大豆GmCLC-d1/d2基因参与盐胁迫适应过程的生理功能

[目的]本文旨在研究大豆GmCLC-d1/d2基因及其启动子对盐胁迫的响应,并探索其参与植物盐胁迫适应过程的生理机制。[方法]从大豆品种‘Lee68’中克隆了GmCLC-d1/d2基因,分别构建其植株RNA干扰(RNAi)和过表达载体,通过发根农杆菌介导转化获得RNAi和过表达大豆发根组合植株,利用根癌农杆菌介导转化获得过表达拟南芥,分析和比较盐胁迫下植株的形态和生理指标变化。[结果]与转空载大豆发根组合植株相比,盐处理下RNAi-GmCLC-d1/d2植株鲜重、叶片相对含水量(RWC)和叶绿素含量,根和叶过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性明显下降,根、叶相对电解质渗漏率(REL)和丙二醛(MDA)含量以及根、茎、叶Cl^(-)含量明显上升,NO_(3)^(-)含量显著下降,导致根、茎和叶,特别是地上部Cl^(-)/NO_(3)^(-)值显著上升;而发根过表达大豆植株OE-GmCLC-d1/d2的上述指标表现相反,耐盐性有所增强。盐胁迫下过表达GmCLC-d1/d2拟南芥种子发芽率、幼苗根长以及3周龄植株鲜重、叶片RWC及叶绿素含量等均明显优于野生型,地上部REL和MDA含量显著降低,CAT、POD和SOD活性明显增强;根和地上部Cl^(-)含量明显降低,NO_(3)^(-)含量明显上升,导致根和地上部,特别是后者Cl^(-)/NO_(3)^(-)值显著下降。[结论]GmCLC-d1/d2可通过增强盐胁迫下NO_(3)^(-)在发根过表达大豆组合植株或过表达拟南芥化植株根部的吸收以及向地上部的转运和分配,并在一定程度上抑制Cl^(-)的吸收和转运,以维持植株特别是地上部较低的Cl^(-)/NO_(3)^(-)值,从而增强耐盐性,其中GmCLC-d2基因的效应更明显。

基于28S rDNA D1-D2基因片段与16S rDNA部分序列联合分析的叶肢介系统发育研究

叶肢介(Conchostraca)的系统发育问题一直是甲壳动物研究中颇具争议的一个课题。本研究测定了我国2种叶肢介(Eocyzicus mongolianus,Eocyzicus orientalis)的28S rDNA D1-D2区基因序列和16S rDNA E-G区序列,并与GenBank中的20种叶肢介序列一起进行系统发育分析。基于28S rDNA D1-D2区和16S rDNA E-G区联合序列,采用最大简约法、最大似然法和贝叶斯演绎法构建的叶肢介12属系统发育树显示,叶肢介可分为三个支系:圆蚌虫科、刺尾部和光尾部;叶肢介是一个并系类群;光尾部位于双甲目的基部;原隶属于刺尾部的圆蚌虫科与枝角目互为姊妹群,两者组成枝角形类(cladoceramorpha)。我们首次采用28S rDNA和16S rDNA得到与Richter等(2007)和Olesen(2009)基于形态分析相一致的谱系关系。这一结果打破了传统的系统分类体系,意味着原来定义"叶肢介目"的形态特征(包裹躯体的双瓣壳、附肢携卵、具1—2对执握肢)并非"叶肢介"特有,而应解释为双甲类的共同衍征,尽管枝角类的这些性状退化或丢失或有所变异;而复眼整体愈合、尾爪强壮并具两排尾刺等特征(枝角形类+刺尾部)应该是单次起源的;直接发育(缺无节幼虫阶段)、周期性孤雌生殖等特征(枝角形类)也应是单次演化的结果。

光系统Ⅱ反应中心D_1-D_2-Cyt b_(559)的光破坏作用研究

从高等植物叶绿体中分离得到的光系统Ⅱ(PSⅡ)反应中心D_1-D_2-Cytb(559)复合物很不稳定,极易受到光照的破坏。光照导致D_1-D_2-Cytb_(559)在红区(Qy带)的吸收光谱发生很大的变化,在最初光照45秒时间内,吸光度值升高,继续光照则吸光度值下降,而且680nm处的下降速度最大,吸收峰发生兰移,光照也导致荧光强度增大,发射峰兰移。所有这些结果表明,光破坏至少存在两个不同的过程,而且主要受到破坏的是原初电子供体P680。

