗IBS-D的作用机制。方法采用改良慢性应激结合束缚的方法建立IBS-D模型大鼠。甲苯胺蓝染色法进行MC染色计数,ELISA法检测TNF-α含量,RT-PCR及SABC免疫组化法检测结肠组织AQP3和Claudin-1mRNA及蛋白的表达水平。结果(1)与正常组比较,模型组MC计数增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,匹维溴铵组、痛泻要方中、高剂量组MC计数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与正常组比较,模型组TNF-α含量明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,匹维溴铵组、痛泻要方中、高剂量组TNF-α含量均下降,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与正常组比较,模型组AQP3和Claudin-1mRNA及蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,痛泻要方中、高剂量组及匹维溴铵组能上调大鼠结肠AQP3及Claudin-1mRNA及蛋白的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论痛泻要方可能通过降低MC计数,降低TNF-α含量,上调AQP3和Claudin-1的表达水平,促进结肠对肠腔内水分的重吸收,修复肠道黏膜屏障,对IBS-D发挥作用。

人结直肠癌组织Claudin-1、Claudin-7蛋白的表达与患者预后的关系

目的探讨人结直肠癌组织Claudin-1、Claudin-7蛋白的表达与患者预后的关系。方法收集88例结直肠癌患者的术后标本及临床资料。运用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织与癌旁组织的Claudin-1、Claudin-7蛋白表达水平,分析其表达与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果免疫组化结果显示,Claudin-1、Claudin-7蛋白阳性黄褐色颗粒主要分布在细胞膜或细胞质中。Claudin-1蛋白在癌旁组织中呈低表达22.72%(20/88),而在结直肠癌组织中呈高表率达80.68%(71/88);Claudin-7蛋白在癌旁组织中呈高表达90.91%(80/88),而在结直肠癌组织中低表达率达45.45%(40/88);差异均有统计学意义(均P<0.05)。Claudin-1及Claudin-7蛋白表达与结直肠癌患者的浸润深度、分化程度、淋巴转移、TNM分期均有关(均P<0.05)。随访显示Claudin-1蛋白阳性表达组与Claudin-1蛋白阴性表达组5年总生存率分别为27.91%和49.86%,Claudin-7蛋白阳性表达组与Claudin-7蛋白阴性表达组5年总生存率分别为48.70%和27.90%;两组差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Cox多因素分析显示,TNM分期晚、浸润程度深、淋巴结转移和Claudin-1蛋白阳性表达及Claudin-7蛋白阴性表达均是结直肠癌患者术后总生存期的独立高危因素(均P<0.05)。结论Claudin-1高表达及Claudin-7低表达可以促进结直肠癌的发生发展,与结直肠癌的侵袭和转移有关,并会影响患者预后,对判断手术后结直肠癌患者预后具有较好的参考价值。

牦牛TBC1D7基因克隆、生物信息学及表达分析

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉及脂肪组织的表达水平。结果表明,牦牛TBC1D7基因的CDS区全长为882 bp,共编码293个氨基酸;系统进化树分析结果表明,西藏牦牛与野牦牛的亲缘关系最近,与兔的最远;生物信息学分析结果表明,牦牛TBC1D7蛋白不存在信号肽和跨膜结构,属于亲水性蛋白,主要存在细胞核中,且该蛋白具有24个潜在的磷酸化位点,蛋白的高级结构由α-螺旋(65.53%)、延伸连(3.75%)、β-转角(3.75%)和无规则卷曲(29.96%)构成。qPCR检测结果显示,TBC1D7基因在西藏牦牛脾脏组织中的表达最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层中的表达及临床意义分析

