基于PKD1/HDAC7轴研究丹参酚酸B对大鼠缺血心肌组织的保护作用

目的分析丹参酚酸B(salvianolic acid B,SAB)是否通过调控蛋白激酶D1(protein kinase D1,PKD1)/Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶7(HDAC7)表达而保护大鼠缺血心肌组织并阐述其作用机制。方法♂Wistar大鼠40只,随机分为假手术(Sham),心梗模型(MI),SAB和CID755673阻断剂(CID)组。结扎左冠状动脉前降支复制MI模型,Sham组不进行结扎操作,其他手术程序和MI组保持一致。14 d实验周期中,大鼠均腹腔注射给药,SAB组:50 mg^-1·kg^-1·d^-1,CID组:50 mg^-1·kg^-1·d^-1 SAB+40μg^-1·kg^-1·d^-1 CID,Sham和MI组:等量生理盐水。应用HE、Masson和TUNEL染色法分析心肌组织的受损情况,免疫荧光、免疫组化和免疫印迹等方法分析心肌组织中PKD1和HDAC7的表达。结果在SAB用药后,MI后的心肌组织受损明显减轻,胶原纤维占比下降,凋亡心肌细胞数量减少,伴随着PKD1和HDAC7的表达上调;注射CID可明显抑制SAB的作用。结论SAB可能通过调控PKD1/HDAC7轴而保护缺血受损的心肌组织。

高迁移率族蛋白1通过调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白促进肝内胆管细胞癌进展

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group box1, HMGB1)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)进展中的作用及机制。方法运用免疫组化法检测75例ICC癌组织石蜡标本中HMGB1蛋白表达情况,分析其表达水平与临床病理特征关系;在体外,外源性HMGB1处理细胞及siRNA抑制HMGB1表达后运用CCK-8、细胞迁移、侵袭试验研究HMGB1对肝内胆管癌细胞恶性生物学行为的影响;运用western-blot检测细胞内蛋白。结果免疫组化检测结果显示54.67%(41/75)的肝内胆管细胞癌组织过表达HMGB1蛋白,HMGB1过表达与肿瘤分化程度(P=0.019)、临床分期(P=0.017)及血管侵犯(P=0.033)有明显正相关性。CCK-8结果显示HMGB1可以促进肝内胆管癌细胞HuCCT-1的增殖(P<0.05)。细胞迁移试验显示外源性HMGB1处理后细胞迁移数目增加到空白组的(1.85±0.08)倍(P<0.01);同时,siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞迁移数目减弱到空白组的(0.48±0.04)倍(P<0.01)。同样地,细胞侵袭试验结果显示外源性HMGB1处理后的HuCCT-1细胞穿过基质胶的数目增加到空白组的(1.46±0.05)倍(P<0.01);siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞侵袭数目减弱到空白组的(0.67±0.07)倍(P<0.01)。Western blot结果显示外源性HMGB1处理HuCCT-1细胞后细胞内Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白表达明显增加;siRNA沉默HMGB1表达后细胞内MMP14蛋白表达减弱。结论 HMGB1在肝内胆管细胞癌的进展中发挥作用,其机制可能与调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白相关。

高迁移率族蛋白1对大鼠纤维母细胞样滑膜细胞增殖周期的调控作用

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖周期的调控作用及可能机制。方法:将常规培养大鼠滑膜细胞株RSC364细胞随机分为正常对照组和10μg/LHMGB1刺激组,分别培养6、12和24小时,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞中Cyclin D1/CDK4蛋白表达;免疫细胞化学检测PCNA和p21蛋白表达。结果:HMGB1作用至12和24小时,处于G0/G1期的细胞逐渐减少,G2/M期细胞增多,增殖指数升高分别为(68.00±1.42)和(69.61±5.86),与正常对照组(53.83±4.95)和6小时组(55.98±6.34)相比差异具有统计学意义(P<0.01或0.05)。PCNA和p21蛋白阳性信号均表达于滑膜细胞核内,随着作用时间延长,PCNA蛋白表达增强,阳性细胞数目逐渐增多,而p21蛋白表达减低,阳性细胞数目逐渐下降。HMGB1作用6～24小时CyclinD1蛋白相对表达量逐渐增加,分别为(1.42±0.02)、(1.65±0.03)和(1.67±0.01),与正常对照组(1.00±0.01)相比差异具有显著统计学意义(P<0.01),CDK4蛋白表达量也显著增加分别为(1.26±0.23)、(1.29±0.07)和(1.26±0.03),与正常对照组(1.00±0.0.25)相比差异具有显著统计学意义(P<0.01),但随着刺激时间的延长,其表达量无明显变化。结论:HMGB1可能通过上调细胞周期调控蛋白CyclinD1/CDK4的表达,下调细胞周期抑制剂p21的表达,促进滑膜细胞的增殖和分化。