基于26S rDNAD1/D2区序列分析的15株白地霉分子分类学研究

采用26S rRNA基因D1/D2区系统发育分析的方法对CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心)保藏的15株白地霉(Geotrichum candidum)菌种进行复核鉴定。系统发育分析结果表明15株白地霉属于地霉属的成员,且形成两个系统发育分支,系统发育上最接近Galactomyces geotrichum NRRLY-17569T,与其同源性为96.3%～98.3%。15株白地霉26S rRNA基因D1/D2区序列显著不同于地霉属的模式种及其它种,可能代表地霉属的两个新种,但这一结论尚需进一步的实验去证实。

温度对PSⅡCP4 7/D_1 /D_2 /Cytb559复合物荧光光谱特性的影响

采用激励光源为 5 14 .5nm的分幅扫描单光子计数荧光光谱装置对经 2 0℃、4 2℃和 4 8℃不同温度处理后的反应中心复合物CP4 7/D1/D2 /Cytb5 5 9的荧光光谱特性进行了研究 .经解析 ,获得不同温度处理后 ,CP4 7/D1/D2 /Cytb5 5 9复合物最大峰值未发生变化 ,均在 6 82nm ,说明Chla6 70的能量都由Chla6 82接收 ,但损耗愈来愈小 ,在 4 8℃时 ,损耗程度最小 ,而其荧光百分比未发生多大变化 .振动副带～ 70 0nm和～ 74 0nm的中心波长都发生蓝移 ,在不同温度下分别为 :2 0℃ 70 3nm ,74 9nm ;4 2℃ 6 97nm ,74 4nm ;4 8℃ 6 94nm ,74 0nm .因此可以推测温度的升高 ,影响了CP4 7/D1/D2 /Cytb5 5 9色素蛋白的二级结构以及色素分子的空间位置 ,使最大峰值处的荧光强度逐渐降低 ,振动副带逐渐蓝移 .4 2℃的温度已造成影响 ,4 8℃影响较大 .

光系统Ⅱ反应中心D1/D2/Cytb559复合物中去镁叶绿素a的光照破坏

Photodamage of some pigments in the isolated photosystem Ⅱ (PS Ⅱ) reaction center D1/D2/Cyt b559 complex from spinach has been investigated by means of high performance liquid chromatography. The light induced damage of pheophytin a (pheo a) in the complex was observed for the first time. The content of pheo a decreased about 47% by illumination, suggesting only one of the two pheo a molecules in the PSⅡ reaction center complex was damaged. No damage of β carotene was found.

光系统Ⅱ反应中心D1/D2/Cytb559复合物中存在一个与光化学活性无关的去镁叶绿素a

Photodamage of pheophytin a (pheo a) in the isolated photosystem Ⅱ (PSⅡ) reaction center D1/D2/Cyt b559 complex from spinach has been investigated by high performance liquid chromatographic method in detail. The results showed that: (1) There is one pheo a molecule which is not associated with the primary photochemistry in the PSⅡ reaction center complex. It may be considered that there are two different electron transfer branches in the PSⅡ reaction center just as in the purple bacterium photosynthetic reaction center. (2) The damaged pheo a may be attributed to the one bonding to the D2 protein comparing the D2 subunit in the PSⅡ reaction center with M subunit in the purple bacterium photosynthetic reaction center. (3) A possible arrangement model of redox cofactors in the PSⅡ reaction center was proposed based on our experiment.

质体醌重组的D1/D2/Cytb559复合物的荧光衰减动力学和光破坏作用

光系统Ⅱ反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５５９ 在分离纯化过程中失去了电子受体ＱＡ 和ＱＢ，人工合成的质体醌可以与Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５５９ 复合物发生重组。癸基质体醌（ＤＰＱ）与Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５９９ 复合物的重组导致该复合物的荧光强度下降及发射光谱蓝移，同时两个与光化学活性相关的长寿命（２４ ｎｓ和７３ ｎｓ）荧光衰减组分占整个荧光的百分数下降，这些结果表明ＤＰＱ作为Ｐｈｅｏ－ 的电子受体，限制了Ｐ６８０＋ ·Ｐｈｅｏ－ 的电荷重组。ＤＰＱ 的加入对Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５５９复合物中Ｃｈｌａ 分子的光破坏敏感性影响不大，但β－胡萝卜素在加入ＤＰＱ 之后可以被光照破坏，这个过程可能与β－胡萝卜素的生理功能相关。

CyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达

目的 探讨细胞周期素 (cyclin )D1/D2 /D3在大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤组织中的表达。方法 将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞 (细胞数为 3× 10 5个 ) ,借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区 ,解剖标本 ,行组织病理学检查 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化定性监测。随后检测肿瘤组织中cyclinD1/D2 /D3蛋白表达。结果 cyclinD1/D2 /D3均呈阳性表达。cyclinD1/D3主要在细胞核表达 ;cyclinD2则主要在胞浆表达 ,部分细胞核呈阳性 ,不同存活期荷瘤鼠其瘤组织中cyclinD1/D2 /D3表达量不同。结论 cyclinD1/D2 /D3的过分表达 ,对大鼠脑胶质瘤细胞增殖的失控起着一定的调节作用。荷瘤鼠生存期与cyclinD族的表达量呈负相关关系。

CyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达(英文)

目的探讨cyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达。方法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个)借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区,解剖标本,行组织病理学检查及GFAP、cyclinD1/D2/D3免疫组化检测。结果cyclinD1/D2/D3均呈阳性表达。cyclinD1/D3主要在细胞胞核表达,cyclinD2主要在胞浆表达,部分在胞核表达,不同存活期荷瘤鼠瘤组织中cyclinD1/D2/D3表达量不同。结论cyclinD1/D2/D3过分表达参与调节大鼠脑胶质瘤增殖。荷瘤鼠生存期与cyclinD家族蛋白的表达呈负相关关系。

Light-induced Damage of Photosystem ⅡPrimary Electron Donor P680: a High Performance Liquid Chromatographic Analysis of Pigment Content in D1/D2 /Cytochrome b559 Complex Under Photoinhibitory Conditions

ByHPLCanalyticalmethod ,thechangeofPSⅡRC’spigmentcontentintheprocessofphoto damageunderstrongilluminationfromspinach (SpinaciaoleraceaMill.)wascomparativelystudied .Theex perimentalresultsshowthat :(1)Inauthors’analyticalconditions ,(ofwhich ,[Chl]=150 μg/mL ,andthe illuminationstrengthwasputat 2 .3× 10 6 mJ·m- 2 ·s- 1) ,4 5minofilluminationcouldcausealmostthewhole lossofA6 80inthefourthderivativeabsorptionspectra ,whileA6 70decreasedtoaboutonehalfofitsoriginal intensity ;theabsorptionmaximuminred ,concurrently ,wasshiftedfrom 6 76nmto 6 71nm ,representingthe lossofmorethan 90 %ofthephotochemicalactivitiesofthePSⅡRC .(2 )Duringtheperiodofcontinuousil lumination ,theChlconcentrationdecreasedina 3_periodstyle ,whichmeantthatthefirst [Chl]decreasedto the 2 / 3ofitsoriginalamountfrom 2 0minto 4 0minafterilluminationhadstarted ,thenbecamestabilizedup toabout 6 0minofillumination ,thereafteraseconddecreaseof [Chl]inanotherabout2 0minuntilitreached about 30 %oftheoriginallevelandremainedunchangedfromabout 80minon .Theoriginalpigmentcompo nentsofD1/D2 /Cytb559wasapproximatelyas 6Chla∶2Pheo∶2 β_Carwhichareinsupportofauthors’pre viousproposalabouttheminimumChl/Pheoratioof 4∶2inPSⅡRC’spigmentcontents .(3)Afterabout 4 0 minofillumination ,anewlyappearedelutionpeakwasfoundbetweenthePheoandβ_CarpeaksinHPLCpro file ,attheretentiontimeof7.2min ,alittlelaterthanthat (6 .9min)ofPheomolecules ,thenewlyappeared elutionpeakwassupposedtobeakindofaccumulatedandstableproductofthePSⅡRC’sphotodamagepro cessandverymuchpossiblethePheo_likemolecules .

西南菌种站20株酵母菌种基于26S rDNA D_1/D_2区序列分析研究

利用26SrDNA基因D1/D2区序列分析法对西南菌种站保藏的20株酵母进行复核鉴定,通过序列比对分析及构建系统发育树,结果显示20株菌株与相关标准菌株的序列相似性在99%以上,表明26SrDNA基因D1/D2区序列分析方法能够应用于酿酒酵母、东方伊萨酵母、拜尔结合酵母、杰丁毕赤酵母以及胶红酵母等菌种分子生物学鉴定。

菠菜叶绿体光系统Ⅱ反应中心D1／D2／cyt b559长寿命荧光组分的来源

通过多频相位调制法测得菠菜叶绿体光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）反应中心Ｄ１／Ｄ２／ｃｙｔｂ５５９复合物的荧光衰减包括４个组分，其寿命分别大约为１、６、２４和７３ｎｓ，所占整个荧光的比例依次为５％、３４％、３５％和２６％。而寿命为６ｎｓ的组分来源于与电荷分离不相关的ｃｈｌａ分子，寿命为１ｎｓ的组分所占的比例很小，其来源不清楚。其中两个长寿命组分都与样品的光化学活性相关，但彼此又是不相关的，很可能来源于电荷分离后的两个不同的重组过程。