目的分析S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层中的表达及临床意义。方法选择2021年1月~2023年9月在南阳市中心医院利用胸腹主动脉CTA确诊主动脉夹层患者60例作为研究组,另选取同时期50例健康体检者作为对照组,以数字减影血管造影检查结果为金标准,将研究组患者按照病情严重程度分为轻度组(n=21)、中度组(n=19)、重度组(n=20)。比较2组人群S1PR2、ApoH、Let-7d表达、不同程度下各组人群S1PR2、ApoH、Let-7d表达、各种检测方式与三者联合检测检测对比、ROC曲线分析S1PR2、ApoH、Let-7d及三者联合诊断价值、S1PR2、ApoH、Let-7d水平与主动脉夹层疾病中的相关性。结果与对照组相比,研究组人群S1PR2、Let-7d表达较低、ApoH表达较高(P<0.05);重度组人群S1PR2、Let-7d表达均低于轻度、中度人群,重度组人群ApoH表达高于轻度、中度人群;本次研究中使用S1PR2阳性为5例、ApoH阳性为6例、Let-7d阳性为4例均低于联合检测阳性例数;三者联合AUC值(0.743)均高于S1PR2(0.552)、ApoH(0.343)、Let-7d(0.493);且三项联合灵敏度、特异度、准确度较高(P<0.05);以S1PR2、ApoH、Let-7d与主动脉夹层疾病中的相关性分析,S1PR2与主动脉夹层疾病的相关性呈现出负相关(r=-5.137,P=0.027)、ApoH与主动脉夹层疾病的相关性呈现出正相关(r=4.211,P=0.044)、Let-7d与主动脉夹层疾病的相关性呈现出负相关(r=-6.291,P=0.016)。结论S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层疾病中的表达水平存在一定的相关性,将这三种指标结合起来,能够指导主动脉夹层疾病治疗及预后评估判断提供一定的理论基础。

紧密连接蛋白Claudin-1、7在日光性角化病和皮肤鳞状细胞癌中的表达

目的:检测紧密连接蛋白Claudin-1、7在日光性角化病(AK)和皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达水平。方法:收集2014年11月至2016年11月我院病理科AK和SCC组织标本各30例,选取癌旁正常皮肤组织30例作为对照组,采用免疫组化方法检测癌旁正常表皮、AK和SCC组织中Claudin-1、7蛋白的表达。结果:对照组、AK和SCC组织中Claudin-1蛋白细胞阳性率分别为100%,53.33%和13.33%,三组两两比较,差异均有统计学意义(P s<0.05)。Claudin-7在癌旁正常表皮、AK和SCC组织中均呈阴性表达。结论:Claudin-1蛋白在癌旁正常表皮、AK和SCC组织中表达水平逐渐下降,Claudin-1蛋白表达下调可能与表皮肿瘤的恶性转化有关。

肝癌组织claudin-1和claudin-7及E-cadherin表达及其生物学意义

目的观察肝癌中claudin-1、claudin-7和上皮黏附素(E-cadherin)的表达特征,比较肝癌不同临床特征中clau-din-1、claudin-7和E-cadherin的表达差别,探讨其相关性。方法选取98例肝癌术后的患者作为研究对象,选取98例正常肝组织作为对照组,应用免疫组化方法,检测两组中claudin-1、claudin-7和E-cadherin的表达,观察其在不同特征中的表达差别。结果肝癌中claudin-1、claudin-7和E-cadherin表达的阳性率明显低于对照组(t=35.72,P<0.0001;t=43.78,P<0.0001;t=29.52,P<0.05),claudin-1、claudin-7和E-cadherin的表达与肝癌的临床分期、AFP表达、包膜侵犯、转移和生存期密切相关(P<0.05)。相关分析显示claudin-1、claudin-7和E-cadherin的表达具有正相关性(r=0.40、0.41、0.43,P<0.05)。结论肝癌中claudin-1、claudin-7和E-cadherin具有协同作用,三者的低表达促进肝癌的发生发展。

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。

黄芪总黄酮对特发性肺纤维化miRNA-21、let-7 d及TGF-β/smad信号干预作用

目的：研究黄芪总黄酮对BLM诱导的肺纤维化模型miRNA-21、let-7 d表达水平和TGF-β1/smad信号干预作用。方法：C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪总黄酮组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素（10 mg/kg）,假手术组予等量生理盐水,造模后治疗组予黄芪总黄酮（43 mg/kg）灌胃,假手术组和模型组与等量生理盐水灌胃。第28天取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,realtime-PCR分析miRNA-21、let-7 d表达变化,Western-Bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果：BLM诱导肺纤维化miRNA-21明显上调,而let-7 d下调,在此过程中信号蛋白smad7表达增强mad3磷酸化水平减弱,EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少,黄芪总黄酮对上述改变具有逆转作用,但对let-7 d表达无影响。结论：黄芪总黄酮可通过抑制miRNA-21,增加smad7表达,使TGF-β1/smad激活能力下降,抑制肺纤维化EMT作用。

