重组人白细胞介素-1受体拮抗剂免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性检测方法的建立及验证

目的 建立用于检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性的方法,并进行验证。方法 分别用3、20、100 mg/kg的rhIL-1Ra注射液经皮下免疫SD大鼠,10只/组,雌雄各半,每天给药2次,间隔至少4 h,连续给药13周,于给药期及恢复期经大鼠颈静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Protein A层析柱纯化经ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性的血清样本。以D10G4·1细胞生物学活性试验为基础建立中和抗体活性检测方法,并验证方法的专属性、灵敏度及精密性。采用建立的方法检测ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性血清的中和抗体活性。结果 随着给药次数的增加,各剂量组大鼠血清抗体滴度逐渐增强,至恢复期时仍有抗体存在,且滴度仍较高。兔抗rhIL-1Ra单抗对rIL-1Ra有明显的中和作用,兔抗rIFN-2b单抗与rIL-1Ra无剂量效应关系;该方法的灵敏度为171.93μg/mL;精密性验证CV均≤20%。ELISA筛选为阳性抗体血清对rhIL-1Ra注射液均可产生中和效应,与ELISA法检测结果相符。结论 本研究建立了用于检测rhIL-1Ra免疫大鼠血清中和抗体活性的方法,具有良好的特异性、专属性及较高的灵敏度,可用于rhIL-1Ra重复给药动物血清中和抗体活性的检测。

重组人白介素-1α生物学活性测定方法的建立

目的建立并优化采用D10.G4.1细胞测定重组人白介素-1α(rh IL-1α)生物学活性的方法,并用于rh IL-1α样品的检测。方法 MTT法测定rh IL-1α促进D10.G4.1细胞增殖能力,从而反映rh IL-1α的生物学活性。结果建立了D10.G4.1细胞增殖法测定rh IL-1α生物学活性的方法。优化后实验条件如下,样品稀释培养基:RPMI1640+10%FBS+0.5%T-STIM with Con A+0.05m M 2-巯基乙醇;样品上板浓度:10ng·m L-1;细胞密度:4×105个/m L;培养时间:72h;样品梯度稀释倍数4倍。利用优化后的实验条件对rh IL-1α样品活性进行3次测定,评价方法的可重复性。结果 3次实验的变异系数为5.7%,符合方法的要求,表明方法重复性好。结论建立了D10.G4.1细胞测定rh IL-1α生物学活性的方法,该方法操作简便,重复性好,可应用于rh IL-1α的生物学活性检测。