关于图的L(d_1，d_2)-标号问题(英文)

图的L(2,1)-标号问题是由频率分配问题归结而来,本文研究作为L(2,1)-标号问题的推广的L(d_1,d_2)-标号问题。首先定义了顶点2-着色,2-色数及其它有关概念,给出了2-色数的上界。然后得出了λ_(d_1,d_2)(G)与δ(G)和Δ(G)的一般关系。最后得出了一般图与平面图的λ_(d_1,d_2)(G)的上界。

光下D1/D2/Cytb559复合物中氨基酸残基的破坏和多肽的降解

光系统Ⅱ反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ５５９ 复合物对光照十分敏感。不仅色素分子，而且多肽链上的氨基酸残基（如组氨酸和甲硫氨酸）均会受到破坏。光照同时引起Ｄ１ 和Ｄ２ 蛋白的降解。在ＳＤＳ聚丙烯酰胺多肽电泳图谱上，Ｄ１／Ｄ２ 二聚体的含量增多，同时有一条分子量大约为４１ ｋＤ的新带出现。在光照后的暗放置过程中，氨基酸组成不再变化，但Ｄ１ 和Ｄ２ 蛋白的降解及大分子量片段的产生仍继续进行。对组氨酸和甲硫氨酸的破坏与Ｄ１、Ｄ２ 蛋白的降解关系进行了初步的分析，推测在光破坏过程中，Ｄ１ 和Ｄ２

光破坏的光系统Ⅱ反应中心D1/D2/Cytb559复合物的CD光谱

ＰＳⅡ反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５５９ 复合物的圆二色（ＣＤ）光谱在红区有一个反向带，其正峰在６８０ ｎｍ ，负峰在６６０ ｎｍ 处。光破坏后，该反应中心复合物的ＣＤ信号明显下降，而且当正峰完全消失后，负峰仍然存在，说明该反应中心的ＣＤ信号不仅来源于原初电子供体Ｐ６８０。

D1/D2/Cyt b-559几个不同寿命组分的荧光发射光谱的分辨

菠菜叶绿体光系统Ⅱ反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ－５５９复合物的荧光衰减包括４个组分，其寿命分别大约为１．０ｎｓ，５．９ｎｓ，２４ｎｓ和７３ｎｓ，所占整个荧光的量子产率依次为０．０５，０．３４，０．３５和０．２６。这些不同寿命组分的荧光发射光谱相互重叠在一起，稳态光谱只显示１个发射峰。根据相调荧光测定的“硬件”分析方法，通过选择检测器的相角，可以选择性地把各个寿命组分的荧光分别滤掉。如果５．

D1/D2/Cytb-559复合物的共振拉曼光谱

光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ－５５９ 复合物在４８８ ｎｍ 处激发的共振拉曼光谱显示４ 个主要谱带，其峰位分别在１５３２（υ１）、１１６５（υ２）、１０１０（υ３）和９７０（υ４） ｃｍ － １处，表明ＰＳⅡ反应中心结合的β－胡萝卜素分子是全反式构型。Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ－５５９ 复合物的色素抽提液的拉曼光谱也显示４ 个主要的拉曼峰，其中υ４ 谱带的强度急剧下降，说明ＰＳⅡ反应中心内部结合的β－胡萝卜素分子与抽提液中自由的β－胡萝卜素分子的构象不同，而与光合细菌反应中心内部的类胡萝卜素分子的构象相似。

D1和D2淋巴结清扫术治疗胃癌的疗效和安全性对比

目的比较胃癌治疗中D1、D2淋巴结清扫术的临床疗效及安全性。方法选取本院2011年1月至2012年3月收治的胃癌患者共60例作为研究对象,依照治疗方式分为对照组和观察组,每组30例。对照组予以D1淋巴结清扫术,观察组予以D2淋巴结清扫术,比较两组患者的临床疗效(1、3、5年生存率)及术后并发症发生情况。结果两组患者的1年生存率比较,差异不具有统计学意义(P>0.05);观察组患者的3年和5年生存率均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的吻合口瘘、胰瘘、切口感染、肺部感染的发生率均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与D1淋巴结清扫术比较,在胃癌根治术中,D2淋巴结清扫术效果更显著,安全性更高,值得临床推广使用。