TLR2在HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及其可能机制

目的:初步探讨HMGB1是否通过Toll like receptor-2(TLR-2)促进小鼠系膜细胞增殖。方法:选取小鼠系膜细胞MMC为研究对象,为了确定HMGB1对小鼠系膜细胞增殖的影响,将小鼠系膜细胞随机分为正常对照组及50、100和200μg/L HMGB1刺激组,分别培养2、4、8和12 h,以BrdU掺入法检测小鼠系膜细胞的增殖水平。为了检测HMGB1对小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16表达的影响,将常规培养的MMC细胞随机分为正常对照组及100μg/L HMGB1刺激组,分别于培养2、4、6、8和12 h收集细胞,采用Real-time PCR及Western blot检测小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16的表达变化。为了明确TLR2表达与HMGB1介导的MMC增殖中的作用,将MMC细胞随机分为正常对照组、HMGB1刺激组(100μg/L)、HMGB1刺激+pYr-3.1-shTLR2组(转染组)、HMGB1刺激+空白质粒组(空白质粒组),刺激8 h收集细胞,Western blot检测pYr-3.1-shTLR2的沉默效果及细胞周期蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16蛋白的表达变化。结果:HMGB1上调小鼠系膜细胞增殖水平;HMGB1时间依赖性上调小鼠系膜细胞TLR2的表达;HMGB1刺激能够上调小鼠系膜细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4 mRNA及蛋白的表达,时间依赖性地降低小鼠系膜细胞中p16的表达;RNA干扰沉默TLR2表达,能够有效地下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中细胞周期蛋白的表达,降低系膜细胞的增殖水平。结论:HMGB1可能通过与小鼠系膜细胞膜表面受体TLR2结合后,通过某种信号途径上调细胞周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,并下调细胞周期依赖性激酶抑制剂p16的表达,推动细胞从G0/G1期进入S期,促使细胞增殖水平提高。

野生型XPD转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响

目的:探讨野生型X P D基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照.用脂质体转染法瞬时转染四组细胞.荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况.提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况.并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化.结果:pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018vs0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞中p53mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019vs0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,cyclin D1mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041vs0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045vs0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,均P<0.01).流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83%,其他组Gl期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义(P<0.05).MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02,与其他组相比,细胞增殖力明显减弱(P<0.01).结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达,增加p53基因表达.

Finite p-groups all of whose proper subgroups have small derived subgroups

Let G be a finite p-group.If the order of the derived subgroup of each proper subgroup of G divides pi,G is called a Di-group.In this paper,we give a characterization of all D1-groups.This is an answer to a question introduced by Berkovich.

基于28S rDNA D1-D2基因片段与16S rDNA部分序列联合分析的叶肢介系统发育研究

叶肢介(Conchostraca)的系统发育问题一直是甲壳动物研究中颇具争议的一个课题。本研究测定了我国2种叶肢介(Eocyzicus mongolianus,Eocyzicus orientalis)的28S rDNA D1-D2区基因序列和16S rDNA E-G区序列,并与GenBank中的20种叶肢介序列一起进行系统发育分析。基于28S rDNA D1-D2区和16S rDNA E-G区联合序列,采用最大简约法、最大似然法和贝叶斯演绎法构建的叶肢介12属系统发育树显示,叶肢介可分为三个支系:圆蚌虫科、刺尾部和光尾部;叶肢介是一个并系类群;光尾部位于双甲目的基部;原隶属于刺尾部的圆蚌虫科与枝角目互为姊妹群,两者组成枝角形类(cladoceramorpha)。我们首次采用28S rDNA和16S rDNA得到与Richter等(2007)和Olesen(2009)基于形态分析相一致的谱系关系。这一结果打破了传统的系统分类体系,意味着原来定义"叶肢介目"的形态特征(包裹躯体的双瓣壳、附肢携卵、具1—2对执握肢)并非"叶肢介"特有,而应解释为双甲类的共同衍征,尽管枝角类的这些性状退化或丢失或有所变异;而复眼整体愈合、尾爪强壮并具两排尾刺等特征(枝角形类+刺尾部)应该是单次起源的;直接发育(缺无节幼虫阶段)、周期性孤雌生殖等特征(枝角形类)也应是单次演化的结果。

云南德钦羊拉铜矿区地层研究

羊拉铜矿区二叠纪嘎金雪山群属巨厚洋盆沉积,实际上由泥盆纪—二叠纪构造岩块高度混杂而成。岩石普遍发生绿片岩相变质作用,缺少古生物化石,原生岩层序难以恢复。本次工作发现牙形石,结合矿区沉积特征和金沙江洋演化历史,将地层修订为下泥盆统江边组岩块、中泥盆统-石炭系岩块、二叠系岩块,讨论了构造演化。