分子佐剂C3d上调Raji细胞协同刺激分子B7-1和B7-2的表达(简报)

我们在以往研究中，引入选择性增强体液免疫效应的新型分子佐剂C3d，成功构建了重组避孕疫苗hCGβ-C3d3，通过免疫Th2型优势的BALB／c小鼠和Th1型优势的C57BL／6小鼠．显示分子佐剂C3d在不同品系小鼠均使免疫效应从Th1型细胞免疫向Th2型体液免疫偏倚。

上皮性卵巢癌中Let-7a及其靶基因HMGA2、Cyclin D1的表达

目的:探讨上皮性卵巢癌患者血浆和组织中let-7a的表达水平及意义。方法:采集48例上皮性卵巢癌患者的血浆和癌组织、同时期与卵巢癌患者年龄性别匹配的23例健康体检者的血浆和26例因子宫等良性疾病切除的正常卵巢组织,采用qRT-PCR法检测血浆及组织中let-7a和高迁移率蛋白A2(HMGA2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达,采用免疫组化法检测组织中HMGA2和Cyclin D1蛋白的表达。结果:卵巢癌患者血浆及组织中let-7a的表达均低于正常(P<0.05),血浆及组织中let-7a的表达无相关性(r=0.163,P=0.270);以血浆let-7a水平诊断卵巢癌的ROC曲线下面积为0.826(95%CI为0.728~0.923)。HMGA2、Cyclin D1 mRNA及蛋白在癌组织中的表达高于正常(P<0.05)。组织中let-7a和HMGA2、Cyclin D1 mRNA及蛋白的表达与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。卵巢癌组织中let-7a与HMGA2、Cyclin D1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.729、-0.735,P<0.001)。结论:血浆let-7a表达水平对上皮性卵巢癌有一定的诊断价值;Let-7a及其靶基因HMGA2和Cyclin D1共同参与了上皮性卵巢癌的发生发展。

涎腺腺样囊性癌中Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130表达及意义

目的探讨Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及与涎腺腺样囊性癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化SP法检测46例涎腺腺样囊性癌和30例正常涎腺组织中Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白的表达。结果 Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130在涎腺腺样囊性癌中的阳性率分别为71.74%、67.39%、63.04%;Cyclin D1和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达与病理类型有关(P<0.05),MMP-7在涎腺腺样囊性癌中的表达与病理类型无关(P>0.05);Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌复发组中的阳性率与无复发组相比,差异有显著性(P<0.05);Cyclin D1与PRB2/p130在涎腺腺样囊性癌中的表达呈负相关,与MMP-7表达呈正相关。结论 Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白的异常表达在涎腺腺样囊性癌发生、发展和复发中起重要作用,联合检测多个指标可能对患者预后的判断有指导意义。

CD1_D基因与B7-1基因共转染胰腺癌细胞及其抗癌作用的实验研究

目的观察共转染小鼠B7-1和CD1D基因对小鼠胰腺癌细胞的免疫应答。方法将表达B7-1和CD1D基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,然后转染入胰腺癌细胞。用PCR和Western方法鉴定细胞表达;用B7-1和CD1D阳性的细胞在体内诱导抗肿瘤免疫反应。结果B7-1和CD1D阳性的细胞在同基因小鼠体内能诱导抗肿瘤免疫反应并抑制肿瘤生长。结论B7-1基因和CD1D基因共转染肿瘤细胞,能抑制肿瘤生长,可能为肿瘤的基因治疗开辟一条新途径。

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P<0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P<0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。

重组质粒BFP-cyclin D1的构建及表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响

目的构建含人cyclin D1基因全长编码区的蓝色真核荧光表达载体BFP-cyclin D1,并观察cyclin D1的表达对MCF-7增殖和迁移能力的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞总RNA为模板,经PCR扩增和酶切后与pEBFP-N1质粒连接,得到重组质粒BFP-cyclin D1。转染到人乳腺癌MCF-7细胞后分为3组:实验组转染BFP-cyclin D1,阴性对照组转染pEBFP-N1;空白对照组为MCF-7,以荧光定量PCR检测基因表达;MTT实验检测细胞生长速度;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功构建了BFP-cyclin D1,并在人乳腺癌MCF-7细胞中呈高表达,荧光定量PCR检测示实验组cyclin D1在转染后12h开始增高,48h达到高峰并持续高表达,与激光共聚焦显微镜观察实验组蓝色荧光表达量的趋势一致;MTT实验证实实验组细胞增殖速度(48、72、96h)显著高于对照组(P<0.01);细胞迁移实验表明实验组细胞迁移能力显著高于对照组细胞(P<0.01)。结论 cyclin D1的高表达促进了人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移,这可能与其缩短细胞周期、促进DNA合成和复制功能有关。

VDUP1对乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移的影响

目的:探讨过表达/沉默维生素D3上调蛋白1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1)基因对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。方法:通过基因过表达/干扰技术上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;实时荧光定量PCR检测细胞中VDUP1的mRNA表达水平;CCK-8法、Brd U实验和Transwell细胞迁移实验分别用于检测细胞增殖和迁移能力;Western blot检测细胞中Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β的蛋白水平。结果:基因过表达/干扰技术可上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;过表达VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力显著降低(P<0.05),而沉默VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力则显著升高(P<0.05)。此外,过表达VDUP1基因可下调p-Akt和p-GSK3β的蛋白水平(P<0.05),而沉默VDUP1基因的结果则相反。结论:改变VDUP1基因表达水平可影响MCF-7细胞的增殖和迁移能力,其作用机制可能与Akt/GSK3β信号通路有关。

基于PKD1/HDAC7轴研究丹参酚酸B对大鼠缺血心肌组织的保护作用

目的分析丹参酚酸B(salvianolic acid B,SAB)是否通过调控蛋白激酶D1(protein kinase D1,PKD1)/Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶7(HDAC7)表达而保护大鼠缺血心肌组织并阐述其作用机制。方法♂Wistar大鼠40只,随机分为假手术(Sham),心梗模型(MI),SAB和CID755673阻断剂(CID)组。结扎左冠状动脉前降支复制MI模型,Sham组不进行结扎操作,其他手术程序和MI组保持一致。14 d实验周期中,大鼠均腹腔注射给药,SAB组:50 mg^-1·kg^-1·d^-1,CID组:50 mg^-1·kg^-1·d^-1 SAB+40μg^-1·kg^-1·d^-1 CID,Sham和MI组:等量生理盐水。应用HE、Masson和TUNEL染色法分析心肌组织的受损情况,免疫荧光、免疫组化和免疫印迹等方法分析心肌组织中PKD1和HDAC7的表达。结果在SAB用药后,MI后的心肌组织受损明显减轻,胶原纤维占比下降,凋亡心肌细胞数量减少,伴随着PKD1和HDAC7的表达上调;注射CID可明显抑制SAB的作用。结论SAB可能通过调控PKD1/HDAC7轴而保护缺血受损的心肌组织。

7,8-二甲基-10-(D-1-核糖醇基)-异咯嗪半合成中间体气相色谱分析

提出以三氟乙酸酐作为衍生化试剂,将核黄素半合成中问体N-(D)-脱氧核糖醇基-3,4-二甲苯胺(Ⅰ)及4,5-二甲基-N-(D)-脱氧核糖醇基-2-偶氮苯基苯胺(Ⅱ)转化为低沸点易汽化物质,采用以苯乙酮作内标,测定中间体(Ⅰ)和(Ⅱ)纯度的气相色谱法.方法具有分析速度快、准确度高、重现性好等优点,方法回收率(Ⅰ)为96.9%～101.2%、(Ⅱ)为99.4%～100.4%,相对标准偏差(Ⅰ)在4.4%、(Ⅱ)在2.6%以内.